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小鼠γ干扰素ELISA试剂盒（Mouse IFN-γ ELISA KIT）

产品货号: M6140S/M6140M/M6140L

产品规格: 24T/48T/96T

目录价（元）:952/1587/2698

推荐仪器：酶标仪

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产品概述：
储存条件
4℃避光保存，有效期见外包装。开封后，保存温度详见说明书。

注：终止液和显色剂具有腐蚀性，一旦接触到液体，请尽快用大量清水冲洗。

产品介绍
Mouse IFN-γ ELISA Kit (Mouse Interferon-γ Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即小鼠γ干扰素 ELISA 试剂盒，可以定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组 IFN-γ浓度。
γ干扰素也称为Ⅱ型干扰素，是细胞因子超家族中 IFN 家族的重要成员，具有广泛的生物学功能，如抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、调控细胞增殖和分化等。小鼠 IFN-γ基因定位于 10 号染色体，在 DNA 水平上 IFN-γ基因与 IFN-α/β基因无同源性。小鼠和人 IFN-γ在 DNA 水平上有 65％左右同源性，在氨基酸水平的同源性只有 40％左右。小鼠成熟 IFN-γ分子由 133 个氨基酸残基组成，以同源双体形式存在，分子量为 40 kDa，其生物学作用有严格的种属特异性。小鼠 IFN-γR 基因定位于第 10 号染色体。IFN-γR 为跨膜糖蛋白，由两个亚单位组成，胞膜外区、跨膜区和胞浆区分别有 228、21 和 223 个氨基酸残基，从胞膜外区结构特征来看，属于细胞因子受体干扰素受体家族，最近命名为 CDw 119。
IFN-γ与受体结合后可活化多种 IFN-γ调节的基因。目前已知，IFN-γ刺激后至少有 20 种蛋白被表达，其中 12 种是 IFN-γ刺激后所特有的。这种表达是由于活化特异的 DNA 结合蛋白使其从胞浆移位到胞核，如干扰素刺激的基因因子 2 (interferon-stimulated gene fac-tor 2, ISGF2)和γ-干扰素激活因子(gamma-interferon activation factor, GAF 或 STAT 91)结合到 IFN 基因启动子中两个称之为 γ 干扰素活化点 (gamma-interferonactivation site, GAS)和干扰素刺激的反应元件(interferon-stimulated response element, ISRE)的位置上。
IFN-γ主要由活化 T 细胞产生，在小鼠，由 Th 1 亚群产生。当抗原、PHA 或 ConA 刺激后 T 细胞分泌 IFN-γ。此外，活化的 NK 细胞也可产生 IFN-γ。其生物学作用具有较严格的种属特异性。在许多病理情况下，IFN-γ作为疾病的标志物的作用已得到证实。病毒感染时，IFN-γ产生。IFN-γ可作为鉴别结核性与非结核性腹水的诊断工具。IFN-γ在结核性腹水中的浓度显著高于非结核性腹水，灵敏度和特异性均达到 100％。IFN-γ对多发性硬化症的免疫治疗的设计及检测有重要意义。在移植物排斥反应临床症状出现前，IFN-γ的表达量增加；I 型糖尿病的初期，IFN-γ的产生显著下降。
本试剂盒采用双抗体夹心 ELISA 法检测样品中小鼠 IFN-γ浓度。在小鼠 IFN-γ单克隆抗体预包被酶标板中加入适度稀释的样品和标准品，其中的 IFN-γ会与其单抗结合，洗去游离成分；加入生物素化的抗小鼠 IFN-γ抗体，抗小鼠 IFN-γ抗体与结合在单抗上的小鼠 IFN-γ结合而形成免疫复合物，洗去游离的成分；加入辣根过氧化物酶标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，洗去未结合的酶结合物；加入显色剂，若反应孔中有 IFN-γ，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂出现蓝色；加终止液变为黄色。在 450 nm 下测 OD 值，小鼠 IFN-γ浓度与 OD 450 值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出样品中小鼠 IFN-γ浓度。

说明书：

 UE-M6140S/M6140M/M6140L    
常见问题解答：

◆背景信号强是什么原因？
1.洗板不充分。将洗涤缓冲液加入孔中洗涤，确保孔区域洗涤充分；确保已在洗涤前弃去所有残留抗体溶液；增加洗涤次数。
2.链亲和素-HRP结合物过量。检查偶联物的稀释度，在推荐的稀释度下使用。
3.封闭不充分。检查封闭液；延长封闭时间。
4.孵育时间过长。缩短孵育时间。
5.样品或标准品中含干扰物质。设置对照。
6.缓冲液受污染。新鲜配置缓冲液。

◆没有信号？
1.试剂添加顺序错误或试剂配制不正确。重复实验；检查试剂配制方法；复核试验试剂添加流程。
2.HRP被叠氮化合物污染。使用新鲜配制的试剂。
3.抗体用量不足。检查是否使用了推荐的抗体量；增加抗体用量（浓度）。
4.使用了含胎牛血清的缓冲液复溶抗体。检查使用的试剂。
5.捕获抗体与板结合较差。使用ELISA板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。
6.缓冲液受污染。新鲜配置缓冲液。

◆整块板呈现规则蓝色？
1.洗板不充分或跳过洗涤步骤未去除残留的非结合过氧化物酶。严格按照说明书洗涤流程操作。
2.底物溶液预混太早不新鲜。底物溶液混合后须立即使用。
3.封板胶纸或试剂储液槽重复使用导致HRP残留污染。每步均需使用新的封板胶纸或试剂储液槽。
4.缓冲液有金属或HRP污染。新鲜配置缓冲液。

◆标准曲线差？
1.链亲和素-HRP结合物量不足。检查倍性稀释是否正确。
2.捕获抗体与板结合较差。使用酶标板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。
3.检测抗体量不足。检查稀释度是否正确。
4.孵育时间不足。延长底物溶液孵育时间。
5.实验操作流程有误。严格按照说明书操作流程。
6.标准曲线稀释计算错误。重新计算制作新的标准曲线。