植物组织培养是20世纪初发展起来的一门新兴技术，随着这项技术的日益完善，其应用也越来越广泛。但是在组织培养过程中，常常会遇到污染问题使实验无法进行下去，甚至导致整个实验失败，给科研和工厂化生产带来损失。

污染是指在植物组织培养过程中，培养基和培养材料滋生杂菌，最终导致培养失败的现象。常见的污染类型包括：由霉菌引起的真菌性污染、多由外植体带菌引起的细菌性污染、长期多次继代引起的内生菌污染以及农杆菌污染等。面对植物组培污染问题，我们通常采取在培养基中加入适量的抗生素（如青霉素、链霉素、氯霉素等）来抑菌。但是抗生素一般不稳定，遇酸、碱或加热都易分解而失去活性。而且单一抗生素抑菌容易产生抗药性，一旦停止使用，污染率就会显著上升。同时，高浓度的抗生素会影响植物的生长。

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为解决上述问题，我们推荐专业植物组培高效广谱性抗菌剂PPM™，它可以有效预防和清除由于空气、灭菌不彻底、交叉污染、外植体消毒等各种原因导致的植物组培苗的真菌、细菌、内生菌和农杆菌污染。可以加入培养基高温灭菌；而且在合理使用剂量下，不会对植物的生长产生任何影响。

      使用方法如下：

1、      常规污染预防用量：

一般推荐使用浓度为0.05%-0.2%（1L培养基中加入0.5-0.75ml PPM™）；愈伤增殖， 器官形成，胚性组织发育等使用浓度为0.05%-0.075%。

2、      植物内生菌污染处理：

      种子：PPM™不推荐用于直接处理含有大量的细菌或真菌孢子的种子灭菌；对于种子离体萌发，建议先采用传统方法消毒，然后置于含 2-3%PPM™的全培养基础盐溶液中，轻轻搅拌4-12小时，此过程千万不能添加Tween20和调节pH，处理完成以后直接插入含有 PPM™(草本植物0.05-0.1%，木本植物0.2%)的培养基里进行培养。

      外植体：：以 1cm 外植体为例，将外植体置于含 4-5%PPM™的全培养基础盐溶液中，轻轻搅拌4-12小时，此过程千万不能添加 Tween20和调节pH，处理完成以后直接插入含有PPM™(草本植物 0.05-0.1%，木本植物0.2%)的培养基里进行培养。

      块茎，球茎和鳞状物的观赏植物样本：将其整体放入消毒剂中搅拌消毒处理以后， 用水冲洗干净，将材料切成薄片，置于含 4-5%PPM™的全培养基础盐培养液中，轻轻搅拌4-12小时，此过程千万不能添加Tween20 和调节pH，处理完成以后无需冲洗直接插入含有 0.1-0.2%的PPM™的培养基里进行培养。

3、      如果厚的外植体、污染严重的植株、种子等样本经过以上处理仍得不到理想效果，可尝试以下操作：

      将材料浸泡在水中持续搅拌处理(松软组织搅拌1小时，硬实组织搅拌2小时)

      将材料在含50%的PPM™全培养基础盐溶液中搅拌处理5-10分钟，此过程千万不能添加 Tween20 和调节pH

      无需冲洗，将处理过的材料直接加入到培养基中即可。对于真菌污染，可在培养基中加入适当浓度的PPM™。对于真菌细菌混合性污染，建议在培养的第一个月的培养基中加入0.05%-0.2%的PPM™

4、      严重污染材料污染去除与抢救（重污染不超过一周）

      将污染的材料至于流水中用软刷刷洗，然后置于含50% PPM™的无菌水溶液中搅拌5-15分钟；对于细菌或者混合性污染，建议使用 100% PPM™与 0.6g/L 的柠檬酸无菌水溶液按 1：1 混合的低 pH(2.8-3.2)的酸性溶液处理

