Enzo新型活细胞自噬荧光检测试剂盒


Enzo新型活细胞自噬荧光检测试剂盒

Enzo新型活细胞自噬荧光检测试剂盒

 


 自噬是溶酶体介导的胞内降解途径,是真核细胞在恶劣环境(比如营养缺乏)威胁时引发的降解和细胞内容物再循环的过程。这一途径在对各种应激条件进行应答从而在促进细胞内环境平衡、能量平衡和细胞存活上具有重要的作用,更多的证据表明自噬功能与多种疾病密切相关,包括癌症、神经退行性疾病、糖尿病、自身免疫性疾病和心血管疾病。

  2014年6月的Nature杂志刊登细胞自噬在抗帕金森病方面,抑制位于线粒体中的去泛素酶USP30的活性会增强神经元中受损线粒体的自噬和清理,有益于帕金森病的治疗。2013年7月Journal of Clinical Investigation杂志刊登研究II型糖尿病个体自噬作用可抑制毒性的胰岛淀粉样多肽(IAPP)的过量积累,从而保护胰腺β细胞免于受损。研究者希望早日找到保护胰腺β细胞的靶点以开发出II型糖尿病的新疗法。美国加州大学洛杉矶分校的生物学家发现,果蝇机体和大脑的衰老延缓与激活肠道或神经系统中的关键的能量传感器AMPK基因后引起的自噬过程加快密切相关。

  Cyto-ID® 自噬检测试剂盒是Enzo公司的拳头产品,该产品可代替传统LC3-GFP法,通过荧光示踪物来选择性检测自噬通路中的各种囊泡包括自噬前体、自噬体和自溶酶体,用于流式细胞仪,无需转染,就能在荧光显微镜下跟踪活细胞的自噬过程进行定量分析,或用流式细胞仪进行高通量筛选,甚至能标记原代细胞。并且该产品可以进行自噬通路的动力学分析,为研究者展现自噬体形成和消除之间的动态平衡。Cyto-ID® 自噬检测试剂盒也可以与检测其他细胞器的染料结合使用:与Mito-ID® Red联用区分检测细胞自噬和线粒体自噬,与PROTEOSTAT® Protein aggregation assay联用检测聚集小体及小体中的变性蛋白,与Lyso-ID® Red detection kit(GFP-Certified)联用区分检测自噬体和溶酶体,与Lyso-ID® Red cytotoxicity kit(GFP-Certified) kit联用监测自噬与细胞毒性的相关性。

溶酶体的染色极少。

Enzo新型活细胞自噬荧光检测试剂盒

Starvation诱导细胞自噬,左图绿色为自噬体,右图为对照。蓝色为荧光染料Hoechst染细胞核。

◆特点

● 专有染料特异性结合自噬囊泡

● 试剂盒中包含已知活性的自噬抑制剂与诱导剂

● 快速定量监控,全面分析自噬情况

● 无需转染LC3-GFP,省事省力

● 低背景,对其它细胞器染色较低

● 特别适用于筛选自噬激活剂与抑制剂

● 量监测自噬通量和自噬溶酶体的积累

产品编号

产品名称

规格

ENZ-51031-K200

Cyto-ID® Autophagy Detection Kit

200tests

已验证可适用的细胞系

General Cells Cancer Cells
osteosarcoma-derived cells melanoma cells
hepatocytes ovarian cancer cells
Jurkat T cells breast cancer cells
bovine aortic endothelial   cells cervical adenocarcinoma cells
B-lymphoblastoid cells colon adenocarcinoma cells
Chinese hamster ovary (CHO)   cells SK-N-SH neuroblastoma cells


相关活细胞分析产品

产品编号 产品名称 规格
ENZ-51034-0100

Lyso-ID® Green detection kit

for microscopy

100tests
ENZ-51005-0100

Lyso-ID® Red detection kit  

(GFP-Certified®) for microscopy

100tests
ENZ-51015-KP002

Lyso-ID® Red cytotoxicity kit  

(GFP-Certified®) for microplates

1Kit
ENZ-51035-0025

PROTEOSTAT® Aggresome detection kit

for flow cytometry and fluorescence microscopy

25tests
ENZ-52252 MM 4-64 1mg
ADI-905-721-100 Beclin-1, pAb 100µg
ALX-850-057-KI01 p53 (human) ELISA kit 96wells
ADI-960-070

ImmunoSet® p53/MDM2 complex ELISA

development set

5×96wells
ADI-EKS-715 HSP70 high sensitivity ELISA kit 96wells

 

   

Sanpla® 新型塑料烧杯

Sanpla® 新型塑料烧杯

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  • 参考文献

Sanpla® 新型塑料烧杯Sanpla® 新型塑料烧杯

价格合理还可以重复使用!一款绝对值得购买的产品~


Sanpla® 新型塑料烧杯 Sanpla® 新型塑料烧杯

产品编号

产品名称

1660

Sanpla® 新型塑料烧杯100 mL

1661

Sanpla® 新型塑料烧杯200 mL

1662

Sanpla® 新型塑料烧杯300 mL

1663

Sanpla® 新型塑料烧杯500 mL

1664

Sanpla® 新型塑料烧杯1 L

 


◆特点


▪ 聚丙烯(PP)材质,耐药性、耐热性良好;几乎不会有残液。顶部带槽口,便于倾倒液体。

▪ 两侧标有刻度,计量方便。

▪ 可重复使用,能堆叠摆放,节省空间。

▪ 大量订购,可根据需求生产带颜色或标签的产品,详情请咨询。

 

涂料行业、化学品厂家等会选用该产品。

 

