逆转录病毒克隆载体-重组反转录病毒表达载体

逆转录(也成为反转录病毒,Retrovirus)病毒载体是常用的病毒载体之一。反转录病毒载体在构建时,删去了pol、env基因和gag基因的3′端,但保留了病毒颗粒所需的ψ+序列。其目的是在于提高载体的安全性,防止反转录病毒进入宿主细胞后进行增殖并包装成病毒颗粒对宿主细胞造成可能的伤害。这样,反转录病毒载体就可利

Vector Names Catalog Number
pBABEhygro RTV-001-HYGRO
pBABEneo RTV-001-NEO
pBABEpuro RTV-001-PURO
pMCs-IRES-GFP RTV-040
pMCs-Puro RTV-041
pMXs RTV-010
pMXs-IRES-Blasticidin RTV-016
pMXs-IRES-GFP RTV-013
pMXs-IRES-Neo RTV-015
pMXs-IRES-Puro RTV-014
pMXs-Neo RTV-011
pMXs-Puro RTV-012
pMYs RTV-020
pMYs-IRES-GFP RTV-021
pMYs-IRES-Neo RTV-023
pMYs-IRES-Puro RTV-022
pMYs-Puro RTV-024
pMZs RTV-030

用这些外壳蛋白包装成病毒颗粒在辅助细胞系内大量扩增。反转录病毒载体可以容纳外源DNA的长度在10 kb左右,以很高的转染率感染宿主细胞,特别是分裂中的细胞。转入宿主的细胞后,反转录病毒载体随机整合到宿主细胞基因组内,这种载体还在不断改进之中。

逆转录表达载体种类较多,根据其基本载体骨架分为pBABE、pMCs、pMXs、pMYx等,又有不同筛选标记,hygro(潮霉素)、neo(新霉素)、puro(嘌呤霉素)、Blasticidin(杀稻瘟素)等。很多逆转录病逆转录病毒克隆载体-重组反转录病毒表达载体毒载体包括pBABE和pMXs都是基于莫洛尼鼠白血病病毒 (MMLV),这种逆转录病毒载体在一些非成熟细胞里面被沉默表达,如胚胎瘤细胞、胚胎干细胞和造血干细胞,因此适应面受到限制。而骨髓瘤病毒(MPSV)和PCC4细胞来源的骨髓瘤病毒(PCMV)是MMLV的变种,能很好的在上述非成熟细胞内稳定表达。

Cell Biolabs的pMCs 、pMYs和pMZs都在MMLV启动子的基础上又加上了PCMV或MPSV启动子,后者能使逆转录病毒在EC肿瘤干细胞和ES胚胎干细胞内更稳定表达。特别的,pMYs系统更适合于造血干细胞中的外源基因表达,pMC则更适合在EC和ES细胞内使用。

美国著名细胞产品公司Cell BioLabs为逆转录病毒研究人员提供完备的重组逆转录病毒表达系统及其相关产品和服务,产品包括逆转录病毒的最新一代表达系统,针对逆转录病毒滴度低的软肋而专门设计的逆转录病毒浓缩纯化试剂盒,逆转录病毒的快速定量,以及逆转录病毒高效转染试剂和用于包装重组逆转录病毒的包装细胞系等,几乎覆盖反转录病毒研究中的所有技术环节。如果您对上述逆转录病毒包装细胞系感兴趣,请请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

逆转录病毒转染—ViraDuctin™逆转录病毒高效转染试剂

逆转录病毒载体是常用的病毒载体之一。反转录病毒载体可以容纳外源DNA的长度在10kb左右,以很高的转染率感染宿主细胞,特别是分裂中的细胞,如干细胞等。由于逆转录病毒滴度较低,因此其在某些细胞里的转导效率不是很理想。在逆转录病毒转染细胞的过程中最重要的一步是融合,只有一小部分的逆转录病毒载体才能转导进细胞,因此,逆转录病毒颗粒的吸附是其转导的限速步骤。

在逆转录病毒的转染试验中,多聚阳离子,如聚凝胺®(Polybrene®)由于被发现能促进转染的效率被应用于逆转录病毒逆转录病毒转染—ViraDuctin™逆转录病毒高效转染试剂的转导,其作用机理可能是通过中和细胞与病毒颗粒之间的静电排斥而促进它们之间的贴附。然而在一些特殊类型的细胞里,作为逆转录病毒的转导介质,聚凝胺®(Polybrene®)的表现也不是很理想。逆转录病毒转染—ViraDuctin™逆转录病毒高效转染试剂逆转录病毒转染—ViraDuctin™逆转录病毒高效转染试剂逆转录病毒转染—ViraDuctin™逆转录病毒高效转染试剂