      处理后的材料无需清洗，直接插入含0.05%-0.25的PPM™的培养基中培养至少一个月以上，其中前10天需要弱光培养

5、      农杆菌的去除

共培养以后，将样本用无菌水清洗，然后将样本浸没在 100% PPM™（补充4X的培养基盐溶液）中处理2分钟，取出后用无菌纸吸干后并置于常用抗性培养基中培养，3 周后，更换到只含有0.05%-0.075% PPM™(无常用抗生素)的培养基中培养。

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      注意事项：

      在所有 PPM™消毒处理外植体的过程中，尽量保证容器的体积足够大，并使外植体材料所有面积与含PPM的处理溶液充分接触，以保证消毒效果；

      如果外植体出现高度氧化现象，不要扔弃，大约50%的外植体在 4-6 周内即可恢复

      50% PPM™ 的处理溶液可以重复使用但是不推荐，因为使用次数和效果受外植体的体积与接种密度的影响。将50% PPM™的处理溶液保存在4ºC可适当延长其活性，一般可使用不超过10次。如果必要，建议配制2份50% PPM™溶液，一份用于外植体消毒内生菌污染，另一份用于消除“培养过程中”的轻度污染材料抢救，第二份溶液在每次处理过后需要用 0.2mm滤器过滤

      如果50%PPM™溶液处理效果不理想，可采用100%PPM™溶液进行处理，处理方法相同，但使用次数不得超过10次。

      产品信息：

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产品已发表文献：

1. Miyazaki J, Tan BH, Errington SG.  Eradication of endophytic bacteria via treatment for axillary buds of Petunia hybrida using Plant Preservative Mixture (PPMTM). PCTOC. 2010;102(3):365-372.
2. Miyazaki J, Tan BH, Errington SG, Kuo JS. Bacterial endophyte in Macropidiafuliginosa: its localisation and eradication from in vitro cultured basal-stem callus. Aust J Bot. 2011;59(4):363-368.
3. Lata H, Chandra S, Khan IA, ElSohly MA. Propagation through alginate encapsulation of axillary buds of Cannabis sativa L. — an important medicinal plant.  Phys and Mol Biol of Plants. 2009;15(1):79-86. 4. Greer SP, Rinehart TA.  Dormancy and Germination In Vitro Response of Hydrangea macrophylla and Hydrangea paniculata Seed to Light, Cold-Treatment and Gibberellic Acid. J. Environ. Hort. 2010;28(1):41–47.
4. Greer SP, Rinehart TA.  Dormancy and Germination In Vitro Response of Hydrangea macrophylla and Hydrangea paniculata Seed to Light, Cold-Treatment and Gibberellic Acid. J. Environ. Hort. 2010;28(1):41–47.
5. Moghaddam S, et al. Optimization of an Efficient Semi-Solid Culture Protocol for Sterilization and Plant Regeneration of Centellaasiatica (L.) as a Medicinal Herb. Molecules. 2011;16(11): 8981-8991
6. Çolgecen H, Koca U, Toker G. Influence of diff erent sterilization methods on callus initiation and production of pigmented callus in ArnebiadensifloraLedeb. Turk J Biol. 2011; 35:513-520
7. Pouvreau J, et al. A high-throughput seed germination assay for root parasitic plants. Plant Methods 2013;9:32
8. Marecik R, Bialas W, Cyplik P, Lawniczak L, Chrzanowski L. Phytoremediation Potential of Three Wetland Plant Species Toward Atrazine in Environmentally Relevant Concentrations. Pol. J. Environ. Stud. 2012;21(3):697-702
9. Pérez Flores J, Aguilar Vega ME, Roca Tripepi R. Assays for the in vitro establishment of Swietenia macrophylla and Cedrelaodorata. Rev. Colomb. Biotecnol. 2012;14(1)
10. Nesterenko-Malkovskaya A, Kirzhner F, Zimmels Y, Armon R. Eichhorniacrassipes capability to remove naphthalene from wastewater in the absence of bacteria. Chemosphere. 2012;87(10):1186-1191.
11. Kieffer M, Fuller MP. In Vitro Propagation of Cauliflower Using Curd Microexplants. Meth Mol Biol. 2013;994:329-339.
12. Kodym A, Temsch E, Bunn E, Delpratt J. Ploidy stability of somatic embryo-derived plants in two ecological keystone sedge species (Lepidospermalaterale and L. concavum, Cyperaceae). Aust J Bot. 2012;60(5):396-404.
13. Peña-Ramírez YJ, et al. Induction of somatic embryogenesis and plant regeneration in the tropical timber tree Spanish red cedar [Cedrelaodorata L. (Meliaceae)]. PCTOC. 2011;105(2):203-209.
14. Haddadi F, Adb Aziz M, Saleh G. Abd Rashid A, Kamaladini H. Micropropagation of Strawberry cv. Camarosa: Prolific Shoot Regeneration from In Vitro Shoot Tips Using Thidiazuron with N6-benzylamino-purine. HortScience. 2010;45(3):453-456.
15. Jimenez VM, Castillo J, Tavares E, Guevara E, Montiel M. In vitro propagation of the neotropical giant bamboo, Guadua angustifolia Kunth, through axillary shoot proliferation. PCTOC. 2006;86:389–395.
16. Compton ME, Koch JM. Influence of Plant Preservative Mixture (PPM) on adventitous organogenesis in Melon, Petunia, and Tobacco. In Vitro Cell. Dev. Biol.- Plant. 2001;37:259-261