产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
1660 Sanpla® 新型塑料烧杯100ml 100 mL
1661 Sanpla® 新型塑料烧杯200ml 200 mL
1662 Sanpla® 新型塑料烧杯300ml 300 mL
1663 Sanpla® 新型塑料烧杯500ml 500 mL
1664 Sanpla® 新型塑料烧杯1L 1 L

新型亲和性外泌体纯化法与外泌体高灵敏度检测应用


新型亲和性外泌体纯化法与外泌体高灵敏度检测应用

新型亲和性外泌体纯化法与外泌体高灵敏度检测应用




◆前言


  外泌体是各种细胞外泌的直径在30-100nm之间的膜囊泡。因外泌体内含mRNA、microRNA等核酸和蛋白质对相邻细胞具有交换信息的功能。作为细胞间信号传导的通讯工具和作为癌等各种疾病的生物标记话题比较热议[1][2]。因此,这几年各领域关于外泌体研究很广泛,但是在现实的外泌体实验技术的发展中,关于需要改进的课题存在很多。例如,在外泌体纯化方法中超离心分离法和多聚体沉淀法(市售试剂盒),容易混入多种杂质,在后续实验中增加了很多障碍。另一方面,抗体亲和性和密度梯度离心可获得高纯度外泌体,但是不能获得完整状态。因此存在着不能分析外泌体完整状态下的生理功能。作为外泌体进一步检测方法,免疫印迹和ELISA被广泛应用。但是存在着需要大量外泌体样本和标记蛋白量少导致检测较困难的问题。

  因此本文为了解决外泌体实验技术中各种课题,我们关于开发的新型外泌体分析工具进行了说明。



◆磷脂酰丝氨酸亲和性新型外泌体纯化法


  外泌体膜虽然含有分泌细胞源蛋白质和脂质,但众所周知磷脂酰丝氨酸(PS)在活细胞通过翻转酶作用导向细胞膜内侧,也会暴露在外泌体膜外侧[3]。另外,被作为通过巨噬细胞进行细胞凋亡的吞噬受体T-cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing protein 4(Tim4)蛋白质通过细胞外域IgV域与含有钙离子的PS结合[4]。以上述知识为参考,我们利用Tim4固化磁珠,在钙离子存在下捕捉培养上清和血清等样品中的外泌体,再添加螯合剂可纯化外泌体,这种划时代外泌体纯化方法是和金泽大学医学系免疫学华山教授共同开发,并取得了成功。[5]并且MagCapture Exosome Isolation Kit PS实现了比以前的外泌体纯化法更加简捷地纯化高纯度完整状态的外泌体。这是迄今为止取代黄金标准超速离心法的新型外泌体纯化法。(图1)


新型亲和性外泌体纯化法与外泌体高灵敏度检测应用

◆PS Capture Exosome ELISA Kit的特点和使用案例


  PS Capture Exosome ELISA Kit是Tim4蛋白通过PS和外泌体亲和性结合的应用ELISA试剂盒。本试剂盒将外泌体表面标记蛋白的抗体固相化,相比以前的ELISA法,可高灵敏度检测外泌体。此方法是将培养上清和血清等含有外泌体的样本添加到Tim4蛋白包被的干板,在钙离子存在下捕获外泌体,通过对外泌体表面标记蛋白质进行一抗结合反应和二抗结合反应,从而完成对外泌体检测(图2)。此外,本试剂盒附加了可作为一抗的小鼠抗CD63单抗,但除此之外,如果测定外泌体表面标记的话,需提前准备小鼠源一抗方可检测外泌体。


新型亲和性外泌体纯化法与外泌体高灵敏度检测应用

  本试剂盒的优点就是实现了比免疫印迹和已有的Exosome ELISA产品更高灵敏度检测外泌体。首先,为了用本试剂盒和免疫印迹法比较检测灵敏度,在免疫印迹实验中需要检查外泌体检测极限值(图3a)。结果显示,以人结肠癌细胞的COLO201细胞源纯化外泌体作为样本通过抗CD63单抗进行免疫印迹实验,检测出蛋白质含量75ng的外泌体。然后,用本试剂盒检测纯化的白血病源细胞株K562细胞以及COLO201细胞源外泌体的ELISA检测极限值,K562细胞源外泌体的检测极限值为49.9pg,COLO201细胞源外泌体检测极限值为10.9pg。免疫印迹实验实际具有1000倍以上的检测灵敏度(图3b)。另外,已有Exosome ELISA产品的灵敏度在数ng~µg之间(参考各产品手册),但是本试剂盒通过PS与Tim4蛋白亲和性结合比原来外泌体表面标记抗体包被ELISA法在灵敏度上高出100倍以上。

新型亲和性外泌体纯化法与外泌体高灵敏度检测应用

  最后,本试剂盒的使用案例为各种细胞源外泌体表面标记蛋白的表达分析。用13种细胞培养上清纯化的外泌体各1ng,通过外泌体标记蛋白CD9/CD63/CD81的抗体进行ELISA检测(图4)。结果显示,在各外泌体中表面标记蛋白的存在比例因来源细胞不同而存在明显差异。有的细胞株分泌不具有特定标记蛋白的外泌体,外泌体异质性高且明显的数据说明本试剂盒的ELISA系统是十分优质的。


新型亲和性外泌体纯化法与外泌体高灵敏度检测应用

◆结论


  综上所述,利用Tim4蛋白的PS亲和性原理的MagCapture Exosome Isolation Kit PS实现了可简便高灵敏度纯化外泌体。PS Capture Exosome ELISA Kit是高灵敏度检测外泌体的划时代产品。为此,通过使用本试剂盒对原方法混入杂质后外泌体标记蛋白确认分类问题和至今为止免疫印迹实验以及已有Exosome ELISA产品微量表面标记蛋白检测困难等问题都可解决。今后本公司将会利用Tim4蛋白的PS亲和性能开发外泌体研究相关试剂。真诚希望这些产品为外泌体研究发展做出贡献。



参考文献


[1] Tkach, M. et al. : Cell, 164, 1226 (2016).