Cell BioLabs针对上述逆转录相关病毒转导过程中的主要问题,开发出ViraDuctin™ 逆转录病毒高效转导试剂(ViraDuctin™ Retrovirus Transduction Kit)。该试剂盒能高效提高逆转录病毒在多种细胞内的转导效率,包括传统转导方法转导较低的细胞非分裂细胞。该转导试剂使用便捷,只需2小时。与Polybrene(聚凝胺)相比,转导效率提高2-6倍,对于难转导的细胞,如原代细胞和干细胞也有非常好的效果。

产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
ViraDuctin™ Retrovirus Transduction Kit RV-200 40次逆转录病毒转染
RV-201 200次逆转录病毒转染

ViraDuctin™ 独有的逆转录病毒高效转导试剂,使用了Cocktail的组合试剂能有效的去除逆转录病毒上清中降低转染效率的抑制物。能有效的提高转染效率,适用于原代细胞和干细胞。该转导试剂分40和200次两种包装规格(以24孔板内一个孔为一次)。

美国著名细胞产品公司Cell BioLabs为逆转录病毒研究人员提供完备的重组逆转录病毒表达系统及其相关产品和服务,产品包括逆转录病毒的最新一代表达系统,针对逆转录病毒滴度低的软肋而专门设计的逆转录病毒浓缩纯化试剂盒,逆转录病毒的快速定量,以及逆转录病毒高效转染试剂和用于包装重组逆转录病毒的包装细胞系等,几乎覆盖反转录病毒研究中的所有技术环节。如果您对上述逆转录病毒包装细胞系感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

逆转录病毒定量—QuickTiter™逆转录病毒快速定量试剂盒

逆转录病毒载体是常用的病毒载体之一。转入宿主的细胞后,反转录病毒载体随即整合到宿主细胞基因组内,这种整合的位点是随机的。逆转录病毒载体就可利用这些外壳蛋白包装成病毒颗粒在辅助细胞系内大量扩增。当通过纯化提取获得重组逆转录病毒颗粒后,需要对病毒液的浓度或感染活性进行定量检测。

一般来说,对于病毒颗粒进行定量主要是通过检测纯化的病毒液中DNA的OD260来检测其病毒含量(Quantitation);而对于病毒颗粒的滴度检测(Titer),则需要通过传统的克隆成斑试验或者对病毒特异蛋白的免疫反应试验等检测。Cell Biolabs为逆转录病毒的定量提供了QuickTiter™快速检测方案。

QuickTiter™逆转录病毒快速定量试剂盒采用了专利的捕获胶技术,能专门结合逆转录病毒颗粒,从而大大缩减试验时间,并提高定量的准确度。其定量试剂盒都能对已经纯化的和未纯化的病毒液进行检测。基本的试验大概程序如下:收集病毒上清,使用核酸酶裂解其中的DNA和RNA杂质,剩下的为病毒颗粒、蛋白及蛋白复合物,然后使用捕获胶吸附上病毒颗粒从而分离出来,洗脱下来后,对逆转录病毒颗粒变性分别获得病毒蛋白及病毒核酸,使用荧光染料标记核酸后进行定量分析。

产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
QuickTiter™ Retrovirus Quantitation Kit VPK-120 荧光法定量,20次分析

Cell Biolabs独有的QuickTiter™ 逆转录病毒快速定量试剂盒通过检测逆转录病毒DNA含量来测定其滴度,可以快速定量已纯化或未纯化的逆转录病毒,通过480/520 nm滤镜荧光仪下读取数据,对照腺标准曲线得出滴度。可以在45-60min内获得数据,检测灵敏,能有效检测1.5 X 109 Viral Particles (VP)/mL浓度内的逆转录病毒,可做20次。

美国著名细胞产品公司Cell BioLabs为逆转录病毒研究人员提供完备的重组逆转录病毒表达系统及其相关产品和服务,产品包括逆转录病毒的最新一代表达系统,针对逆转录病毒滴度低的软肋而专门设计的逆转录病毒浓缩纯化试剂盒,逆转录病毒的快速定量,以及逆转录病毒高效转染试剂和用于包装重组逆转录病毒的包装细胞系等,几乎覆盖反转录病毒研究中的所有技术环节。如果您对上述逆转录病毒包装细胞系感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