上海金畔生物科技有限公司是美国Plant CellTechnology中国代理，为用户提供完善的技术支持与售后服务。

核酸污染清除试剂活性测定试纸

货号 ：A9411.0025

品名 ：ExitusPlus Activity Test（核酸污染清除试剂活性测定试纸）

规格 ：25Tests（25条试纸）

背景介绍：

随着分子生物学的发展，PCR技术以其操作方便，灵敏度高，所以被广泛使用到分子遗传各种研究中，但是也正由于其高灵敏度，使得微量的核酸污染便可造成PCR假阳性结果。裸露的核酸片段、气溶胶中的核酸污染如果得不到有效抑制和清除，就会导致材料，时间，人力和财力的大量浪费和损失。为克服核酸污染这一急需解决的问题，德国AppliChem研发了具有特色的核酸污染清除试剂–DNA-ExitusPlus™ ，这是一种无腐蚀、无致癌性的高效核酸污染清除溶液，该产品可将裸露的核酸降解至无法作为扩增模板的小片段，并无法恢复，从而消除了PCR过程中由于非目的核酸模板而导致的假阳性扩增，收到了广大客户的一致好评，作为实验方法发表于《Nature》（产品货号A7089和A7409）。

在大量订购和使用核酸污染清除试剂–DNA-ExitusPlus过程中，客户经常会遇到以下问题：

1， 由于大量订购产品，部分情况下手中的核酸污染清除试剂（A7089和A7409）未在标定效期内用完， 是否还可以继续使用？（产品是否还具有核酸污染清除能力？）

2， 核酸污染清除试剂（A7089和A7409）用于浸泡耗材时是否可以重复利用？

为了保证客户购买的核酸污染清除试剂更好的利用，AppliChem出品了核酸污染清除试剂活性测定试纸（货号A9411） 以帮助客户解决上述问题。

使用方法：

取待测溶液少许，试纸浸入30秒，取出试纸比色：

1. 比对结果显示在“sufficient efficacy”区间的即为有活性，可以继续使用。
2. 对比结果显示在Frequently re-test区间为临近活性丧失，可以使用，但是要每2天测一次。
3. 对比结果显示在insufficient efficacy区间为活性已丧失无法继续使用

植物组培广泛应用于植物科研：如模式植物，作物育种等；工厂化生产：如观赏花卉植物，中药材生产，园林园艺等，但是组培过程中种苗的污染，尤其是真菌和内生菌的污染是广大工作者十分头疼的问题。美国Plant CellTechnology(简称PCT)专门为植物组织培养而研发的专利产品——Plant Preservative Mixture(简称PPM™,专利号5750402），可以有效抑制由于空气、灭菌不彻底、交叉污染、外植体消毒等各种原因导致的植物组培苗的细菌、真菌和农杆菌污染。

