氧化应激（氧化压力）是当生物体内活性氧的生成与清除平衡状态被破坏后而导致氧自由基（ROS）增加的过程。当各种因素打破这一平衡而导致活性氧浓度超过生理限度时就会损伤生物大分子，包括脂质过氧化、DNA的氧化损伤、蛋白质的氧化和单糖氧化等。

目前对于蛋白质氧化损伤的检测指标主要有两个，分别是蛋白羰基生成（羰基化）和二酪氨酸的生成（蛋白质中酪氨酸硝基化）。Cell BioLabs为您提供完整的蛋白质氧化损伤检测方案，其OxiSelect™ Protein Carbonyl Assay Kits（蛋白质羰基化分析试剂盒）专门用于快速检测蛋白质发生氧化应激后，其羰基化程度；OxiSelect™ Protein Nitration (Nitrotyrosine) Assay Kits（蛋白质硝基化分析试剂盒）为检测细胞内蛋白质是否发生硝基化反应提供了便捷的解决方案；而OxiSelect™ AOPP Assay Kits（晚期氧化蛋白产物分析试剂盒）则能快速的检测蛋白氧化后的损伤后果。

在尿毒症时血中存在着氧化损伤的蛋白产物，称为晚期氧化蛋白产物（Advanced oxidation protein products，AOPP）。由活性中性粒细胞产生的氧化物增多，或这些氧化物的清除减少，均可导致AOPP增加。这些氧化物是吞噬细胞尤其是中性粒细胞在呼吸爆裂时产生的大量的反应性氧类物质，为氧分子被单价还原成过氧离子（O^-2）、原始羟基、单价氧和含氯氧化物（HOCl），它们可杀死病原菌，但当宿主的抗氧化系统被抑制时，它也造成组织损伤。

晚期氧化蛋白产物（AOPP）与晚期糖基化终末产物（Advanced Glycation End-Product, AGE）蛋白很相似，也发挥着相似生物功能。通常在肾脏并发症、动脉粥样硬化、系统性硬化以及HIV阳性患者检测上会用到AOPP作为指标。在人体内，当血清白蛋白被自体产生的HOCl和AOPP作用后会引起中性粒细胞和单核细胞的氧化应激反应。虽然AOPP在血液中降解和清除的机理已被阐明，但一些理论认为，肝和脾脏可能在AOPP的分离和清除中发挥了更大的作用。

AOPP分析为检测尿毒症时自由基的相关信息及一些化合物抗氧化性质的筛选提供了便利。实验工作者对检测血浆和组织中的AOPP的检测方案进行了进一步的优化，使测量手段更便捷。AOPP-HSA的浓度可以从氯胺的标准曲线中得出。Cell Biolabs为您提供的AOPP分析试剂盒（AOPP Assay Kit）（目录号：STA-318）提供了一种更简单、可重复和连续的系统，以检测细胞浆、细胞裂解液以及组织匀浆中AOPP的含量。该试剂盒包含了氯胺和人血清白蛋白-AOPP作为阳性对照，您可以通过标准曲线的参照得出最终的实验数值。本试剂盒能进行200次AOPP检测。

上海金畔生物科技有限公司与美国知名细胞试剂服务商Cell BioLabs共同为您定制最优的细胞生物学解决方案，除了蛋白质的羰基化、硝基化以及终末氧化蛋白产物分析等蛋白氧化损伤检测方案；还为您提供脂质过氧化过程中壬烯(HNE)和丙二醛(MDA)检测试剂盒；另外对于核酸DNA、RNA的损伤检测，除了传统的8-OHdG/8-OHG定量、AP位点分析等，还有基于单细胞水平的彗星分析和DNA双链断裂分析；针对活性氧基团和抗氧化剂的活力检测，也由多种试剂和试剂盒供您选择。如果您对以上产品感兴趣，请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询氧化应激及损伤相关的实验解决方案，或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