[2] Raimondo, F. et al. : Proteomics,11, 709 (2011).

[3] Trajkovic, K. et al. : Science,319 (5867), 1244 (2008).

[4] Miyanishi, M. et al. : Nature, 450, 435 (2007).

[5] Nakai, W. et al. : Sci. Rep., 6, 33935 (2016).

◆相关产品

1. Exosome外泌体试剂盒

2. PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(抗小鼠IgG POD)

新型无血清细胞冻存:让细胞冻存不再“虐心”


新型无血清细胞冻存:让细胞冻存不再“虐心”

新型无血清细胞冻存:让细胞冻存不再“虐心”




  “在细胞培养的路上,有多虐心就有多少需要值得注意的地方。小小的瓶皿之中,细胞点点,引无数英雄竞挂东南枝。正所谓“万事开头难”,即便是细胞复苏与保存这两件看似简单的事情,也能造成实验汪内心无比巨大的阴影面积。”在2016年10月一篇名为:实验新人必读:细胞培养那些事儿。详细阐述了细胞冻存相关问题。引起了细胞生物学的重视。
 

新型无血清细胞冻存:让细胞冻存不再“虐心”

  在细胞冻存中存在三大问题。一、冻存液的配方;二、冻存的分步降温;三、冻存液稳定性。
  一般的冻存液配方基本具有三要素:培养基、血清、DMSO。培养基的选择要根据细胞种类。血清大多采用动物源血清,但血清中未知成分和感染物质会给冻存带来影响与风险。DMSO在细胞冻存中要保持在5%~15%范围内,过少会影响复苏,过多对细胞有毒性。综上所述,这么多因素制约着细胞冻存,稍不注意让您的细胞研究就会变得很“虐心”。
  细胞冻存时要严格进行梯度降温(-4℃→-20℃~-40℃→-80℃→液氮)。要知道冰火两重天的生活环境只会让娇弱的细胞自爆身亡,谨记:缓降温!但如果真心赶时间时,可以使用细胞冻存盒进行细胞冻存,而后尽快将其转入液氮中。
冻存液稳定性,无血清的稳定性比含血清稳定性高。与含血清类型相比,批次间的成分组成差异小,可保持稳定的品质。不含血清,因此没有因动物源的未知成分和感染物质所产生的影响与风险。可对无血清驯化细胞进行冷冻,节省再驯化步骤。
  日本Wako推出一款无血清细胞冻存液——BAMBANKER®,这款产品是细胞冻存研究的革新,那么它“新”在哪里呢?具有几大特点,无血清、无需分步降温,直接使用、无需程序降温盒,即用型细胞冻存液。完全解决了上述所有的不良因素。


 新型无血清细胞冻存:让细胞冻存不再“虐心”

  那么有些读者要问了,这么优质的冻存液真正在应用方面怎么样呢?下面一张图片可以直观地看到其冻存液的“多样性”。
 

新型无血清细胞冻存:让细胞冻存不再“虐心”


◆相关产品


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Wako新型COX-1选择抑制剂TFAP


Wako新型COX-1选择抑制剂TFAP

    环氧合酶(COX)是用卡拉花生酸在前列腺合成的酶,有COX-1、COX-2两种亚型。使用非甾体抗炎药(NSAIDs),COX-2抑制抗炎症效果的同时,COX-1抑制可能会有对胃肠产生伤害的副作用。近期也有COX-1抑制而对胃肠产生伤害的报告。

TFAP是新型的COX-1选择抑制剂(参考下述IC50值),即使投放大药剂给大鼠,依然对胃肠没有什么伤害,比阿司匹林有更强的镇痛作用。同时,TFAP也可抑制血管的新生。

NSAIDs在诱发炎性机制胃肠粘膜,血管新生的研究里使用。

·化学名:N-(5-amino-3-pyridinyl)-4-(trifluoromethyl) benzamide

·外观:白色~淡褐色,结晶~粉末

·纯度:97.0%+(HPLC)

·溶解性:溶于乙醇( 1mg/1ml )

·保存条件:-20℃保存

·IC50值:COX-1…0.80μM、COX-2…210Μm

大鼠胃溃疡形成实验

a-d) 胃全图;

a) vehicle,

b) TFAP 300mg/kg p.o.,

c) indomethacin 10mg/kg p.o.,

d) c的放大图,

e) Gastric damage score.TFAP, IMN = indomethacin, aspirin 的口服量为、300, 10, 30mg/kg. 平均值 +SEM, n=4/group, ** p < 0.01 versus vehicle.

实验:让大鼠口服各化合物,4小时后开腹检验是否形成胃溃疡,再用显微镜检测生成的溃疡面积大小,其总和用Gastric damage score表示。结果,indomethacin、aspirin投放10mg/kg、30mg/kg就生成溃疡(c,d白色箭头部分),TFAP投放300mg/kg也未见到溃疡形成。

(数据提供:冈山大学研究院医齿药学综合研究科 加来田博貴先生)

镇痛效果实验

a)小鼠醋酸扭体实验 (平均值 +SEM, n=10-11/group) 

b) 大鼠福尔马林实验;

○: vehicle,

▲: indomethacin 30mg/kg p.o.,

■: aspirin 30mg/kg p.o.,

●: TFAP 30mg/kg p.o. (平均值 ±SEM, n=8/group). * p < 0.05, ** p < 0.01 versus vehicle.

