常见体外重组表达系统分为原核表达系统和真核表达系统，原核表达系统主要为大肠杆菌表达，操作简便、周期短收益大及表达产物稳定，但是表达基因的相对分子质量有限，不宜过大，且缺乏翻译后加工、修饰等元件。真核细胞系统包括 CHO等哺乳动物细胞、酵母细胞和昆虫细胞等。昆虫细胞表达系统(即杆状病毒表达系统)具有高效表达，完善的转译后加工修饰，较易从无血清培养上清中纯化的蛋白，无内毒素污染等特点，日益受到人们的重视，逐渐应用到更多的领域中。

虽然昆虫表达系统具有高效表达的特性，但是在转染过程中转染效率也是一个重要影响因素，目前市场上大部分的转染试剂对于昆虫细胞系而言，转染效率均不太理想，转染效率低下，细胞毒性大是普遍存在的问题。美国转染试剂专家Mirus的研发团队经过精心研制，推出昆虫细胞系专用转染试剂TransIT®-Insect，该转染试剂适用于绝大多数昆虫细胞系的高效转染。

产品特点：

1. 适用广泛：Sf9, High Five™ and S2等多种表达系；
2. 高效：有利于提高杆状病毒在昆虫细胞内的产量；
3. 血清兼容型：TransIT®-Insect是一款非脂质体，无动物源性，无需更换培养基的转染试剂；
4. 性价比高：用量相对更少，一般推荐使用比例为1:2 （DNA质粒ug/转染试剂ul）

产品订购信息：

更多信息可以点击：https://www.mirusbio.com/products/transfection/transit-insect-transfection-reagent

美国专业转染试剂研发公司Mirus成立于1995年，是世界上最早开发高效、低细胞毒性转染试剂的公司之一，同时也是目前该类试剂最主要的供应商之一。Mirus的生物学家利用他们在核酸化学、细胞及分子生物学领域的专长，建立了创新的技术和产品开发，这些技术和产品被广泛应用于生命科学研究。Mirus被公认为是核酸研究试剂开发的领跑者，其杰出成就受到世界公认。其中王牌转染试剂TransIT-LT1以其高效、低度及高性价比的优点深受广大科研工作者的青睐，目前TransIT®系列转染试剂以用于检测了492种细胞系及原代细胞，超过1600篇SCI文章使用。

上海金畔生物科技有限公司作为美国Mirus中国一级代理商，双方携手为国内科研工作者提供专业的转染试剂，同时，上海金畔生物科技有限公司也为广大客户提供免费试用装，欢迎您来电咨询和申请。

更有Mirus王牌高效低毒广谱转染试剂LT-1，2020，X2，TKO，siQUEST，特定细胞系专用转染试剂优惠热销，详情请咨询Mirus中国一级代理商——上海金畔生物科技有限公司全国客服热线021-50837765，欢迎广大客户来电咨询或者订购。

来自全球使用者的反馈信息：

“Our lab successfully tested TransIT®-Insect Transfection Reagent for generating recombinant baculovirus in insect cells. Using TransIT®-Insect with multiple BEVS we were able to generate high-titer baculovirus that resulted in consistently higher protein expression in High Five™ and Sf9 cells compared to Cellfectin® II (Life Technologies).”

-Dr. Linda Lua (Director), The University of Queenland – Protein Expression Facility

“Our lab tested TransIT®-Insect for virus production in Sf9 cells. It performed better than Cellfectin® II that we currently use for transfecting these cells. Cytopathic effects (CPE) of the baculovirus were observed after 5 days with as little as 0.5 µg DNA per well of a 6-well plate. When using Cellfectin® and other reagents, we haven’t seen any results using the same amount of input DNA.”

-Eric Carlin, Florida Gulf Coast University

    蛋白表达是指用模式生物如：细菌、酵母、动物细胞或者植物细胞表达外源基因蛋白的一种分子生物学技术，在基因工程中占据有核心地位。蛋白表达系统主要由宿主，外源基因，载体以及辅助成分构成。其中，宿主及载体的选择在成功表达目的蛋白上起着举足轻重的地位。 美国Lucigen公司成立于1998年，主要从事于生命科学领域相关产品的研发，该公司在分子生物学领域处于领导地位。该公司主要致力于基因克隆，蛋白表达等核心分子生物学试剂产品的研发与生产，并且获得了用户的一致好评。针对蛋白表达系统，Lucigen公司推出了一种新型的克隆表达系统。

