上海金畔生物科技有限公司代理UELANDY荧光染料全系系列产品
YF®488 TUNEL 细胞凋亡试剂盒（绿色荧光）
产品货号: T6013S/T6013L
产品规格: 20T/50T
目录价（元）:1105/2211
推荐仪器：荧光显微镜（主推）、流式细胞仪
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产品概述：
产品货号和产品规格：
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产品货号 |
产品名称 |
产品规格 |
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T6013S |
YF®488 TUNEL细胞凋亡试剂盒（绿色荧光） |
20T |
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T6013L |
50T |
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T6039S |
YF®555 TUNEL细胞凋亡试剂盒（橙红色荧光） |
20T |
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T6039L |
50T |
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T6014S |
YF®594 TUNEL细胞凋亡试剂盒（红色荧光） |
20T |
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T6014L |
50T |
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T6063S |
YF®640 TUNEL细胞凋亡试剂盒（远红荧光） |
20T |
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T6063L |
50T |
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T6067S |
Cy3 TUNEL细胞凋亡试剂盒 |
20T |
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T6067L |
50T |
产品内容：
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组分 规格 |
20T |
50T |
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A. TUNEL Equilibration Buffer
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2×1 mL |
5 mL |
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B. YF®488/555/594/640/Cy3 TUNEL Reaction BufferReaction Buffer×)
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1 mL |
2 × 1.25 mL |
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C. TdT Enzyme |
20 μL |
50 μL |
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D. Proteinase K (2 mg/mL) |
40 μL |
100 μL |
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E. DNase I (2 U/μL) |
5 μL |
13 μL |
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F. 10 × DNase I Buffer |
100 μL |
260 μL |
储存条件
产品介绍
细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体DNA的降解，这种降解非常特异并有规律，所产生的不同长度的DNA片段为180 bp-200 bp的整数倍，表现为琼脂糖凝胶电泳中呈现特异的梯状Ladder图谱。本试剂盒采用TUNEL法，应用末端脱氧核糖核苷酸转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）在凋亡细胞中断裂DNA的3´-OH末端催化掺入YF®/Cy-dUTP，YF®/Cy-dUTP标记的DNA可以用荧光显微镜直接观察或者用流式细胞仪定量。TUNEL法可以选择性的检测凋亡细胞，而非坏死细胞或因辐照和药物治疗而造成的DNA链断裂的细胞。标记的dUTP（如地高辛-dUTP、生物素-dUTP），可以直接进行原位检测，是一种更快速、直接的检测手段。
注意事项
1. 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
说明书：
UE-T6013S/T6013L
MSDS：
MSDS T6013 YF®488 TUNEL Apoptosis Kit (Green fluorescence) [TUNEL Equilibration Buffer]
常见问题解答：
◆为什么出现了一些非特异标记？
1. 有些细胞或组织，比如平滑肌核酸酶或聚合酶活性水平较高，使得DNA全部被切断，易导致假阳性。建议：取出细胞或组织后要立即固定并充分固定，以阻止这些酶的活性，同时设置阴性对照。
2. 内源性过氧化物酶影响，建议：对于肝脏、肾脏等血细胞含量多的组织，适当延长封闭时间和升高过氧化氢的浓度。
3. 固定液浓度过高或过低，导致组织中心部分固定效果不佳，而使得中心部细胞自溶、DNA链出现不规则断裂，产生假阳性。建议：推荐使用4%多聚甲醛。
4. TdT 酶反应时间过长或Tunel反应过程中反应液发生蒸发或渗漏，细胞或组织表面不能保持湿润。注意控制反应时间，并确保TdT 酶反应液能很好地覆盖样品。
5. 石蜡、脂肪、血液、体液等都较易与染料结合，所以组织切片制作时要保持干净、脱蜡要彻底。
6. 有些试剂或细胞存在自发荧光，选择染料时要避开自发荧光的颜色。
◆为什么没有染上荧光？
1. 固定不充分。固定液首选4%多聚甲醛，现用现配。不建议使用乙醇，乙醇固定液对组织的渗透力较弱，影响TUNEL标记效率.
2. 细胞膜和核膜的通透不充分，TdT酶未能到达核内。细胞与冰冻切片，可用0.2% Triton X-100溶液通透5-30min，石蜡切片推荐使用蛋白酶K，37℃通透30 min；不同的细胞和组织所需要的通透时间略有不同，时间太长容易脱片，适当调整。
3. 延长标记时间至2h，并适当增加TdT酶及dUTP的用量。
4. 确定实验对象细胞有凋亡。准备一份DNase I处理的阳性对照，验证TdT酶反应是否正确进行。
◆如何对细胞核进行复染？
可在TUNEL反应结束后对细胞核进行染色。
◆为什么荧光背景高？
1. 支原体污染：可以使用支原体染色检测试剂盒验证。
2. TdT 酶反应时间过长，可以用试剂盒提供的TdT酶稀释液将TdT酶稀释2-5倍后再按照说明书操作，稀释后的TdT酶仅供当日使用。
3. 处于高速分裂和增殖状态中的细胞，有时也会出现细胞核中的DNA 断裂。建议：在非高增殖期取样检测；
4. 有些试剂或细胞存在自发荧光，选择染料时要避开自发荧光的颜色。
5. DAB 孵育时间过长，减少DAB 染色时间。
6. Biotin-X-dUTP 的非特异性结合，在TdT 酶反应之后，再用含0.1% Triton X-100 和1 mg/ml BSA 的PBS 洗三次。
◆标记率低？
1. 乙醇、甲醇或甲醛（市面上购买的甲醛大多含有甲醇）固定的样品标记效率较低（因为在固定时染色质未能与蛋白质交联，而在操作中丢失），采用推荐的固定液。
2. 固定时间过长，导致交联程度过高，减少固定时间。
3. 贴壁细胞如果使用药物诱导凋亡，会细胞皱缩，贴壁黏附力降低，导致凋亡细胞容易脱落。建议：在凋亡诱导结束后，可以对多孔板进行1000g离心5min，然后再吸出培养基并用PBS洗涤。如果没有适合的离心机，请注意操作轻缓，防止发生凋亡的细胞在洗涤时被洗去。后续整个操作也需要轻缓。
◆在蛋白酶K中消化组织样品多久？
大部分组织样品需要充分消化15分钟。最佳的培养时间根据组织类型和厚度而不同。脑组织比其他组织需要更长的蛋白酶处理时间。
◆实验的组织切片应该多厚？
老鼠肠、肾脏、肝脏、心脏和结肠厚度5–20 µm。
使用本产品的文献：
1.Caffeine Targets SIRT3 to Enhance SOD2 Activity in Mitochondria
Huanhuan Xu, Chunxia Gan, Ziqi Gao, Yewei Huang, Simin Wu, Dongying Zhang, Xuanjun Wang，Jun Sheng
Frontiers in Cell and Developmental Biology
参考文献:
1.Apoptosis caused by Hsp90 inhibitor geldanamycin in Leishmania donovani during promastigote-to-amastigote transformation stage
应用方向：细胞凋亡染色&流式分析
2.Notch gain of function in mouse periocular mesenchyme downregulates FoxL2 and impairs eyelid levator muscle formation, leading to congenital blepharophimosis
应用方向：切片染色