（图片来源于Hampton Research公司）

因为蛋白质具有离子的性质，理论上蛋白质在合适的条件下是可以结晶的，蛋白质又具有离子不具备的特性，比如蛋白质种类繁多、成分复杂、分子量大等，不像NaCI那样，去掉水就自动结晶，剧烈的条件改变会引起蛋白的变性，使蛋白失去稳定结构而不再可能结晶。

如果想要蛋白质结晶，我们首先需要对目标蛋白有足够的了解，因为影响蛋白质结晶的因素非常多，包括蛋白质的缓冲体系、是否有翻译后修饰、是否有二硫键或游离半胱氨酸、是否有蛋白酶抑制剂存在、蛋白质适合的pH值范围、蛋白质是否为多聚体以及是否为跨膜蛋白等，这些因素都会影响蛋白质结晶的成功与否。

因此，大部分科研工作者会筛选非常多的条件来寻找最优结晶条件，这时我们就需要筛选试剂来辅助蛋白结晶工作。美国Hampton Research公司有非常广泛的产品组合，包括结晶初步筛选、结晶优化筛选、定制单组分结晶试剂和结晶生长优化试剂等。除了筛选试剂外，美国Hampton Research公司还有各种结晶板、配套工具、低温晶体学相关产品和蛋白结晶相关书籍等，为广大蛋白结晶领域的科研工作者提供了方便。

上海金畔生物科技有限公司作为美国Hampton Research公司在中国的官方代理，一直致力于为蛋白结晶领域科研人员提供优质的一站式产品和服务，现将Hampton Research部分热卖产品列表汇总如下，仅供参考，如果您对上述产品感兴趣，欢迎拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或联系在线客服获取更多产品资料。

Hampton Research部分热卖产品列表

美国Hampton Research公司位于加利福尼亚州，成立于1991年，是一家从事蛋白质晶体研究研制的专业公司，为全球科研人员提供全面的蛋白晶体研究试剂、相关工具耗材及完整的晶体培养整体解决方案。美国Hampton Research公司以其先进的生物大分子结晶技术和广泛的生产线，长期以来在蛋白结晶领域拥有很高的知名度，为科研人员提供了方便，促进了蛋白质晶体结构学的研究，为世界范围内的蛋白质晶体研究人员所信赖。

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参考文献：

1. D’Arcy, A., 1994. Crystallising proteins – A rational approach. Acta Crys­tallogr. D 50, 469–471.
2. Hydrogen Ion Buffers for Biological Research. Good, Norman E.,Winget, G. Douglas, Winter, Wilhelmina,Connolly, Thomas N.,Izawa, Seikichi, Singh, Raizada M. M. (1966). Biochemistry. 5 (2): 467–477.
3. Hydrogen ion buffers. Good, Norman E.; Izawa, Seikichi (1972). Meth­ods Enzymol. 24: 53–68.
4. Hydrogen Ion Buffers for Biological Research. Ferguson, W. J.,Braunschweiger, K. I., Braunschweiger, W. R., Smith, J. R.; McCor­mick, J. J., Wasmann, C. C., Jarvis, N. P., Bell, D. H.; Good, N. E. (1980). Anal. Biochem. 104 (2): 300–310.
5. The Biomolecular Crystallization Database version 4: expanded con­tent and new features. Tung, M and Gallagher, DT. 2009 Acta Crystal­lographica D65, 18-23.
6. Nature Structural Biology 10, 980 (2003).
7. Preparation and analysis of protein crystals. Alexander McPherson. 1982. 75-81. John Wiley & Sons.
8. How to Use Dynamic Light Scattering to Improve the Likelihood of Growing Macromolecular Crystals. Gloria E. O. Borgstahl. Methods in Molecular Biology, vol. 363: Macromolecular Crystallography Pro­tocols: Volume 1: Preparation and Crystallization of Macromolecules, Pages 109-129, Edited by: S. Doublié© Humana Press Inc., Totowa, NJ.
9. Light scattering of proteins as a criterion for crystallization. Zulauf, M. and D’Arcy, A. (1992), J. Cryst. Growth 122, 102–106.
10. Dynamic light scattering in evaluating crystallizability of macromol­ecules. Ferré-D’Amaré, A. R. and Burley, S. K. (1997) Meth. Enzymol. 276, 157–166.
11. Protein Crystallization Techniques, Strategies and, Tips. Bergfors, T. M. (1999) International University Line, La Jolla, CA.
12. Thermofluor-based high-throughput stability optimization of pro­teins for structural studies. Ericsson, U.B., Hallberg, M.B., DeTitta, G.T., Dekker, N. & Nordlund, P. Anal. Biochem. 357, 289–298 (2006).
13. High-density miniaturized thermal shift assays as a general strategy for drug discovery. Pantoliano, M.W. et al. Journal of Bimolecular Screen­ing, Volume 6, Number 6, 2001.
14. The use of differential scanning fluorimetry to detect ligand interac­tions that promote protein stability. Niesen, F.H. et al. Nature Protocols, 2212-2221, Volume 2, No. 9, 2007.
15. An improved protocol for rapid freezing of protein samples for long-term storage. Hol, W.G.J. et al, Acta Cryst. (2004). D60, 203-204.
16. The protein as a variable in protein crystallization. Dale GE, Oefner C, D’Arcy A. J Struct Biol. 2003 Apr;142(1):88-97.
17. 蛋白质晶体结构解析原理与技术，北京大学出版社，苏纪勇，姚圆 著