该系统的优点主要有：
1.节约时间。该系统为您提供处理好的载体及感受态细胞，无需连接步骤，可供客户直接使用，和传统的克隆相比，很大程度上缩短了实验所需时间。
2.无需连接酶。直接将目的片段和载体混合，通过重组可得到含有目的基因的载体。
3.蛋白表达的精确控制。根据客户自己需求，可以通过诱导系统精确控制N-his或C-his标签蛋白的表达。
4.两个启动子可供选择。该系统具有两种载体，两种启动子供选择，T7和Rhamnose，根据客户实验需要，选择适合的启动子。
5.增加蛋白溶解度。该系统还为您提供一种携带有SUMO标签的质粒，该标签可以增加目的蛋白的溶解度。为了不影响您实验，该SUMO标签是可切割的。

该系统具有的两种启动子载体有各自的感受态细胞。T7启动子所对应的表达载体能够高表达目的蛋白，T7表达系统是一个双宿主表达系统，即包含HI-Control 10G Competent cell和HI-Control BL21 Competent cell两种感受态细胞。该载体的表达主要用于通过IPTG诱导的蛋白高表达。

Rhamnose表达系统是一个单宿主表达系统。即质粒的扩增和蛋白的表达在同一种感受态细胞里可完成。该体统的蛋白表达是可调节的。通过控制rhamnose的浓度来实现目的蛋白的不同水平的表达。但是这个载体系统所对应的蛋白表达水平比T7载体更低，主要用于某些毒性蛋白或者不溶蛋白的过表达。

注：以上产品均包含预处理好的质粒及感受态细胞，以及其他试剂。如有不清楚，欢迎来电咨询。

另外，Lucigen公司的特色产品还包括CloneSmart®平端克隆试剂盒、BigEasy®线性克隆系统、pEZSeq™平端克隆试剂盒、ClonePlex™ AK文库构建试剂盒、DNA Terminator ®末端修复试剂盒、EconoTaq® DNA聚合酶及E.cloni感受态细胞等。上海金畔生物科技有限公司作为Lucigen在中国地区的一级代理商，可以为您提供更低的价格，更好的服务。如果你对上述相关产品或技术敢兴趣，可以直接拨打021-50837765 到上海金畔生物科技有限公司垂询相关的最优产品和解决方案，或索取相关手册和资料。我们会为您做的更多！

目前生物医药研究和生物技术生产的主要方法是利用外源表达系统来表达目的蛋白，常用的外源表达系统有大肠杆菌表达系统，酵母表达系统，哺乳动物表达系统等。要实现目的基因在外源表达系统中的成功表达和尽可能地提高其表达量，可以通过增加目的基因剂量，目的基因密码子优化，改善培养条件等方法实现，其中目的基因密码子优化起到关键的作用。如果目的基因的密码子与表达宿主不匹配，则会降低mRNA的翻译效率和稳定性，甚至会造成mRNA翻译的提前终止。目前可以通过两个途径来解决这个问题：①提高宿主表达系统中低丰度的tRNA；②对目的基因进行密码子改造，使它的密码子是宿主表达系统的高频密码子，也就是通常所说的密码子优化。

Staby^TM Codon T7 kit特别设计的pSCodon1载体可表达6个大肠杆菌稀有密码子tRNA，包括AUA，AGG，AGA，CUA，CCC和GGA。结合T7高效启动子以及Staby特有的无抗生素的ccdAB筛选系统，可以直接用于高效表达含稀有密码子的各类蛋白，不再需要进行密码子改造工作。

试剂盒组份

(1) pSCodon vector DNA,

(2) CYS21 competent bacteria for cloning,

(3) SE1 competent bacteria for expression,

(4) regeneration medium,

(5) sequencing primers,

(6) expression control,

(7) instruction manual.

感受态细胞可以单独购买，均有电转化和化学转化2种类型的产品可以选择，电转效率要明显高于化学转化。

产品优势

(1)具有StabyExpress的所有优点。

(2)对包含有稀有密码子的异源蛋白可以保证高表达量，而不再需要对核酸序列进行定点突变。

(3)不需要额外的质粒。

操作步骤

1. 将目的基因克隆入pSCodon载体

2. 转化CYS21获得正确的构建(不建议直接转化表达菌株，因为表达菌株中T7及目的蛋白的本底表达将显著降低质粒提取效率)

3. 重组质粒转化SE1菌株

4. 诱导表达（IPTG诱导表达，由于StabyExpress^TM系统可显著降低菌体蛋白的表达，对T7 RNA聚合酶或目的蛋白的表达没有任何改变，因此可直接使用原有的T7诱导条件进行表达，或直接使用Delphi提供的Staby^TM Switch medium进行小量表达）