逆转录病毒纯化&浓缩——ViraBind™逆转录病毒浓缩纯化试剂盒

逆转录病毒载体是常用的病毒载体之一。反转录病毒载体可以容纳外源DNA的长度在10kb左右,以很高的转染率感染宿主细胞,特别是分裂中的细胞,如干细胞等。反转录病载体多半用于基因治疗,由于病毒载体在宿主细胞基因组上随机插入,人们担心会引起不安全的后果,这种载体还在不断改进之中。

常规的逆转录病毒纯化一般采用超速密度离心法(利用不同大分子,如DNA、蛋白、病毒颗粒、细胞碎片等具有不同的密度进行梯度离心而分离出来的原理)分离病毒颗粒,但是耗时耗力。而且,逆转录病毒的低滴度一直是其软肋。Cell Biolabs为此研制出的拥有专利技术的ViraBind™ 逆转录病毒纯化试剂,再结合新型的纯化装置,能在4-6小时内,每次能将100ml病毒上清纯化500-1000倍,从而获得109-1010TU/ml感染滴度的逆转录病毒颗粒。采用该Kit纯化获得的逆转录病毒液,不含有游离的包装蛋白以及转导抑制物,因此非常有利于后继的逆转录病毒操作。

Cell Biolabs提供两种逆转录病毒纯化方案,一种是用纯化柱装置,另一种是PLUS的采用透析柱装置。前者纯化过程快速,只需3小时;后者采用了透析柱装置,时间上要过夜透析,但是纯度很高。具体纯化步骤及大概区别如下图所示:

逆转录病毒纯化&浓缩试剂盒(离心柱) 逆转录病毒纯化&浓缩试剂盒PLUS(透析柱)

逆转录病毒纯化&浓缩——ViraBind™逆转录病毒浓缩纯化试剂盒

逆转录病毒纯化&浓缩——ViraBind™逆转录病毒浓缩纯化试剂盒

采用专利的ViraBind™试剂,使用离心柱,只需3小时 采用专利的ViraBind™试剂,使用透析柱,需要过夜,但纯度高
   
产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
ViraBind™ Retrovirus Concentration and Purification Kit (100 ml/prep) VPK-130 每次100ml病毒液,2次离心浓缩纯化
VPK-131 每次100ml病毒液,5次离心浓缩纯化
VPK-131-5 每次100ml病毒液,25次离心浓缩纯化
产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
ViraBind™ PLUS Retrovirus Concentration and Purification Kit (50 ml/prep) VPK-135 每次50ml病毒液,2次透析浓缩纯化
ViraBind™ PLUS Retrovirus Concentration and Purification Mega Kit (500 ml/prep) VPK-136 每次500ml病毒液,2次透析浓缩纯化
VPK-136-5 每次500ml病毒液,10次透析浓缩纯化

Cell Biolabs逆转录病毒浓缩纯化试剂盒中普通纯化逆转录病毒Kit每次纯化100ml,分2次/5次/25次三种规格;PLUS纯化Kit分中提(50ml每次)和大提(500ml每次),中提包装可使用2次,大提又分为2次和10次。每次能将100ml病毒上清纯化500-1000倍,从而获得109-1010TU/ml感染滴度的逆转录病毒颗粒。采用该Kit纯化获得的逆转录病毒液,不含有游离的包装蛋白以及转导抑制物,因此非常有利于后继的逆转录病毒操作。

美国著名细胞产品公司Cell BioLabs为逆转录病毒研究人员提供完备的重组逆转录病毒表达系统及其相关产品和服务,产品包括逆转录病毒的最新一代表达系统,针对逆转录病毒滴度低的软肋而专门设计的逆转录病毒浓缩纯化试剂盒,逆转录病毒的快速定量,以及逆转录病毒高效转染试剂和用于包装重组逆转录病毒的包装细胞系等,几乎覆盖反转录病毒研究中的所有技术环节。如果您对上述逆转录病毒包装细胞系感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

逆转录病毒表达载体—Cell Biolabs重组逆转录病毒克隆载体

逆转录病毒载体是常用的病毒载体之一。转入宿主的细胞后,反转录病毒载体随即整合到宿主细胞基因组内,这种整合的位点是随机的。逆转录病毒载体就可利用这些外壳蛋白包装成病毒颗粒在辅助细胞系内大量扩增。反转录病毒载体可以容纳外源DNA的长度在10 kb左右,以很高的转染率感染宿主细胞,特别是分裂中的细胞。