产品特点：

1. 无毒性——PPM是一种热稳定的抗菌剂，用于植物组织培养中植物的微生物污染防治与清除。在合理的使用剂量下，不会对植物的生长（如种子萌发，愈伤增殖、再生等）产生任何影响，可视为培养基标准配方成份；

2. 作用效果好——PPM 主要用于预防和消除来自空气、水源或者人体接触等外界因素导致的植物组培过程中的微生物污染，同时，对于植物内生菌也同样具有非常好的抑制效果；

3. 适用物种广泛——PPM广泛适用于绝大多数被子植物和裸子植物；

4. 使用方便——PPM具有热稳定性，能直接加入培养基高温灭菌而不会影响使用效果，使用更加方便；

5. 性价比高——PPM相对于常规抗生素而言，用量低，性价比更高。

相对抗生素的优势：

1. PPM 能广泛抑制和清除细菌和真菌的污染，并防止真菌孢子的萌发；

2. PPM 是通过抑制多种酶的活性而达到抑菌效果，从而能避免耐药突变体的发生；

3. PPM 具有热稳定性，无需过滤灭菌，能直接加入培养基高温灭菌而不会影响使用效果，使用更加方便；

4. PPM 性价比更高，可更加广泛的应用于更多的科学研究、作物育种、组培苗工厂化生产中。

使用方法：

以下使用指南是针对大多数情况下的常规使用说明，特殊情况可做适当调整。

*说明：MS 盐溶液是泛指，如样本的培养基盐溶液不是MS 盐，以具体适用的培养基盐溶液为准；

产品订购信息：

植物组培微生物污染控制新能手 PTC3 植物组培广泛应用于植物科研：如模式植物，作物育种等；工厂化生产：如观赏花卉植物，中药材生产，园 林园艺等，但是组培过程中种苗的污染，尤其当规模扩大后，污染控制，尤其是真菌的污染清除和抑制是广大工 作者最头疼的问题。 作为全球著名且专业的植物组培产品供应商美国PhytoTechnology Laboratories (简称Phytotech或PTL)专门为 植物组织培养的污染和微生物抑制和清除而研发的专利产品——PTC3 TM(Plant Tissue Culture Contamination Control)，可以有效抑制由于空气、灭菌不彻底、交叉污染、外植体消毒等各种原因导致的植物组培苗的细菌、 真菌和农杆菌污染清除与预防。

相对传统抗生素，如头孢、羧苄等抑制微生物污染，PTC3具有非常明显的优势：

 广谱：能广泛抑制和清除细菌和真菌污染，并防止真菌孢子的萌发

 使用方便：热稳定，无需过滤灭菌，可以直接加入培养基一起高压灭菌，或者无需灭菌直接添加使用

 效果稳定：通过抑制微生物多种酶活而达到抑菌效果，从而避免耐药突变体产生

 用量小：按照 0.02-0.2%(v/v)添加，100ml 的 PTC3可用于 50-500L 体积培养基

培养过程中无添加抗菌剂（左侧）和添加 PTC3（右侧）的抑菌效果对比 www.jinpanbio.com 021-50837765 上海金畔生物科技有限公司 Email:customer@jinpanbio.com 北京：021-50837765 上海： 021-63599871 广州：020-38105753 成都： 028-64600404 全国客服热线：021-50837765 培养过程中无添加抗菌剂、市场同类产品和 PTC3 的对常见 3 种污染微生物的抑制效果（抑菌剂均按照 0.2 v/v%添加），枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、大肠杆菌（Escherichia coli）和农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）的生长率在含有 0.2% (v/v) PTC3 或同类 竞争产品的 MS 培养基均受到明显的抑制 PhytoTech 是美国著名的植物培养基供应商，公司发展至今已成为世界顶级植物研究领域的试剂与原料供应 商。 PhytoTech 是国际最早通过 ISO 9001:2000 质量体系认证的植物组织培养基公司，所有产品均按照 cGMP 标准生产和包装，所有产品的生产过程均受到严格的质量控制，每个产品的物理学、化学、生物学特性都经过了 严格检测，并经过组织培养测试。