实验:让实验动物口服各化合物,在腹腔注射醋酸溶液或在后肢注射福尔马林溶液,再记录动物伸展动作、舔刮行为的次数,以评价镇痛效果。结果显示TFAP有镇痛作用。

(数据提供:冈山大学研究院医齿药学综合研究科 加来田博貴先生)

血管新生抑制实验(CAM法)

平均值 +SEM, n=6/group, * p < 0.05 versus vehicle.

根据CAM法,评价各化合物对鸡蛋浆鸟膜上的血管新生的抑制效果。结果显示,300ng/CAM TFAP对血管新生有抑制作用。

(数据提供:冈山大学研究院医齿药学综合研究科 加来田博貴先生)

产品编号

品名

规格

包装

205-17381

TFAP

细胞生物学用

10mg

关联产品(COX抑制剂)

产品编号

品名

概要

规格

包装

015-10262
017-10261
019-10265

Acetylsalicylic Acid
       [Aspirin]

水杨酸NSAID。
       COX-1选择性抑制剂。
       IC50 COX-1:0.75mM, COX-2:1.25mM

和光特级

25g
       100g
       500g

043-22851

Diclofenac Sodium

杂芳基烷酸类NSAID。
       比COX-1有更强的抑制作用。
       IC50 COX-1:0.075μM,   COX-2:0.038μM

生化学用

10g

055-06971
051-06973

Etodolac

醋酸-吡喃NSAID。
       COX-2选择性抑制剂。

生化学用

10g
       50g

098-02641
094-02643

Ibuprofen
       [(±)-Ibuprofen]

丙酸NSAID。
       非选择性COX抑制剂。

生化学用

1g
       10g

093-02473
097-02471
095-02472

Indomethacin

吲哚乙酸NSAID。
       比COX-1有更强的抑制作用。
       IC50 COX-1:0.013μM, COX-2:1.0μM

生化学用

5g
       10g
       25g

120-05511
128-05512

Loxoprofen Sodium Salt Dihydrate

丙酸NSAID。
       COX-2选择性抑制剂。

药理研究用

1g
       25g

147-07201

(S)-(+)-Naproxen

丙酸NSAID。
       抑制COX。

生化学用

5g

141-07341
147-07343

Niflumic Acid

COX-2选择性抑制剂。
       IC50 COX-1:16μM, COX-2:0.1μM

生化学用

50g
       250g

144-07331
140-07333

NS-398

COX-2选择性抑制剂。
       IC50 COX-1:75μM, COX-2:1.77μM

生化学用

5mg
       25mg

136-14181
132-14183

Meloxicam

oxicam类NSAID。

COX-2选择性抑制剂。

IC50 COX-1:36.6μM, COX-2:4.7μM

生化学用

200mg
       1g

156-02711
154-02712

Oxaprozin

丙酸NSAID。
       比COX-1有更强的抑制作用。

药理研究用

5g
       25g

162-20291
168-20293
166-20294

Piroxicam

oxicam类(NSAID。

非选择性COX抑制剂。

生化学用

1g
       5g
       10g

185-01721
181-01723

Resveratrol

COX-1选择性抑制剂。

对人HDAC SIRT1(ClassⅢ)的活性化也有作用。

生化学用

100mg
       500mg

191-14811

SC-560

强力COX-1选择性抑制剂。
       IC50 COX-1: 9nM, COX-2: 6.3μM

细胞生物学用

5mg

191-03142
195-03145

Sodium Salicylate

水杨酸NSAID。
       选择性抑制COX-2。

试剂特级

25g
       500g

190-12701
196-12703

Sulindac

烯丙基酯类NSAID。

舒林酸是一种药,其硫化物对COX有抑制作用。

选择性抑制COX-1。

生化学用

10g
       50g

功能性抗体和新型小分子化合物


功能性抗体和新型小分子化合物

功能性抗体和新型小分子化合物



Angy-2-1 – 独特和高效的 Angiopoietin-2 封闭抗体


Angiopoietin-2,mAb(rec.)(blocking)(Angy-2-1)                                                                                                   AG-27B-0016

Angiopoietin-2,mAb(rec.)(blocking)(Angy-2-1)(PF)                                                                                         AG-27B-0016PF

                                                                                                                                                                               用于体内研究,提供大包装!


Anry-1-1 – 独特的APRIL 封闭抗体


APRIL(mouse),mAb(rec.)(blocking)(Apry-1-1)                                                                                                               AG-27B-0001

APRIL(mouse),mAb(rec.)(blocking)(Apry-1-1)(PF)                                                                                           AG-27B-0001PF

                                                                                                                                                              抑制mAPRIL 结合mBCMA 和mTACI !

 

Sandy-2– 新型和独特的BAFF 封闭抗体


BAFF(mouse),mAb(blocking)(Sandy-2)                                                                                                                 AG-20B-0063

BAFF(mouse),mAb(blocking)(Sandy-2)(PF)                                                                                                        AG-20B-0063PF

                                                                                                                                                                                                            高性能抗体!

 

9B9- 有效的“B 细胞清除”BAFF-R 抗体


BAFF-R(mouse),mAb(9B9)                                                                                                                                      AG-20B-0034

BAFF-R(mouse),mAb(9B9)(PF)                                                                                                                            AG-20B-0034PF

                                                                                                                                                                                  用于体内研究,提供大包装!


 

FGK45- 激活B 细胞和NK 细胞的标准抗体


CD40(mouse),mAb(FGK45)                                                                                                                                     AG-20B-0036

CD40(mouse),mAb(FGK45)(PF)                                                                                                                           AG-20B-0036PF

                                                                                                                                                             文献引用多次,为行业标准!