产品名称 货号(点击查看说明书)
pBABEhygro RTV-001-HYGRO
pBABEneo RTV-001-NEO
pBABEpuro RTV-001-PURO
pMCs-GFP RTV-051
pMCs-IRES-GFP RTV-040
pMCs-Puro RTV-041
pMXs RTV-010
pMXs-IRES-Blasticidin RTV-016
pMXs-IRES-GFP RTV-013
pMXs-IRES-Neo RTV-015
pMXs-IRES-Puro RTV-014
pMXs-Neo RTV-011
pMXs-Puro RTV-012
pMYs RTV-020
pMYx-GFP RTV-052
pMYx-IRES-GFP RTV-021
pMYs-IRES-Neo RTV-023
pMYs-IRES-Puro RTV-022
pMYs-Puro RTV-024
pMZs RTV-030

逆转录病毒是一类正链RNA病毒,其分为顺式功能基因和反式功能基因。由于逆转录病毒包膜上有env 编码的糖蛋白能被许多哺乳动物细胞膜上特异性受体所识别,并能介导逆转录病毒的遗传物质高效地进入宿主细胞内;同时逆转录病毒结构基因gag env 和pol的缺乏不影响其他部分的活性,因此可用外源性基因代替这部分病毒基因,外源性基因较大容量为8.0kb左右,可适用于大部分目的基因;并且病毒在自身表达的整合酶催化作用下可高效地整合入宿主细胞染色体中,这有利于外源基因在宿主细胞的永久表达。

目前较常用的逆转录病毒载体为Moloney小鼠白血病病毒改建的各类逆转录病毒载体,逆转录病毒载体其他部分为细菌质粒pBR322基因,便于病毒载体体外大量扩增。Cell Biolabs提供几十种逆转录病毒表达载体。根据其根据其基本载体骨架分为pBABE、pMCs、pMXs、pMYx等;又有不同筛选标记供选择,hygro(潮霉素)、neo(新霉素)、puro(嘌呤霉素)、Blasticidin(杀稻瘟素)等。

Cell Biolabs的逆转录病毒载体pBABE和pMXs都是基于莫洛尼鼠白血病病毒 (MMLV),这种逆转录病毒载体在一些非成熟细胞里面被沉默表达,如胚胎瘤细胞、胚胎干细胞和造血干细胞,因此适应面受到限制。而骨髓瘤病毒(MPSV)和PCC4细胞来源的骨髓瘤病毒(PCMV)是MMLV的变种,能很好的在上述非成熟细胞内稳定表达。Cell Biolabs的pMYXs、pMYs、pMCs和pMZs都在MMLV启动子的基础上又加上了PCMV或MPSV启动子,后者能使逆转录病毒在EC和ES细胞内更稳定表达。特别的,pMYs系统更适合于造血干细胞中的外源基因表达,pMC则更适合在EC肿瘤干细胞和ES胚胎干细胞内使用。

逆转录病毒表达载体—Cell Biolabs重组逆转录病毒克隆载体

美国著名细胞产品公司Cell BioLabs为逆转录病毒研究人员提供完备的重组逆转录病毒表达系统及其相关产品和服务,产品包括逆转录病毒的最新一代表达系统,针对逆转录病毒滴度低的软肋而专门设计的逆转录病毒浓缩纯化试剂盒,逆转录病毒的快速定量,以及逆转录病毒高效转染试剂和用于包装重组逆转录病毒的包装细胞系等,几乎覆盖反转录病毒研究中的所有技术环节。如果您对上述逆转录病毒包装细胞系感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

逆转录病毒包装细胞系—铂金版Plat-E/Plat-A/Plat-GP系列

逆转录(也成为反转录病毒,Retrovirus)病毒载体是常用的病毒载体之一。转入宿主的细胞后,反转录病毒载体随即整合到宿主细胞基因组内,这种整合的位点是随机的。反转录病毒载体就可利用这些外壳蛋白包装成病毒颗粒在辅助细胞系内大量扩增。反转录病毒载体可以容纳外源DNA的长度在10 kb左右,以很高的转染率感染宿主细胞,特别是分裂中的细胞。