除 PTC3以外，还有如下热销产品：

 预混培养基：MS，B5，N6，NB，WPM，LS 等百余种

 凝胶剂：琼脂，结冷胶，卡拉胶等

 抗生素与抗性筛选剂：特美汀，潮霉素 B，草铵膦，草甘膦，G418，头孢，羧苄等

 激素：玉米素，赤霉素，茉莉酸甲酯，IAA，IBA，NAA，2ip，6BA，独脚金内酯等

上海金畔生物科技有限公司自 2006 年开始将 Phytotech 引进中国，是目前 Phytotech 的中国区独家一级代理商， 10 多年优质的产品服务体验得到了国内广大用户的认可。目前在国内，我们备有大量现货，方便大家便捷订购和使用，专业优质的技术服务让您订购无忧。

德国Applichem提供支原体检测/清除/预防全系列产品，给您的细胞更多的安全与保护

为什么要重视细胞培养中的支原体污染？

您的实验结果是否能保证没有受到支原体污染的影响？

世界性难题！！！！Nature最新发布细胞研究领域中支原体污染问题严重性

Ewen Callaway. Contamination hits cell work. Nature, 29 July 2014; doi:10.1038/511518a

1. 污染率高：在细胞研究领域，支原体是臭名昭著的污染源，二十世纪九十年代的支原体污染率是四分之一，而目前有仍然有超过十分之一的基因表达研究（许多曾发表在顶尖杂志上），表现出支原体污染的迹象。
2. 影响日趋严重：虽然支原体污染并不一定意味着研究结果无效，但它会影响数百个基因的表达，并与细胞竞争营养阻碍细胞的生长。在目前测试的一组受污染的数据中（淋巴瘤细胞），已经鉴定出61个被支原体改变的基因，干扰了实验结果。这无疑是对时间，资源，经费极大的浪费；
3. 难察觉：支原体污染完全是不留痕迹的，污染后的细胞生长速率一般并未发生显著的影响，无法用肉眼识别，除非采用专门的支原体检测方法检测；
4. 污染源多：“草率操作”、细胞系流通的交叉污染、操作人员自身都是很重要的污染源；
5. 难去除：支原体体积小，无细胞壁，约有1%的支原体可通过过滤器，且一般抗生素根本无法有效抑制或者去除支原体，另外，部分抗生素使用后会对细胞产生敏感效果，从而影响细胞的状态；
6. 重视程度日益增加：顶尖杂志发表实验结果需验证支原体污染影响，在国际上，支原体污染检测已经日益成为细胞培养污染常规检测之一，有效规避细胞支原体污染。

支原体检测系列

传统的支原体检测方法包括支原体分离培养、支原体特异酶检测、DNA荧光染色检测以及PCR检测，除PCR检测方法以外，其他检测方法大多耗时长，要求检测人员具有丰富的经验，并且无法获得足够的灵敏度和特异性，对于一些稀有的支原体亚种无法有效检测。

Applichem设计的支原体检测试剂盒系列产品均是基于PCR方法，根据支原体16S rRNA保守序列设计引物，经过PCR反应扩增其16S rRNA片段，后采用琼脂糖电泳方法检测270bp条带。相对传统方法而言，具有强大优势：

a)    高灵敏度：敏感度高达100~1000CFU/ml，仅需要0.5 – 1.0 ml细胞上清样本即可检测；

b) 检测品种广泛：可检测常规品种，同时对于稀有亚种也能同效检测，如M. pneumoniae, Acholeplasma laidlawii, M. synoviae, M. pulmonis, M. bovis，几乎覆盖自然界80余个品种；

c)     快速：操作时间只需30分钟，全程5个小时内即可得到检测结果；

d)可靠：试剂盒中包括有阳性对照DNA，可保证实验结果的可重复性，减小因操作而带来的误差；

e)    安全性：无支原体培养过程，有效避免污染扩大；

支原体清除系列

对于普通细胞系，遭受污染以后可以通过重新复苏，购买等途径更换样本，但是对于一些较难获得的样本，如干细胞，原代细胞，经过特殊处理的，或订购困难的细胞，一旦遭受支原体污染后，一定要马上进行处理。Applichem研发的支原体清除的Myco系列产品，可以直接整合到质膜上破坏支原体的完整性，从而有效的清除支原体污染，并可以针对不同程度，不同细胞样本进行针对性处理，处理过程简单，对细胞不会造成任何副作用。