 

Bondy-1-1 独特的IL-33 封闭抗体


IL-33(mouse),mAb(rec.)(blocking)(Bondy-1-1)                                                                                                      AG-20B-0013

IL-33(mouse),mAb(rec.)(blocking)(Bondy-1-1)(PF)                                                                                             AG-20B-0013PF

                                                                                                                                                                                     高性能抗体!

 

11E3-LAG-3/MHC Class III 封闭抗体


LAG-3,mAb(blocking)(11E3)                                                                                                                                   AG-20B-0011

1LAG-3,mAb(blocking)(11E3)(PF)                                                                                                                         AG-20B-0011P

                                                                                                                                                                    标准的LAG-3 封闭抗体!


4H8 WH2- 高效激动剂LTβR 的检测抗体


LTβR,mAb(4H8 WH2)                                                                                                                                              AG-20B-0008

LTβR,mAb(4H8 WH2)(PF)                                                                                                                                    AG-20B-0008PF

                                                                                                                                                         误导BAFF,趋化因子和整合素!

 


Nimp-R14- 清除性抗体,用于小鼠中性粒细胞检测


Neutrophils(mouse),mAb(blocking)(Nimp-R14)                                                                                                     AG-20B-0043        

Neutrophils(mouse),mAb(blocking)(Nimp-R14)                                                                                                 AG-20B-0043PF     

                                                                                                                                                             高效清除体内的中性粒细胞!

 

新型小分子化合物


AdipoRon . HCI(water soluble)(AdipoR agonist)                                                                                                             AG-CR1-0156

Eupatilin(PI3K Class I,MKK3/6 and MKK4 inhibitor)                                                                                             AG-CN2-0432

Propionyl-L-carnitine . HCI(Energy regulator)                                                                                                      AG-CR1-3595

Cephalochromin(Anticancer compound)                                                                                                                    BVT-0440

Pentabromopseudilin(Potent myosin ATPase inhibitor)                                                                                             BVT-0441

 

Betatrophin——新型胰岛素激素


Betatrophin——新型胰岛素激素

Betatrophin( 也被称为RIFL、Lipasin 或者Angiopoietin-likeprotein8 (ANGPTL8))是新发现的分泌蛋白,有198 个氨基酸,在小鼠体内可以促进β 细胞增殖、提高葡萄糖耐受性,此外可能也有抑制脂肪酶活性、调节血清中甘油三酯的功能。Betatrophin 在小鼠的肝脏、白色脂肪与棕色脂肪中表达;而在人的肝脏中高效表达。Betatrophin 水平在胰岛素抵抗与妊娠时会显著升高。虽然Betatrophin 的机制还不明确、它的受体还有待发现,但是这个激素可以控制β 细胞增殖,对于治疗糖尿病是否开启了一扇新的大门?

Betatrophin——新型胰岛素激素

参考文献

   [1] Betatrophin: a hormone that controls pancreatic β cell proliferation:P. Yi, et al.; Cell 153, 747 (2013)

   [2] Atypical angiopoietin-like protein that regulates ANGPTL3: F.Quagliarini, et al.; PNAS 109, 19751 (2012)

   [3] Identification of RIFL, a novel adipocyte-enriched insulin targetgene with a role in lipid metabolism: G. Ren, et al.; Am. J. Physiol.Endocrinol. Metab.303, 

   [3] E334 (2012)

   [4] Lipasin, a novel nutritionally-regulated liver-enriched factor thatregulates serum triglyceride levels: R. Zhang; BBRC 424, 786 (2012


产品编号

产品名称

规格

AG-40B-0145-C010

Betatrophin   (human):Fc (human) (rec.)

10 μg

AG-40B-0145-3010

3 x 10 μg

AG-40B-0144-C010

Betatrophin   (mouse) (rec.)

10 μg

AG-40B-0144-3010

3 x 10 μg

产品编号

产品名称

规格

AG-40B-0145-C010

Betatrophin   (human):Fc (human) (rec.)

 

10 μg

AG-40B-0145-3010

3 x 10 μg


       来源: HEK 293 细胞

       序列: 小鼠Betatrophin氨基酸序列(22-198)C端融合人IgG1的FC片段

       形态: 冻干粉

       溶解:可重悬于100_l灭菌水中

       内毒素含量:<0.1 EU/_g纯化蛋白 (LAL test: Lonza)

新型组织化学染色脱色法


新型组织化学染色脱色法

新型组织化学染色脱色法

本文摘自和光纯药时报 Vol.87 No.4(2019年10月号),由麻布大学兽医学部 解剖第二研究室 小泽秋沙执笔撰写。

 

本法是一种可使临床检查或研究中最常用的组织化学染色苏木精-伊红(HE)或Masson法(MT)染色的组织切片脱色,并可重新用于其他染色的方法。

迄今为止,每一种组织化学染色通常都需要使用至少一片组织切片,因此必须准备与组织化学染色方法相对应数量的组织切片。然而,由于制备组织切片时的技术熟练度以及组织样品状态、大小等原因,有时很难备齐多个适合评价的组织切片。另外,在评价同一细胞时一般使用连续切片的方法,然而即使获得了合适的连续切片,想要观察的组织结构和细胞内结构,也可能不同时存在于两个相邻的组织切片上。

在这种情况下,重复利用已有观察特征的细胞或结构的组织切片就会十分有用。HE染色可获取组织大致特征,因此是首次染色的代表染色法之一,如果可以对HE染色后的目标结构的组织切片进行重新染色,便可以提高临床检查以及研究结果的准确性。