逆转录病毒通过整合进目的细胞基因组,能实现持久的表达,而且几乎没有免疫原性,因此很受欢迎。特别是和腺病毒相比,其能整合进基因组的优势导致逆转录病毒也被广泛应用,然后逆转录病毒系统也存在一定的缺陷,首先是安全性比较低,因为所有包装所需的基因都放到一个载体上,还有就是基因能整合进目的细胞也可能会导致细胞基因组的紊乱,而且其滴度比较低。由于逆转录病毒表达系统的特殊性,其包装细胞的种类较多,表达载体的种类也较多,因此需要根据不同的实际来选择合适的表达系统。Cell Biolabs的逆转录病毒表达产品包括包装细胞系、表达系统(同时包括了包装细胞和表达质粒载体)、逆转录病毒表达质粒以及插入了目的基因的重组逆转录病毒表达质粒。

逆转录病毒包装细胞系—铂金版Plat-E/Plat-A/Plat-GP系列Cell Biolabs提供三种铂金版逆转录病毒包装细胞系:单嗜性(Ecotropic)Plat-E包装细胞系、双嗜性(Amphotropic)Plat-A包装细胞系及泛嗜性(Pantropic)Plat-GP包装细胞系。它们对不同的细胞具有不同的侵染性。

Plat-E包装细胞系(Ecotropic)是一种来源于人胚肾(Human Embryonic Kidney, HEK)293细胞系,主要用于快速、短暂地产生高滴度逆转录病毒,同时也能用于稳定地产生逆转录病毒。由Plat-E包装细胞系产生的病毒表达一种单嗜性的被膜,因而只能感染小鼠和大鼠细胞。Plat-GP包装细胞系(Pantropic)也来源于HEK293,但却是一种泛嗜性的包装细胞系,其包装产生的逆转录病毒颗粒既能感染哺乳动物细胞,也能感染非哺乳动物细胞。在使用过程中, Plat-GP细胞需要用逆转录病毒载体和pVSV-G来共转染。VSV-G是泡状口炎病毒(Vesicular Stomatitis Virus) 的被膜糖蛋白,能通过脂质结合及质膜融合来介导病毒进入细胞。因此在使用Plat-GP细胞系时,还需要额外的使用pVSV-G完成包装。Plat-A包装细胞系(Amphotropic)也是一种来源于HEK293细胞的细胞,在将病毒env 基因导入该细胞时利用嘌呤霉素作为选择标记,因而对于一些使用嘌呤霉素作为筛选标记的载体无法使用。

产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
Platinum-E Retroviral Packaging Cell Line, Ecotropic RV-101 单嗜性逆转录包装细胞系,包装病毒可感染小鼠、大鼠,一个包装>3 x 106细胞
Platinum-A Retroviral Packaging Cell Line, Amphotropic RV-102 双嗜性逆转录包装细胞系,包装病毒可感染小鼠、大鼠、人,一个包装>3 x 106细胞
Platinum-GP Retroviral Packaging Cell Line, Pantropic RV-103 多嗜性逆转录包装细胞系,包装病毒感染宿主范围非常广,但是需要额外提供VSVG蛋白,>3 x 106细胞
pVSV-G Packaging Vector RV-110 提供VSVG包膜蛋白

一般来说,Plat-E是最常用的逆转录病毒包装细胞;Plat-GP则是适用性最广的逆转录包装细胞(但是需要多增加一个表达载体pVSV-G Packaging Vector提供外壳蛋白VSV-G,该外壳蛋白宿主范围非常广);Plat-A用的比较少,但是其宿主范围比Plat-E要多一些,比如可应用于人、猴、狗来源的细胞等。

美国著名细胞产品公司Cell BioLabs为逆转录病毒研究人员提供完备的重组逆转录病毒表达系统及其相关产品和服务,产品包括逆转录病毒的最新一代表达系统,针对逆转录病毒滴度低的软肋而专门设计的逆转录病毒浓缩纯化试剂盒,逆转录病毒的快速定量,以及逆转录病毒高效转染试剂和用于包装重组逆转录病毒的包装细胞系等,几乎覆盖反转录病毒研究中的所有技术环节。如果您对上述逆转录病毒包装细胞系感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

慢病毒转染——ViraDuctin™慢病毒高效转导试剂盒

慢病毒载体与其他表达载体相比,较大的优势是它们能感染分裂和非分裂的细胞。这对于众多干细胞和难转染细胞的研究者而言,可谓是一根及时的救命稻草,能解决令人头疼的转染效率低的问题。然而慢病毒本身的转染效率也不是很高。对于一些特殊的细胞类型,一般的转导方法效率是比较低的,甚至于无法实现成功转导。比如干细胞、原代培养细胞等等。由于这样的细胞很难获得,或者非常珍贵,因此在进行基因转导的时候,高效的病毒转导是最优的选择。

