人iPS 细胞·小鼠 ES 细胞冻存用
StemSure® 细胞冻存液 Update！！
本产品是可用于冻存以小鼠 ES 细胞为代表的各种通用细胞株的无血清型细胞冻存液。含 BSA 和 10% DMSO 。标准测试中用小鼠 ES 细胞 D3 株冻存、复苏，确认其细胞存活率。本产品采用缓慢冻存法冻存细胞，无需使用程序降温盒。
使用本产品对小鼠 ES 细胞 D3 株在 -80℃ 进行保存，可冻存２年；普通细胞在 -150℃ 下可冻存 30 个月，并且可维持很高的存活率。
另外，本产品已确认可用于冻存人 iPS 细胞。
◆特点
● 可在维持人 iPS 细胞、小鼠 ES 细胞未分化能力的状态下，直接进行冻存。
● 可在 -80℃ 下进行长时间冻存。
● 冻存的通用动物细胞株的细胞存活率好。
● 无血清型
● 无需自行配制试剂
● 无需使用程序降温盒
◆测试项目
● 细胞存活率时间（使用小鼠 ES 细胞 D3 株进行实验）
● 无菌实验
● 内毒素实验
● 支原体实验
◆使用方法
人 iPS 细胞的冻存
1. 冻存
① 去除人 iP S细胞培养皿中的营养液，用 PBS 清洗后，用 Accutase 等剥离细胞。
② 添加含有 10 μmol/L Y-27632的人 iPS 培养基（hPSC 培养基（+ROCKi）），用移液器吹打成单细胞。
③ 将吹打分散的细胞悬浮液移至样本管，离心（1,000 rpm，3 min，室温）后去除上清液。
④ 添加含 hPSC 培养基（+ROCKi）的培养基，用移液器悬浮。
⑤ 计算细胞数量。
⑥ 以１×106 cells/管分注在细胞悬浮液保存管中。
⑦ 离心（1,000 rpm，3 min，室温）后去除上清液。
⑧ 使用 50 μL/管本产品进行悬浮，在 -80℃ 下进行冻存。
2. 复苏
① 在冻存管中添加 hPSC 培养基（+ROCKi），复苏冻结细胞（不使用温水浴法）。
② 离心（1,000 rpm，3 min，室温）后去除上清，再次添加 hPSC 培养基（+ROCKi），悬浮。
③ 计算细胞数量。
④ 在培养皿中按照２×105 cells/6 cm 进行细胞培养。
小鼠ES细胞、通用动物细胞株的冻存
1. 冻存
① 收集细胞至样本管中。
② 离心，去除上清。
③ 在样本管中加入本产品，悬浮。
④ 分注至悬浮液保存管中。
⑤ 将保存管在-80℃冻洁一晚。
⑥ 保存于-150℃或-80℃
2. 复苏
① 将冻存管置于37℃的水浴槽中解冻。
② 在培养用的培养基中进行悬浮。
③ 离心去除上清后用培养基进行重悬。
④ 在培养容器内培养细胞。
◆人iPS 细胞 201B7 细胞系的冻存 Update！！
将人 iPS 细胞 201B7 株分散为单细胞后，在 StemSure® 冻存液中悬浮，并在-80℃下冻存４天。反复冻结、复苏３次之后，确认细胞存活率和各种未分化标记（Oct3/4、Sox2、SSEA-4、Tra-1-81）的表达。
细胞生存率
未分化标记表达的确认
◆小鼠 ES 细胞 D3 细胞系的冻存
-150℃保存（30个月）
-80℃保存（24个月）
<冻存>
① 在 1 mL本产品中悬浮１~2×106 cells，分注至冻存管中。
② 在 -80℃冻存１天后转移至-150℃冻存。或者在-80℃冻存。
<复苏>
③ 在37℃的温浴槽中复苏。
④ 在细胞培养基中悬浮、离心。
⑤ 弃上清，用细胞培养基重悬细胞并进行培养。
○确认细胞集落形成
培养细胞数：500个细胞/孔（含胶原蛋白涂层的６孔板）
培养时间：10天
◆冻存通用动物细胞系后的细胞存活率
用 StemSure® 细胞冻存液冻存各种动物细胞株。可确认到冻存30个月后仍维持高存活率，且复苏后细胞可移植。
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细胞种类
|
存活率（%）
|
细胞移植
|
|
2个月
|
4个月
|
30个月
|
|
人
|
|
HeLa
|
97
|
93
|
97
|
○
|
|
293T
|
96
|
95
|
95
|
○
|
|
K562
|
91
|
84
|
84
|
○
|
|
灵长类
|
|
COS-7
|
97
|
93
|
92
|
○
|
|
Vero
|
95
|
94
|
91
|
○
|
|
狗
|
|
MDCK
|
98
|
99
|
100
|
○
|
|
小鼠
|
|
NIH/3T3
|
93
|
93
|
89
|
○
|
|
P19
|
93
|
76
|
77
|
○
|
|
STO
|
90
|
91
|
91
|
○
|
|
L929
|
94
|
90
|
91
|
○
|
|
仓鼠
|
|
CHO
|
97
|
96
|
98
|
○
|
<冻存>
① 在 1 mL本品中悬浮 1~2×106 cells，分注至冻存管中。
② 在-80℃冻存1天后转移至-150℃分别冻存２个月、４个月、30个月。
<复苏>
③ 在37℃的水浴槽中复苏。
④ 细胞培养用培养基中悬浮、离心。
★其他冻存液★
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产品编号
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产品名称
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规格
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容量
|
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031-24051
|
CultureSure™ DMSOCultureSure™ 二甲基亚砜
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细胞培养用
|
10 mL×10
|
|
039-23511
|
CultureSure™ Freezing Medium
通用动物细胞用冻存液
|
细胞培养用
|
10 mL
|
◆相关产品
★StemSure® 系列★
本系列产品适用于培养 ES 细胞和 iPS 细胞。每个批次产品都适用小鼠 ES 细胞 D3 细胞系进行品质实验检测。
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产品编号
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产品名称
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规格
|
容量
|
|
197-16275
|
StemSure® D-MEM (High Glucose) with Phenol Red and Sodium Pyruvate
StemSure® D-MEM（高糖）含酚红和丙酮酸钠
|
细胞培养用
|
500 mL
|
|
191-18375
|
Stemsure® Serum Replacement
Stemsure® 血清替代品
|
细胞培养用
|
500 mL
|
|
198-15781
|
StemSure® 10 mmol/L 2-Mercaptoethanol Solution ( × 100)
StemSure® 10 mmol/L 2-巯基乙醇
|
细胞培养用
|
100 mL
|
|
195-15791
|
StemSure® 50 mmol/L Monothioglycerol Solution ( × 100)
StemSure® 50 mmol/L 硫代甘油
|
细胞培养用
|
100 mL
|
|
190-15805
|
StemSure® 0.1w/v% Gelatin Solution
StemSure® 0.1w/v%明胶溶液
|
细胞培养用
|
500 mL
|
|
199-16051
|
StemSure® LIF, Mouse, recombinant, Solution
StemSure® 白细胞抑制因子溶液，小鼠，重组
|
细胞培养用
|
106 units
|
|
195-16053
|
StemSure® LIF, Mouse,recombinant, Solution
StemSure® 白细胞抑制因子溶液,小鼠，重组
|
细胞培养用
|
106 units×10
|
★rBC2LCN-FITC★
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无动物源成分的干细胞冻存液，请点击：StemSure® hPSC冻存液, AF