细胞污染预防系列

有效保护细胞的最好方式是对于细胞培养环境的预防，如工作环境定期消毒处理，严格实验操作，保证器皿无菌等各方面。在实验室中，CO₂培养箱，C0₂培养箱水盘，水浴锅是非常重要的污染源。Applichem研发有系列污染预防系列产品专门针对这3大污染源，可有效预防真菌（及芽孢）、细菌、病毒等污染。使用方便，无腐蚀性，安全高效。

作为著名的生化试剂供货商，AppliChem为多家制药、化工等知名企业以及生物技术、生化试剂等著名品牌，如美国Sigma、德国Merck等提供产品。除了作为全球知名生化产品的OEM供货商，全世界还有成千上万的公共科研机构、大学以及生物技术公司通过直接订购，正在使用AppliChem的优质产品和服务。

作为Applichem的中国一级代理商，上海金畔生物科技有限公司为您选择最优的实验室生化试剂解决方案。在Applichem的众多化工、生化及分子生物学等试剂中，除了质量优质、价格低廉外，还有很多特色生化试剂和细胞实验室解决方案。上海金畔生物科技有限公司根据国内科研的现实需求，为客户选择最具性价比的生化试剂和产品解决方案。伴随着与AppliChem合作的加深，不管是在价格、供货质量保障、供货时间以及售后服务方面，上海金畔生物科技有限公司都能为您提供最值得信赖的产品服务。如需了解更多信息请致电021-50837765。

植物组培广泛应用于植物科研：如模式植物，作物育种等；工厂化生产：如观赏花卉植物，中药材生产，园林园艺等，但是组培过程中种苗的污染，尤其是真菌和内生菌的污染是广大工作者最头疼的问题。美国Plant Cell Technology(简称PCT)专门为植物组织培养而研发的专利产品——PPM^TM，可以有效抑制由于空气、灭菌不彻底、交叉污染、外植体消毒等各种原因导致的植物组培苗的细菌、真菌和农杆菌污染清除与预防。

产品特点：

1. 无毒性——PPM^TM是一种热稳定的抗菌剂，用于植物组织培养中植物的微生物污染防治与清除。在合理的使用剂量下，不会对植物的生长（如种子萌发，愈伤增殖、再生等）产生任何影响，可视为培养基标准配方成份；
2. 作用效果好——PPM^TM主要用于预防和消除来自空气、水源或者人体接触等外界因素导致的植物组培过程中的微生物污染，同时，对于植物内生菌也同样具有非常好的抑制效果；
3. 适用物种广泛——PPM^TM广泛适用于绝大多数被子植物和裸子植物；
4. 使用方便——PPM^TM具有热稳定性，能直接加入培养基高温灭菌而不会影响使用效果，使用更加方便；
5. 性价比高——PPM^TM 相对于常规抗生素而言，用量低，性价比更高。

相对抗生素的优势：

1. PPM ^TM能广泛抑制和清除细菌和真菌的污染，并防止真菌孢子的萌发；
2. PPM ^TM是通过抑制多种酶的活性而达到抑菌效果，从而能避免耐药突变体的发生；
3. PPM ^TM具有热稳定性，无需过滤灭菌，能直接加入培养基高温灭菌而不会影响使用效果，使用更加方便；
4. PPM ^TM性价比更高，可更加广泛的应用于更多的科学研究、作物育种、组培苗工厂化生产中。

使用方法：
以下使用指南是针对大多数情况下的常规使用说明，特殊情况可做适当调整。

*说明：MS盐溶液是泛指，如样本的培养基盐溶液不是MS盐，以具体适用的培养基盐溶液为准；
更多详细使用问题，可咨询全国客服热线021-50837765

产品专利说明：

PPM^TM – Plant Preservative Mixture是专利产品，其商品名称，配方及使用方法等都受专利保护，专利号5,750,402。