相关产品信息

上海金畔生物科技有限公司作为Delphi中国大陆以及香港和澳门地区的独家代理，全面供应其所有产品，包括StabyCloning™ PCR克隆系统（StabyCloning™ kit）、StabyExpress™ T7蛋白表达系统（StabyExpress™ T7 kit）、Cherry™ 蛋白表达系统（Cherry™ Express/Codon kit）、StabyCodon™ T7蛋白表达系统（StabyCodon™ T7 kit）、GetStaby™ kit以及相关感受态细胞（Competent Cells）。欢迎致电021-50837765或021-63599871了解更多产品信息以及专利相关事宜。

在蛋白表达中质粒的不稳定性是一个不得不面对而又亟需解决的问题。一般情况下，蛋白表达过程需要携带目的基因的载体的菌体质粒过表达。由于蛋白表达产物（即过表达的目的蛋白）对于菌体的代谢来说是一个沉重的负担，因此携带表达载体质粒的菌体数量会逐渐减少。抗生素抗性基因是为避免不携带质粒的菌体存活并在菌群中占主导地位而使用的最常见的选择性标记。然而，从医疗及环保的角度，蛋白表达产物中的抗生素污染（包括编码抗生素抗性基因的DNA）是不可接受的。

Delphi Genetics提供的创新型产品和服务都使用了基于细菌制毒-解毒基因这一独特的Staby™技术，极大的提高了DNA克隆的稳定性和高效率，促进不含抗生素的重组蛋白的成功生产。其相应的产品是由一系列新颖独特的细菌菌株以及相应的克隆和表达载体体现出来，并以Kit的形式提供给客户使用。其产品领域可分为用于PCR克隆的StabyCloning™，用于原核表达的StabyExpress™、Staby™Codon、Cherry™ Express等表达系统，以及相应的感受态细胞核培养基等产品。

其中StabyExpress™ T7蛋白表达系统 (Genetics StabyExpress™ T7 Kit) 是基于在质粒、染色体以及噬菌体中发现的天然解毒/毒性基因的基础上研制的。ccdB毒性基因编码一组稳定的短链蛋白（约100个氨基酸），而ccdA解毒基因则编码一组不稳定的短链蛋白（约90个氨基酸），此蛋白可以中和ccdB蛋白的毒性。在StabyExpress™ T7蛋白表达系统中，ccdB毒性基因则被引入到菌体的染色体中，而解毒基因ccdA则引入到了质粒DNA中。这样当质粒存在于细菌中，就不产生毒性了。而当质粒丢失后，解毒基因降解，即产生毒性，导致细胞死亡。

在E.coli中检测此系统，结果显示完美的质粒稳定性，而一些无此技术的载体则不稳定。StabyExpress™ T7技术应用于T7启动子启动的蛋白表达。图标比较了在使用和不使用此系统的条件下69kDa蛋白表达的情况。由结果可见，使用StabyExpress质粒在诱导表达前后都能保持完美的稳定性。反之，若采用传统的BL21（DE3菌系）则质粒不能够保持稳定性。结果目的蛋白的表达量高于不采用该系统的的3-5倍，并且解毒蛋白没有表达。

StabyExpress™ T7蛋白表达系统含有表达质粒DNA、感受态细菌（克隆及表达）、菌体生长的培养液、测序引物、蛋白表达对照以及产品说明书：

StabyExpress™ T7蛋白表达系统（StabyExpress™ T7 Kit）高效蛋白表达系统的特点：

• 高产量的表达蛋白产物；
• 非目的蛋白的背景降低；
• 无需每次表达之前改造质粒；
• 蛋白生产流程的标准化；
• 无需使用抗生素；
• 该系统适合于任何常规培养基

使用StabyExpress™ T7蛋白表达系统，可以在无抗生素的情况下有完美的质粒稳定性和高效的蛋白产量。StabyExpress™ 质粒在诱导表达前后都能保持完美的稳定性，蛋白表达量也是传统系统的3-5倍。

上海金畔生物科技有限公司公司作为Delphi包括澳门、香港在内的中国地区独家一级代理商。将其优秀的表达系统推荐给国内的科研以及生物制药生产用户。如果您对Delphi Genetics的Staby® 技术以及其独特的StabyCloning™、StabyExpress™、Staby™Codon、Cherry™ Express等系统感兴趣，请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询这一新颖的Staby® 基因克隆及蛋白表达实验解决方案，或索取最新的Delphi Genetics产品资料。