在慢病毒转染细胞的过程中最重要的一步是融合,只有一小部分慢病毒载体才能转导进细胞,因此,病毒颗粒慢病毒转染——ViraDuctin™慢病毒高效转导试剂盒的吸附是慢病毒转染的限速步骤。在慢病毒的转染试验中,多聚阳离子,如聚凝胺®(Polybrene®)由于被发现能促进转染的效率被应用于慢病毒的转染,其作用机理可能是通过中和细胞与病毒颗粒之间的静电排斥而促进它们之间的贴附。然而即使采用聚凝胺®(Polybrene®)作为慢病毒转染试剂,在一些细胞类型中的转染效率也不甚理想。

美国著名细胞产品公司Cell BioLabs为慢病毒研究人员提供完备的重组慢病毒表达系统及其相关产品和服务,产品包括慢病毒的最新一代表达系统,针对慢病毒滴度低的软肋而专门设计的慢病毒浓缩纯化试剂盒,慢病毒的滴度滴定及定量,以及慢病毒高效转染试剂和慢病毒宿主细胞等,几乎覆盖慢病毒研究中的所有技术环节。其ViraDuctin™ 慢病毒高效转染试剂(ViraDuctin™ Lentivirus Transduction Kit)能大大提高慢病毒转染效率,比Polybrene(聚凝胺)效率提高2-6倍,对于难转染的细胞,如原代细胞和干细胞效果良好。

产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
ViraDuctin™ Lentivirus Transduction Kit LTV-200  一孔24孔板细胞,40次转染
LTV-201  一孔24孔板细胞,200次转染

该慢病毒转染试剂分40和200次两种包装规格(以24孔板内一个孔为一次),独有的慢病毒高效转染技术,使用了Cocktail的组合试剂能有效的去除慢转录病毒上清中降低转染效率的抑制物。能有效的提高转染效率,适用于原代细胞和干细胞。该Kit也能应用于逆转录病毒的转染。

美国著名细胞学试剂专家Cell BioLabs为您提供全套的慢病毒技术解决方案,ViraSafe™ 最新一代慢病毒表达系统有多种样式供您选择,ViraBind™ 慢病毒浓缩&纯化试剂盒采用了专利技术能让你获得更高滴度和纯度的慢病毒,QuickTiter™ 慢病毒系列提供传统和专利技术的p24不同ELISA检测方法,同时还有采用OD260方法快速定量慢病毒的方案;Cell BioLabs还有专为慢病毒载体用的293LTV细胞及高效转染试剂供您选择,如果您对慢病毒产品感兴趣,请请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询慢病毒相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

慢病毒滴度测定——QuickTiter™慢病毒p24 ELISA滴度检测

慢病毒源于反转录病毒,但又有所不同。在感染能力方面比反转录病毒还强,可有效感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、干细胞等多中类型的细胞,又很少引发基因的免疫反应。在基因治疗中广泛应用的逆转录病毒载体存在的主要问题,是无法高效转导非分裂期细胞。慢病毒载体不但可以感染非分裂期细胞,还具有容纳外源性目的基因片段大、稳定整合持久表达、免疫反应小等优点。

美国著名细胞产品公司Cell BioLabs为慢病毒研究人员提供完备的重组慢病毒表达系统及其相关产品和服务,产品包括慢病毒的最新一代表达系统,针对慢病毒滴度低的软肋而专门设计的慢病毒浓缩纯化试剂盒,慢病毒的滴度滴定及定量,以及慢病毒高效转染试剂和慢病毒宿主细胞等,几乎覆盖慢病毒研究中的所有技术环节。