至今为止,组织切片脱色通常使用乙醇与盐酸的混合溶液、含有草酸、高锰酸钾的溶液。然而,这些脱色方法都会影响组织切片在脱色后的再染色效果。

实际上,在乙醇中加入盐酸的溶液不能对苏木精等染料充分脱色。而通过高锰酸钾、草酸脱色则会对组织切片造成很大的损害,重新染色时组织结构可能会因为切片剥离被破坏,从而限定了再染色的方法,也限制了组织切片的再利用。因此,学界期待开发一种几乎不会损害组织切片,并且可以对多种染色法进行脱色后再染色的全新方法。

这次,FUJIFILM Wako开发的deColorizing Solution,可以对HE染色后确认了组织状态(特定的结构及细胞的存在)的切片脱色,再重新用于其他染色,从而能够从同一组织切片中获得更多信息。该方法的特点在于可以对原本难以脱色的苏木精、铁苏木精进行脱色。

使用方法:首先将染色后密封的载玻片标本浸入二甲苯等有机溶剂中,直至盖玻片自然剥落。请注意,在此过程中若是强行分离盖玻片可能会破坏组织切片。

另外,若在组织切片上仍然残留有封固剂的状态下就进行下一步骤,水溶性色素在水合后不会脱落,会降低随后使用deColorizing Solution进行脱色的效果,因此必须使用二甲苯等有机溶剂充分浸泡。必须注意的是,标本越旧,封固剂的固化越牢固,封固剂就越难去除。

其次,将组织切片依次用各种浓度的乙醇进行水合,最后浸入蒸馏水中。在水合过程中,伊红等水溶性色素基本脱色,组织切片上仅残留染色的苏木精。将残留苏木精染色的组织切片浸入按照使用浓度稀释的deColorizing Solution 1中。脱色主要取决于组织切片染色后保存的时长,但苏木精在室温下于deColorizing Solution 1中浸渍1 h基本就能脱色。

铁苏木精脱色时需要在deColorizing Solution 1中浸渍1 h后使用蒸馏水清洗3次,然后浸渍于deColorizing Solution 2。通过光学显微镜确认脱色程度(染色残留情况),确认不会影响下次染色后,浸渍于蒸馏水并清洗3次,这时可用于重新染色。

目前,在使用deColorizing Solution脱色后,可以使用的再染色方法已确认的有HE染色、PAS染色、MT染色和免疫组织化学染色。

图1和图2分别是小鼠海马体以及肝脏在HE染色后使用deColorizing Solution按照上述步骤脱色后的图片。如图1A及图2A所见,包括细胞核在内,被苏木精染色的部分在图1B及图2B中大部分已被脱色。

新型组织化学染色脱色法

图1.  使用deColorizing Solution 1脱色HE 染色后的组织切片并重新染色

A:HE染色的小鼠海马体组织图像

B:使用deColorizing Solution 1脱色后与A相同位置的组织图像

C:脱色后使用抗Iba1抗体进行荧光免疫组织化学染色后与A和B相同位置的组织图像

新型组织化学染色脱色法

图2. 使用deColorizing Solution 1脱色HE 染色后的组织切片并重新染色

A:HE染色的小鼠肝脏组织图像

B:使用deColorizing Solution 1脱色后与A相同位置的组织图像

C:脱色后使用抗PCNA抗体进行免疫组织化学染色后与A和B相同位置的组织图像

另外,图3为小鼠肝脏以及肾脏在MT染色后使用deColorizing Solution 1和2脱色后的图像。图3A和C中包括细胞核在内,被铁苏木精染色的大部分在图3B和D中均已完全脱色。

新型组织化学染色脱色法

图3. 使用deColorizing Solution 1和2对MT 染色后的组织切片脱色

A:MT染色后的小鼠肝脏组织图像

B:使用deColorizing Solution 1和2脱色后与A相同位置的组织图像

C:MT染色后的小鼠肾脏的组织图像

D:使用deColorizing Solution 1和2脱色后与C相同位置的组织图像

图1C为小鼠海马体脱色后使用抗Iba1抗体(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation)进行免疫组织化学染色的图片,图1A和B为同一位置的图像。如图可见,脱色后的海马体切片仍然可以检测出Iba1阳性小胶质细胞突起。图2C为小鼠肝脏脱色后使用抗PCNA抗体进行免疫组织化学染色的图片。如图可见,阳性PCNA主要在肝细胞的细胞核中表达。

另外,并未发现因脱色导致的组织切片破坏等损伤。

该方法的优点在于,大量长期保存在大学、研究所、医院等的珍稀组织切片,在制备时没有新型染色方法以及针对新型抗原的抗体,通过再染色等方法可以重新评价以获取新的实验信息。

目前,deColorizing Solution的应用只适用于HE 染色和MT 染色后的脱色,但随着该方法的应用范围拓展,脱色法在重复使用组织切片方面的实用性将进一步提高。

点击此处了解deColorizing Solution的产品介绍及特点。


新型IL-6 ELISA试剂盒


新型IL-6 ELISA试剂盒

新型IL-6 ELISA试剂盒


  Enzo独特的IL-6(人),高灵敏度ELISA试剂盒能够定量检测微量IL-6。 IL-6高灵敏度ELISA试剂盒可以在细胞培养上清液、血浆、血清和尿液中检测到低至0.057 pg/mL的IL-6。


  白细胞介素-6(IL-6)是调节免疫系统和造血系统的重要细胞因子。人IL-6由T细胞、肥大细胞、单核细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、内皮细胞、角质形成细胞及许多肿瘤细胞系表达。在急性期反应、对损伤和炎症的反应中起作用。 人IL-6刺激B细胞分化以产生抗体,促进激活T细胞的扩增,扩大造血细胞产物生成,并诱导急性期蛋白的表达。

