药典中核酸残留限量规定

WHO和各国药物注册监管机构一般只允许生物制剂中存在100 pg/剂量以下的残留DNA，特殊情况下不大于10ng/剂量。根据杂质来源和纯化工艺的不同，一般酵母、大肠杆菌表达的生物制品中DNA残留量不超过10ng/剂量，Vero和MDCK细胞表达的疫苗等生物制品中DNA残留量不超过100pg/剂量或10pg/剂量（根据宿主细胞和给药方式的不同，限量要求不同）。

DENARASE® 全能核酸酶

DENARASE®全能核酸酶是一款通过微生物发酵生产的基因工程非限制性核酸内切酶，其基因序列来自粘质沙雷菌（Serratia marcescens），生产菌株是一种安全级别为S1级且不含内毒素的革兰氏阳性芽孢杆菌（Bacillus.sp.） ，大大降低了内毒素污染风险。DENARASE®是c-LEcta GmbH公司在欧盟、美国、中国、印度、日本和韩国的注册商标（https://denarase.com/）。其拥有的自主专利生产工艺，完全采用非动物性原料，不添加抗生素，符合欧盟GMP生产标准，通过ISO9001:2015质量体系认证，核酸酶纯度大于99%，酶活性高，且无蛋白酶活性，是生物制品生产工艺中常用全能核酸酶的典型代表。

DENARASE®全能核酸酶能够降解所有形式的DNA和RNA，包括单链、双链、线性、超螺旋和环状DNA、RNA及基因组DNA，对核酸序列没有特异性。在纯化工艺中使用DENARASE®全能核酸酶，可有效降低细胞裂解液粘度，改善蛋白纯化工艺，高效去除重组蛋白制品核酸污染，大幅降低终产品污染风险，满足法规要求，在细胞治疗、病毒载体疫苗等领域应用广泛。DENARASE®全能核酸酶的DMF已经提交，目前正处于审核阶段。

核酸酶活性的影响因素分析

DENARASE®全能核酸酶在广泛的条件下仍有很强的生物酶活性，跟大多数生物酶一样，核酸酶的活性也会随温度、pH值、Mg2+、缓冲体系和底物浓度等因素的改变而变化。为了更好的发挥核酸酶的活性，帮助使用者更快的摸索出适宜的反应条件，小编为各位提供一组对核酸酶活性影响较大的关键参数指标供参考。（数据来源于厂家验证指导文件）

温度	适宜反应温度为37℃
pH值	适宜pH值范围是8.0-9.0之间
Mg2+	适宜Mg2+浓度范围是1-2mM
单价阳离子浓度	推荐Na+和K+的浓度在100mM以下
消泡乳化剂	4%的消泡乳化剂对核酸酶活性无明显抑制作用
缓冲系统	高浓度的缓冲体系会抑制核酸酶的活性 Tris盐酸缓冲体系活性大于Tris磷酸盐缓冲体系
底物浓度	DNA底物浓度不大于1mg/mL时活性较高

1 温度

核酸酶适宜反应温度为37℃。

2 pH值

不同缓冲体系结果显示，适宜pH值范围在8.0-9.0之间。

3 Mg2+

辅助因子Mg2+适宜浓度范围是1-2mM，当增大Mg2+浓度时，酶活性会下降。

5 消泡乳化剂

消泡乳化剂常被应用于工业生产的发酵液中，实验结果显示，4%的消泡乳化剂对核酸酶活性无明显抑制作用。

6 缓冲系统

高浓度的缓冲体系会抑制核酸酶的活性，在Tris盐酸缓冲体系中酶活性大于Tris磷酸盐缓冲体系。随着Tris磷酸盐缓冲体系中磷酸盐浓度的增加，酶活性降低，然而Mg2+离子浓度的增加会削弱其抑制作用。

DNA1 (standard):Sigma,D1626(salmon testes)

DNA2:Promega,D181A(herring sperm)

DNA3:GE Healthcare,27456501(200-6000 bps)

DNA4:Millipore,262015

7 底物种类及浓度

核酸酶对不同来源的DNA底物,降解的DNA片段长度不同，下图为不同来源DNA底物，浓度在1mg/mL的结果。为了保持核酸酶的高活性，DNA底物浓度应不大于1mg/mL。

DENARASE®全能核酸酶产品信息

货号	规格	酶活	详情
20804-1M	1 MU (1,000,000 Units)	＞250 U/μl	生产和灌装全部符合EU GMP标准；适用于生物制品生产或有GMP要求的应用中添加。
20804-5M	5 MU (5,000,000 Units)	＞250 U/μl
20804-100k	100 kU (100,000 Units)	＞250 U/μl	生产符合EU GMP标准，灌装按照ISO 9001标准执行；适用于生物制品研发或没有GMP要求的应用中添加。
20804-500k	500 kU (500,000 Units)	＞250 U/μl

DENARASE® 全能核酸酶重要参数

c-LEcta GmbH公司为了确保DENARASE®全能核酸酶的稳定和高质量水平，每个批次试剂均满足以下参数的内部验收标准。

酶活: >250 U/μL

纯度: ≥99%

比活度：＞6*105 U/mg

蛋白酶活性：无

内毒素：＜0.25EU/kU

总菌落数：＜250cfu/200μL

免费试用进行中

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