当通过纯化获得重组慢病毒颗粒后,需要对慢病毒液的浓度或感染活性进行定量检测。一般来说,对于病毒颗粒慢病毒滴度测定——QuickTiter™慢病毒p24 ELISA滴度检测进行定量主要是通过检测纯化的病毒液中DNA的OD260来检测其病毒含量(Quantitation);而对于病毒颗粒的滴度检测(Titer),则需要通过传统的克隆成斑试验或者对病毒特异蛋白的免疫反应试验等检测。Cell Biolabs为慢病毒的定量及滴度提供了全套QuickTiter™系列方案。其中涉及到通过DNA/RNA的OD值检测从而对慢病毒进行定量,详情查看“慢病毒定量——Cell BioLabs慢病毒快速定量试剂盒”;而针对滴度检测,还提供了慢病毒外壳蛋白p24的免疫学ELISA方案。

p24蛋白是慢病毒外壳中含量较大的标志性蛋白。Cell Biolabs提供的基于慢病毒p24蛋白的ELISA分析分两种,一种称为传统的p24蛋白ELISA检测(Quantitation Kit (Traditional HIV p24 ELISA))。能检测所有p24蛋白,从而实现对病毒滴度的定量。分为一次96孔板分析和五次96孔板分析,采用ELISA方法,反应灵敏,可检测1 ng/mL HIV p24蛋白,最后分光光度计读取数据。

产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
QuickTiter™ Lentivirus Quantitation Kit (Traditional HIV p24 ELISA) VPK-108-HIV-p24 ELISA法检测,96次分析
VPK-108-HIV-p24-5 ELISA法检测,96×5次分析

由于病毒颗粒的外壳蛋白p24蛋白是由包装细胞系提供的,因此在使用检测的时候不可避免的会将病毒颗粒本身的p24蛋白与包装细胞系产生的p24蛋白一起检测,造成实验的误差,Cell Biolabs的慢病毒滴度检测Kit解决了这个问题,其QuickTiter™ Lentivirus Titer Kit(Lentivirus-Associated HIV p24)能分离出包装细胞产生的游离p24蛋白,只检测病毒颗粒表面的p24,因此实验数据更真实准确。分为一次96孔板分析和五次96孔板分析,采用ELISA方法,反应灵敏,可检测1 ng /mL HIV p24蛋白,最后分光光度计读取数据。

产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
QuickTiter™ Lentivirus Titer Kit (Lentivirus-Associated HIV p24) VPK-107 ELISA法检测,96次分析
VPK-107-5 ELISA法检测,96×5次分析

美国著名细胞学试剂专家Cell BioLabs为您提供全套的慢病毒技术解决方案,ViraSafe™ 最新一代慢病毒表达系统有多种样式供您选择,ViraBind™ 慢病毒浓缩&纯化试剂盒采用了专利技术能让你获得更高滴度和纯度的慢病毒,QuickTiter™ 慢病毒系列提供传统和专利技术的p24不同ELISA检测方法,同时还有采用OD260方法快速定量慢病毒的方案;Cell BioLabs还有专为慢病毒载体用的293LTV细胞及高效转染试剂供您选择,如果您对慢病毒产品感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询慢病毒相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

慢病毒纯化&浓缩——Cell Biolabs慢病毒浓缩纯化试剂盒

慢病毒虽然在逆转录病毒的基础上进行了很多的优化,但是和腺病毒相比,仍然存在滴度较低的问题。Cell Biolabs为此研制出的拥有专利技术的纯化试剂(ViraBind™ reagents (patented technology)),再结合新型的纯化装置,能在4-6小时内,每次能将100ml病毒上清纯化500-1000倍,从而获得109-1010TU/ml感染滴度的慢病毒颗粒。采用该Kit纯化获得的慢病毒液,不含有游离的包装蛋白以及转导抑制物,因此非常有利于后继的慢病毒操作。

常规的慢病毒纯化一般采用CsCl超速密度离心法(利用不同大分子,如DNA、蛋白、病毒颗粒、细胞碎片等具有不同的密度进行梯度离心而分离出来的原理)分离病毒颗粒,但是耗时耗力。Cell Biolabs提供两种慢病毒纯化方案,一种是用纯化柱装置,另一种是PLUS的采用透析柱装置。前者纯化过程快速,只需3小时;后者采用了透析柱装置,时间上要过夜透析,但是纯度很高。具体纯化步骤及大概区别如下图所示:

慢病毒纯化&浓缩试剂盒(离心柱) 慢病毒纯化&浓缩试剂盒PLUS(透析柱)