生物体内活性氧的生成与清除处于动态平衡状态，当各种因素打破这一平衡而导致活性氧浓度超过生理限度时就会损伤生物大分子，包括脂质过氧化、DNA的氧化损伤、蛋白质的氧化和单糖氧化等。活性氧对蛋白质的作用包括修饰氨基酸，使肽链断裂，形成蛋白质的交联聚合物，改变构像和免疫原性等五个方面。

目前对于蛋白质氧化损伤的检测指标主要有两个，分别是蛋白羰基生成（羰基化）和二酪氨酸的生成（蛋白质中酪氨酸硝基化）。Cell BioLabs为您提供完整的蛋白质氧化损伤检测方案，其OxiSelect™ Protein Carbonyl Assay Kits（蛋白质羰基化分析试剂盒）专门用于快速检测蛋白质发生氧化应激后，其羰基化程度；OxiSelect™ Protein Nitration (Nitrotyrosine) Assay Kits（蛋白质硝基化分析试剂盒）为检测细胞内蛋白质是否发生硝基化反应提供了便捷的解决方案；而OxiSelect™ AOPP Assay Kits（终末氧化蛋白产物分析试剂盒）则能快速的检测蛋白氧化后的损伤后果。

NO被超氧自由基氧化成（过氧化）亚硝酸离子，能够和蛋白质中的酪氨酸残基发生反应生成3-硝基酪氨酸(Nitrotyrosine)残基，也可以作为蛋白质氧化损伤的指标。但这种指标受到蛋白质样品种类的限制。如牛血清中酪氨酸含量比较多，容易观察到3-硝基酪氨酸的生成；而铜锌超氧化物歧化酶中仅含4个酪氨酸分子，因此一般不易观察到3-硝基酪氨酸的生成。并且，3-硝基酪氨酸的生成有一定的限度。即当3-硝基酪氨酸的生成达到饱和后，继续增加氧化物浓度不再增加3-硝基酪氨酸的量。3-硝基酪氨酸的生成可以用Amado方法，采用325 nm的激发光，415 nm处发射荧光是二酪氨酸的特征。

Cell BioLabs的OxiSelect™ Protein Nitration (Nitrotyrosine) Assay Kits（蛋白质硝基化分析试剂盒），直接检测硝基化蛋白内3-硝基酪氨酸的含量，参照阳性对照硝基化BSA中的3-硝基酪氨酸含量的标准曲线，得到实验数值。该检测方法高效灵敏，对于3-硝基酪氨酸的含量的检测灵敏度达到20nM-8.0μM。试剂盒内包含阳性对照，可完成96次检测。另外，该蛋白质硝基化分析试剂盒为您的蛋白质氧化损伤检测提供了多样选择。您可以根据您的实验要求，选择ELISA（目录号：STA-305/STA-305-5）、免疫印迹（目录号：STA-303）检测方法中的任何一种。

