YF®555 Click-iT EdU 流式检测试剂盒(橙红色荧光) 货号: C6020S/C6020M/C6020L 规格: 5T/20T/50T

上海金畔生物科技有限公司代理UELANDY荧光染料全系系列产品

YF®555 Click-iT EdU 流式检测试剂盒(橙红色荧光)

产品货号: C6020S/C6020M/C6020L

产品规格: 5T/20T/50T

目录价(元):431/1326/2947

推荐仪器:流式细胞仪

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产品概述:

储存条件
-20℃ 避光保存,有效期见外包装。开封后,保存温度详见说明书。

组分

规格

5T

20T

50T

开封后保存温度

稳定性

A. 10 mM EdU

100 µL

0.4 mL

1 mL

-20℃

开封后按指定温度保存可有效放置一年

B. YF® 488/555/594/647A Azide

25 µL

100 µL

250 µL

-20℃,避光

C. 10× Click-iT EdU反应缓冲液

500 µL

2×1 mL

5 mL

2-8℃

D. CuSO4

200 µL

0.8 mL

2× 1 mL

2-8℃

E. Click-iT EdU缓冲液添加物

15 mg

60 mg

150 mg

2-8℃

规格:上述反应次数针对6孔板培养的细胞不同容器的具体用量可参考附表1
荧光光谱数据:YF® 488 Azide495/519 nmYF® 555 Azide555/565 nm
YF®594 Azide590/617 nm;YF® 647A Azide650/670 nm.

产品介绍
细胞增殖检测是评估细胞健康程度、遗传毒性及抗肿瘤药物效果的基础实验手段。检测细胞增殖最精确的方法是 BrdU 法。EdU 法检测试剂盒是BrdU法的革命性突破。EdU (5-乙炔基-2’-脱氧尿苷)是一种嘧啶类似物,在 DNA 合成期整合入 DNA 双链。EdU 法检测基于“点击”反应,一种由铜催化的叠氮化合物和炔烃作用发生共价反应,形成共价键。
本试剂盒中,EdU 含有炔烃,YF®488/555/647A Azide 染料含有叠氮化合物。点击法的 EdU 标记增殖快速有效,易于使用。BrdU 方法需要 DNA 变性(如酸变性、热变性或者用 DNase 消化)暴露出 BrdU,方便 BrdU 抗体结合;而 EdU 法只需标准化的多聚甲醛固定和 Triton X-100 促渗就可以使检测试剂进入细胞,只需少量的叠氮化染料即可非常有效地标记出整合的 EdU。
本试剂盒包含EdU法检测所需要的所有组分,可以用于体外培养细胞的增殖检测。


说明书:

YF®555 Click-iT EdU 流式检测试剂盒(橙红色荧光) 货号:               C6020S/C6020M/C6020L  规格:               5T/20T/50T UE-C6020S/C6020M/C6020L    
常见问题解答:

YF®488/555/594/647有什么区别?

主要就是检测EDU的物质带的荧光基团不同,检测时发射荧光的颜色不同。实验效果相同,可根据偏好或需求进行选择。

EdU试剂盒中,固定后3% BSA in PBS的作用是什么?
清洗步骤中,BSA可以终止掉未反应的甲醛。

能否在活细胞中进行Click-iT EdU检测?
不可以。虽然EdU是对活细胞进行代谢标记,但是叠氮化物检测试剂和缓冲液组分是细胞非透过型,检测信号时的Click反应必须在固定和通透的样品上进行。

质粒转染表达的荧光蛋白检测与Click反应兼容吗?检测顺序是什么?
本产品会影响GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的荧光,故染色后无法直接检测GFP,建议使用GFP抗体间接检测。

观测到较高的本底干扰,这是什么原因所致?如何减少本底干扰?
叠氮化物和炔烃类间Click反应非常有选择性,生物体内几乎不可能有副反应发生,所以本底较高一般是由洗涤不充分造成的。减少本底干扰的最佳方法是增加BSA洗涤的次数。同时,也可在同样的检测条件下设置一组同等处理的无染料或无Click反应对照,以排除自发荧光干扰。此外,您还可在无EdU 体系中进行完整的Click反应,验证Click反应信号的特异性。

为什么标记样品无信号或特异性信号非常低?如何提高信号? 
1.请保证试剂使用时为无色的状态,不要使用已经变黄的添加剂或缓冲液;
2.为确保Click反应试剂能够到达核内,细胞需要充分地固定和通透;
3.由于铜离子能结合到部分试剂上,这会导致催化Click反应的有效浓度降低。所以在Click反应前,不要在任何缓冲液或试剂中引入金属螯合剂(例如EDTA、EGTA、柠檬酸盐等),对某些含有这些物质的实验样品来说,进行Click反应前,可能需要增加额外的洗涤步骤;
4.当铜离子在合适的化合价时,Click反应才有效。Click反应中用到的铜离子为二价铜(Cu2+)。
5.延长Click反应的时间至超过30分钟也并不会提高信号。建议使用新鲜的Click反应试剂再次进行30分钟的孵育,可更有效地提高标记效率。

如何对细胞核进行复染?
试剂盒中配有Hoechst 33342,可以在Click反应后用于细胞核的染色,也可选择使用DAPI。

可以用于检测植物细胞核内的DNA复制吗? 
可以。EdU是小分子,可以穿透植物细胞的细胞壁。

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