慢病毒纯化&浓缩——Cell Biolabs慢病毒浓缩纯化试剂盒

慢病毒纯化&浓缩——Cell Biolabs慢病毒浓缩纯化试剂盒

采用专利的ViraBind™试剂,使用离心柱,只需3小时 采用专利的ViraBind™试剂,使用透析柱,需要过夜,但纯度高
   
产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
ViraBind™ Lentivirus Concentration and Purification Kit (100 ml/prep) VPK-090 每次常规离心浓缩100ml病毒上清,2次
VPK-091 每次常规离心浓缩100ml病毒上清,5次
VPK-091-5 每次常规离心浓缩100ml病毒上清,25次
产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
ViraBind™ PLUS Lentivirus Concentration and Purification Kit (50 ml/prep) VPK-095 每次透析浓缩50ml病毒上清,2次
VPK-096 每次透析浓缩500ml病毒上清,2次
VPK-096-5 每次透析浓缩500ml病毒上清,5次

Cell Biolabs慢病毒浓缩纯化试剂盒中普通纯化慢病毒Kit每次纯化100ml,分2次/5次/25次三种规格;PLUS纯化Kit分中提(50ml每次)和大提(500ml每次),中提包装可使用2次,大提又分为2次和10次。

Cell BioLabs为您提供全套的慢病毒技术解决方案,ViraSafe腺病毒表达系统有多种样式供您选择;多种慢病毒滴度检测和定量试剂为您提供快捷和准确的慢病毒检测方案;ViraBind™慢病毒浓缩和纯化试剂盒采用了专利技术能让你获得更高滴度和纯度的慢病毒,解决了慢病毒低滴度的软肋;Cell BioLabs还有转为慢病毒载体用的293LTV细胞及慢病毒高效转染试剂供您选择,如果您对慢病毒产品感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询慢病毒相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

腺相关病毒转染——Cell Biolabs腺相关病毒高效转染试剂

安全高效的将目的基因导入人体靶细胞是成功进行基因治疗的关键之一。经典的基因导入方式(如显微注射、电穿孔、磷酸钙转染等)虽然曾在科研中起了一定的作用,但由于不能很好的解决转染率、靶向性等问题而限制了它们的应用。随着病毒学等相关学科的发展,目前基因打靶已广泛使用各种病毒为载体,AAV载体是最近几十年发展起来的一类新型载体。作为病毒载体的重要一员,AAV不具有明显的细胞毒性效应并且不会像其他病毒载体那样引起细胞强烈的免疫反应等特性,因为其在基因治疗中的应用潜力引起了人们越来越多的兴趣和关注。

由于AAV是天然的缺陷性病毒,需要提供多个因素才能导致转染发生,因此也被认为是最安全的病毒载体。同时腺相关病毒能感染分裂型和非分裂型细胞,甚至S期静止细胞,这使腺相关病毒成为很有前途和吸引力的基因治疗载体。腺相关病毒的转导过程包括病毒结合、进入细胞以及进入后的作用、核内转移和病毒第二条DNA链的合成。在这过程中,最后一步,也就是AAV第二条DNA链的合成是腺相关病毒载体转染的限速步骤。腺相关病毒转染——Cell Biolabs腺相关病毒高效转染试剂

Cell BioLabs针对腺相关病毒转染过程中的主要问题,开发出ViraDuctin™腺相关病毒转染试剂(ViraDuctin™ AAV Transduction Kit 目录号:AAV-200/AAV-201)。该试剂盒能高效提高腺相关病毒在多种细胞内的转染效率,包括传统转染方法转导较低的细胞非分裂细胞,如原代培养细胞和干细胞。该转染试剂使用便捷,只需2小时,是AAV转染非分裂细胞的首选。该试剂盒按照可转染次数分两种包装,AAV-200能进行10次6孔板或者35mm细胞培养皿的转染,货号为AAV-201的则能进行50次转染。

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ViraDuctin™ AAV Transduction Reagent AAV-200 10次6孔板/35mm细胞转染
AAV-201 50次6孔板/35mm细胞转染

美国著名细胞学试剂专家Cell BioLabs为您提供高效简便的重组腺相关病毒相关产品和服务,产品包括腺相关病毒的纯化、定量和高效转染试剂。ViraBind™腺相关病毒纯化试剂盒采用特殊的纯化Matrix技术,无需超速离心,在大大减少试验时间的同时还保证了AAV的纯度。QuickTiter™腺相关病毒定量试剂盒通过检测腺相关病毒DNA含量来测定其病毒含量,只需2小时。ViraDuction™腺相关病毒转导试剂能极大的增加腺相关病毒在多种细胞内的转导效率,包括传统转染方法转导效率低的非分裂细胞,如原代培养细胞和干细胞。如果您对腺相关病毒产品感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询腺相关病毒相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。