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自由基对蛋白质的作用包括蛋白质肽链断裂、蛋白质分子相互间交联聚合、蛋白质氨基酸发生氧化脱氨反应、氧自由基攻击蛋白质还原性基团、脂类氧化裂解所产生的丙二醛与蛋白质上的氨基产生分子间的交联等。目前对于蛋白质氧化损伤的检测指标主要有两个，分别是蛋白羰基生成（羰基化）和二酪氨酸的生成（蛋白质中酪氨酸硝基化）。Cell BioLabs为您提供完整的蛋白质氧化损伤检测方案，其OxiSelect™ Protein Carbonyl Assay Kits（蛋白质羰基化分析试剂盒）专门用于快速检测蛋白质发生氧化应激后，其羰基化程度；OxiSelect™ Protein Nitration (Nitrotyrosine) Assay Kits（蛋白质硝基化分析试剂盒）为检测细胞内蛋白质是否发生硝基化反应提供了便捷的解决方案；而OxiSelect™ AOPP Assay Kits（终末氧化蛋白产物分析试剂盒）则能快速的检测蛋白氧化后的损伤后果。

蛋白质羰基化是指氨基酸残基侧链中的氨基或亚氨基受到氧自由基攻击最后转变成醛基,并释放NH3的过程。其在体内的形成主要是通过金属离子催化氧化系统完成。在这个过程中，二价铁离子与蛋白质上的氨基酸残基形成铁(Ⅱ)一蛋白质配位复合物。H202作用于此配位复合物的铁(Ⅱ)上，产生·OH、OH-和铁(Ⅲ)一蛋白质配位复合物。·OH从侧链氨基酸上提出一个氢原子，使侧链氨基酸上的碳上有一个不配对电子。在此不配对电子作用下，铁(Ⅲ)一蛋白质配位复合物又重新变回铁(Ⅱ)一蛋白质配位复合物，随后配位键断开，二价铁离子和NH3与复合物分离，由此在蛋白质侧链形成羰基或羰基衍生物。蛋白质中的赖氨酸、精氨酸、脯氨酸、苏氨酸残基都有可能参与糖基化。

蛋白质氧化损伤羰基化的检测目前主要使用2，4-二硝基苯肼法。传统方法多是采用比色法，虽然操作简单但是误差很大，但不能满足精密的蛋白质糖化测定要求。Buss及其同事采用免疫反应的原理使用DNP抗体检测蛋白质羰基化程度，但是在具体的操作中，用TCA沉淀蛋白的时候会有至少20%的总蛋白损失，导致了其结果的不准确。Cell BioLabs的OxiSelect™ Protein Carbonyl Assay Kits（蛋白质羰基化分析试剂盒）则提供了更优的选择，使用该羰基化检测试剂盒，无需蛋白浓缩沉淀从而降低了中间的损失，而且检测灵敏度也由原来的>4 mg/mL大幅提高到10 μg/mL。

OxiSelect™ 蛋白质羰基化分析试剂盒为您提供多种检测方案，您可以根据您的实验要求，选择ELISA（目录号：STA-310/STA-310-5）、免疫印迹（目录号：STA-308）或者分光光度计（目录号：STA-315）检测方面中的任何一种。

上海金畔生物科技有限公司与美国知名细胞试剂服务商Cell BioLabs共同为您定制最优的细胞生物学解决方案，除了蛋白质的羰基化、硝基化以及终末氧化蛋白产物分析等蛋白氧化损伤检测方案；还为您提供脂质过氧化过程中壬烯(HNE)和丙二醛(MDA)检测试剂盒；另外对于核酸DNA、RNA的损伤检测，除了传统的8-OHdG/8-OHG定量、AP位点分析等，还有基于单细胞水平的彗星分析和DNA双链断裂分析；针对活性氧基团和抗氧化剂的活力检测，也由多种试剂和试剂盒供您选择。如果您对以上产品感兴趣，请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询氧化应激及损伤相关的实验解决方案，或索取最新的Cell BioLabs产品资料。