◆特点


● 高灵敏度的ELISA实现微量IL-6定量
● 操作方便的液体颜色编码试剂,减少失误
● 3小时内快速定量获得结果
● 高通量,每个试剂盒可处理多达40个样品,两次重复
● 即用型试剂和预包被板减少错误,节省时间


新型IL-6 ELISA试剂盒

IL-6高灵敏度ELISA试剂盒(ENZ-KIT178)标准曲线


成功ELISA检测的提示

一致性原则是任何检测的关键

  一致性原则可能是已经给定的明显目标,但是有些小假设可无意影响同一检测中板之间的一致性。通常小假设之一是批次混合,以节省试剂,是安全的。实际上不应该将试剂盒批次之间的试剂混合。每个测定具有批次特异性,并且均设计为在指定的失效日期之前使用才能保证性能水平。如果混合批次,无意中引入可能降解的试剂,导致低于最佳测定或无效结果。也可以通过一致性处理测定试剂,每次按照方案做预防措施,并遵守提供的温育时间,确保测定运行之间的批间一致性。从本质上讲,无论在任何地方都应该引入一致性,以获得最好和最相关的数据。一致性的中断可能意味着一个平板与另一个平板的结果不太准确,当使用相同来源/研究的样本时,这最终可能导致获得相互矛盾,难以解释的数据。

◆产品列表


产品编号

产品名称

包装

ENZ-KIT178-0001

IL-6 (human), ELISA kit

IL-6 (人), ELISA 试剂盒

96wells

ENZ-KIT102-0001

CRP (human) ELISA kit

CRP (人) ELISA 试剂盒

96wells

 

AdipoGen新产品-新型·独特的生物制品


AdipoGen新产品-新型·独特的生物制品

AdipoGen新产品-新型·独特的生物制品

新型·独特的生物制品

HpARI – 新的人和小鼠IL-33抑制剂

独特的Netrin-1阻断抗体 

增强活性蛋白: hBAFF (60-mer) & hDLL-4 (突变体) 

 

◆IL-33抑制剂/ 2型免疫应答阻断剂 新的


HpARI (Alarmin Release Inhibitor) (rec.) (His)  AG-40B-0178

  HpARI是由小鼠寄生虫多形螺旋线虫分泌的蛋白质。成熟蛋白HpARI通过干扰白细胞介素-33(IL-33)途径抑制2型(过敏)免疫应答。在细胞损伤过程中,HpARI进入坏死细胞核,直接与IL-33和核DNA结合,阻止IL-33分泌及与其受体的结合。

  LIT: M. Osbourne, et al.; Immunity 47, 739 (2017)


AdipoGen新产品-新型·独特的生物制品


IL-33 (oxidation resistant) (human) (rec.) (untagged)  AG-40B-0160
IL-33 (oxidation resistant) (human) (rec.) (His) AG-40B-0167
IL-33 (mouse), mAb (rec.) (blocking) (Bondy-1-1)  AG-27B-0013


◆靶向Netrin-1 / DCC的相互作用


  Netrin-1控制CNS连合轴突和外周运动轴突的导向。还通过与其相关受体结合而起到存活因子的作用,该受体阻止细胞凋亡的开始,并通过调节细胞凋亡参与肿瘤发生。

  LIT: T. Broutier, et al.; EMBO Mol. Med. 8, 96 (2016) | C.P. Prieto, et al.; Stem Cell Res. Ther. 8, 43 (2017)

AdipoGen新产品-新型·独特的生物制品

Netrin-1 (human), mAb (rec.) (H4) (PF) – Neg-Ctrl AG-27B-0020PF
Netrin-1 (human):Fc (human) (rec.) AG-40B-0075
Netrin-1 (human) (rec.)   AG-40B-0040

◆BAFF(60-mer) – 激活全部BAFF受体


  BAFF, Soluble (human) (60-mer) (rec.) (highly active)    AG-40B-0112

  加工过的人BAFF可以保留为三聚体,通常用于TNF家族配体,或者由20个三聚体组装成的60聚体。BAFF(60-mer)的寡聚形式模拟膜结合的BAFF并激活所有BAFF受体(BAFF-R,TACI和BCMA),而BAFF(3-mer)仅触发BAFF-R信号传导。

  LIT: C. Bossen, et al.; Blood 111, 1004 (2008) | C. Bossen, et al.; Eur. J. Immunol. 41, 787 (2011) | J. Nys, et al.; PLoS One 8, e61350 (2013)


AdipoGen新产品-新型·独特的生物制品

BAFF (mouse), mAb (blocking) (Sandy-2)  AG-20B-0063
BAFF-R (mouse), mAb (blocking) (9B9) AG-20B-0034
BAFF, Soluble (human) ELISA Kit (hypersensitive) AG-45B-0001

DLL4突变体 – 一种高活性的Notch配体


DLL4 (human):Fc (human) (rec.) (highly active mutant) AG-40B-0176


  Notch配体δ样蛋白4(DLL4)充当Notch1和Notch4的配体。它由VEGF诱导后作为负反馈调节因子并在血管生成发芽中发挥作用。DLL4还促进巨噬细胞的炎性活化以及Th17和Treg增殖。 高活性突变体DLL4蛋白与人Notch1相互作用, 其亲和力相对于WT DLL4,会增强> 20倍。

 

AdipoGen新产品-新型·独特的生物制品

DLL4 (human):Fc (human) (rec.)  AG-40A-0077Y
DLL1 (human):Fc (human) (rec.) AG-40A-0116Y
Jagged-2 (human):Fc (human) (rec.)  AG-40A-0155Y

◆产品列表


产品列表

产品名称

规格

AG-40B-0160-C010

IL-33 (oxidation resistant)   (human) (rec.) (untagged)
    不带标签的重组人白介素-33(抗氧化)

10 ug

AG-40B-0160-C100

IL-33 (oxidation resistant)   (human) (rec.) (untagged)
    不带标签的重组人白介素-33(抗氧化)

100 ug

AG-40B-0167-C010

IL-33 (oxidation resistant)   (human) (rec.) (His)
    IL-33(抗氧化)(人)(His标签融合)

10 ug

AG-40B-0167-C100

IL-33 (oxidation resistant)   (human) (rec.) (His)
    IL-33(抗氧化)(人)(His标签融合)

100 ug

AG-27B-0013-C100

anti-IL-33 (mouse), mAb (rec.)   (blocking) (Bondy-1-1)
    抗小鼠白介素-33单抗(封闭作用)(Bondy-1-1)

100 ug

AG-27B-0013PF-C100

anti-IL-33 (mouse), mAb (rec.)   (blocking) (Bondy-1-1) (preservative free)
    抗小鼠白介素-33单抗(封闭作用)(Bondy-1-1)(不含防腐剂)

100 ug

AG-27B-0013PF-C500

anti-IL-33 (mouse), mAb (rec.)   (blocking) (Bondy-1-1) (preservative free)
    
    抗小鼠白介素-33单抗(封闭作用)(Bondy-1-1)(不含防腐剂)

500 ug

AG-27B-0013PF-M001

anti-IL-33 (mouse), mAb (rec.)  

 (blocking) (Bondy-1-1) (preservative free)
    抗小鼠白介素-33单抗(封闭作用)

(Bondy-1-1)(不含防腐剂)

1 mg

AG-27B-0020PF-C100

anti-Netrin-1 (human), mAb   (rec.) (H4) (preservative free)

100 ug

AG-27B-0020PF-C500

anti-Netrin-1 (human), mAb   (rec.) (H4) (preservative free)

500 ug

AG-40B-0075-3010

Netrin-1 (human):Fc (human)   (rec.)
    重组型Netrin-1(人):Fc(人)

3×10 ug

AG-40B-0075-C100

Netrin-1 (human):Fc (human)   (rec.)
    重组型Netrin-1(人):Fc(人)

100 ug

AG-40B-0075-C010

Netrin-1 (human):Fc (human)   (rec.)
    重组型Netrin-1(人):Fc(人)

10 ug

AG-40B-0040-C010

Netrin-1 (human) (rec.)
    人Netrin-1重组蛋白

10 ug

AG-40B-0040-3010

Netrin-1 (human) (rec.)
    人Netrin-1重组蛋白套装

3×10 ug

AG-40B-0040-C100

Netrin-1 (human) (rec.)
    人Netrin-1重组蛋白

100 ug

AG-20B-0063-C100

anti-BAFF (mouse), mAb   (blocking) (Sandy-2)
    抗小鼠BAFF单抗(封闭作用) (Sandy-2)

100 ug

AG-20B-0063PF-C100

anti-BAFF (mouse), mAb   (blocking) 

(Sandy-2) (preservative free)
    抗小鼠BAFF单抗(封闭作用)(Sandy-2)(不含防腐剂)

100 ug

AG-20B-0063PF-C500

anti-BAFF (mouse), mAb   (blocking)

 (Sandy-2) (preservative free)
    抗小鼠BAFF单抗(封闭作用)(Sandy-2)(不含防腐剂)

500 ug

AG-20B-0034B-C100

anti-BAFF-R (mouse), mAb (9B9)   (Biotin)
    抗小鼠BAFF-R单抗(9B9)(生物素标记)

100 ug 

AG-20B-0034-C100

anti-BAFF-R (mouse), mAb   (9B9)
    抗小鼠BAFF-R单抗(9B9)

100 ug

AG-20B-0034PF-C100

anti-BAFF-R (mouse), mAb (9B9)   (preservative free)
    抗小鼠BAFF-R单抗(9B9)(不含防腐剂)

100 ug

AG-20B-0034TS-T100

anti-BAFF-R (mouse), mAb (9B9)   (ATTO 647N)
    抗小鼠BAFF-R单抗(9B9)(ATTO 647N)

100 tests

AG-45B-0001-KI01

BAFF, Soluble (human) ELISA Kit   (hypersensitive)
    可溶性BAFF(人) ELISA 试剂盒 (Hypersensitive)

96 wells

AG-40B-0176-C010

DLL4 (human):Fc (human) (rec.)   (highly active mutant)
    δ样蛋白4(人):Fc(人)(高活性突变体)

10 ug

AG-40B-0176-C100

DLL4 (human):Fc (human) (rec.)   (highly active mutant)
    δ样蛋白4(人):Fc(人)(高活性突变体)

100 ug

AG-40A-0077Y-C010

DLL4 (human):Fc (human)   (rec.)
    重组型DLL4(人):Fc(人)

10 ug

AG-40A-0077Y-C050

DLL4 (human):Fc (human)   (rec.)
    重组型DLL4(人):Fc(人)

50 ug 

AG-40A-0116Y-C010

DLL1 (human):Fc (human)   (rec.)
    重组型DLL1 (人):Fc (人)

10 ug

AG-40A-0116Y-C050

DLL1 (human):Fc (human)   (rec.)
    重组型DLL1 (人):Fc (人)

50 ug

AG-40A-0155Y-C010

Jagged-2 (human):Fc (human)   (rec.)
    重组型Jagged-2 (人):Fc (人)

10 ug