LDS-751

LDS-751; 纯度: 99.30%

LDS-751 是一种主要检测 DNA 的核酸染色剂。LDS-751 是一种主要检测DNA的核酸染色剂。LDS-751 对 DNA 有很高的亲和力,结合后荧光增强,但最大发射波长为 670nm。LDS-751 和 Thiazole orange 可用于红细胞、血小板、网织红细胞和有核细胞的分化,并能在 488nm 处激发。

LDS-751amp;;

LDS-751 Chemical Structure

CAS No. : 181885-68-7

规格 价格 是否有货 数量
5 mg ¥1950 In-stock
10 mg ; 询价 ;
50 mg ; 询价 ;

* Please select Quantity before adding items.

LDS-751 相关产品

bull;相关化合物库:

  • Bioactive Compound Library Plus

生物活性

LDS-751 is a nucleic acid stain principally detecting DNA. LDS-751 has high affinity for DNA and undergoes fluorescence enhancement upon binding, but with maximal emission at 670 nm. LDS-751 and Thiazole orange are used to differentiate erythrocytes, platelets, reticulocytes, and nucleated cells, and both can be excited at 488 nm[1][2][3].

体外研究
(In Vitro)

The LDS-751 permits the discrimination of intact cells from residual erythrocyte ghosts, platelets and damaged nucleated cells. The forward and orthogonal fight scattering signals of the intact cells, identified by LDS-751 staining allow a clear separation between the major leukocyte populations since the damaged nucleated cells, erythrocytes, erythrocyte cell ghosts and platelets are removed from the display[1].

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

分子量

471.98

Formula

C25H30ClN3O4

CAS 号

181885-68-7

运输条件

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

储存方式

-20deg;C, sealed storage, away from moisture and light

*该产品在溶液状态不稳定,建议您现用现配,即刻使用。

溶解性数据
In Vitro:;

DMSO : 83.33 mg/mL (176.55 mM; Need ultrasonic)

配制储备液
浓度 溶剂体积 质量 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.1187 mL 10.5937 mL 21.1873 mL
5 mM 0.4237 mL 2.1187 mL 4.2375 mL
10 mM 0.2119 mL 1.0594 mL 2.1187 mL

*

请根据产品在不同溶剂中的溶解度,选择合适的溶剂配制储备液;该产品在溶液状态不稳定,建议您现用现配,即刻使用

In Vivo:

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。以下溶解方案都请先按照 In Vitro 方式配制澄清的储备液,再依次添加助溶剂:

——为保证实验结果的可靠性,澄清的储备液可以根据储存条件,适当保存;体内实验的工作液,建议您现用现配,当天使用; 以下溶剂前显示的百
分比是指该溶剂在您配制终溶液中的体积占比;如在配制过程中出现沉淀、析出现象,可以通过加热和/或超声的方式助溶

  • 1.

    请依序添加每种溶剂:;10% DMSO ;; 40% PEG300 ;; 5% Tween-80 ;; 45% saline

    Solubility: ≥ 2.08 mg/mL (4.41 mM); Clear solution

    此方案可获得 ≥ 2.08 mg/mL (4.41 mM,饱和度未知) 的澄清溶液。

    以 1 mL 工作液为例,取 100 μL 20.8 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀;然后继续加入 450 μL生理盐水定容至 1 mL。

    将 0.9 g 氯化钠,完全溶解于 100 mL ddH₂O 中,得到澄清透明的生理盐水溶液

  • 2.

    请依序添加每种溶剂:;10% DMSO ;; 90% (20% SBE-β-CD in saline)

    Solubility: ≥ 2.08 mg/mL (4.41 mM); Clear solution

    此方案可获得 ≥ 2.08 mg/mL (4.41 mM,饱和度未知) 的澄清溶液。

    以 1 mL 工作液为例,取 100 μL 20.8 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液中,混合均匀。

    将 2 g 磺丁基醚 β-环糊精加入 5 mL 生理盐水中,再用生理盐水定容至 10 mL,完全溶解,澄清透明
*以上所有助溶剂都可在 MCE 网站选购。
参考文献
  • [1]. Terstappen LW, et al. A rapid sample preparation technique for flow cytometric analysis of immunofluorescence allowing absolute enumeration of cell subpopulations. J Immunol Methods. 1989 Sep 29;123(1):103-12.

    [2]. Terstappen LW, et al. Five-dimensional flow cytometry as a new approach for blood and bone marrow differentials. Cytometry. 1988;9(6):548-556.

    [3]. McCarthy DA, et al. A simple flow cytometric procedure for the determination of surface antigens on unfixed leucocytes in whole blood. J Immunol Methods. 1993;163(2):155-160.

Cell Assay

Blood samples (1 mL) are obtained using a sterile Butterfly-21 needle and plastic syringe from the antecubital vein of normal healthy volunteers who have given their informed consent. They are immediately transferred to plastic tubes containing 17.3 mg of phenylmethylsulphonyl fluoride (PMSF) and 1 mL of LDS-751 at room temperature. Aliquots (25 μL) are incubated for 5 min with between 2 μL and 5 μL of undiluted monoclonal antibodies, then diluted with 0.5 mL of 1% BSA in Hepesbuffered Hanks’ balanced salts solution (HHBSS) and examined by flow cytometry[2].

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

参考文献
  • [1]. Terstappen LW, et al. A rapid sample preparation technique for flow cytometric analysis of immunofluorescence allowing absolute enumeration of cell subpopulations. J Immunol Methods. 1989 Sep 29;123(1):103-12.

    [2]. Terstappen LW, et al. Five-dimensional flow cytometry as a new approach for blood and bone marrow differentials. Cytometry. 1988;9(6):548-556.

    [3]. McCarthy DA, et al. A simple flow cytometric procedure for the determination of surface antigens on unfixed leucocytes in whole blood. J Immunol Methods. 1993;163(2):155-160.

EDMPC

生化分析试剂 Biochemical Assay Reagents
EDMPC;

EDMPC 是一种阳离子脂质,具有较强的将 DNA 递送至肺组织的能力。EDMPC 介导叶内 DNA 向啮齿动物的递送。

EDMPC

EDMPC Chemical Structure

CAS No. : 183283-19-4

规格 是否有货
100 mg ; 询价 ;
250 mg ; 询价 ;
500 mg ; 询价 ;

* Please select Quantity before adding items.

生物活性

EDMPC, a cationic lipid, has an enhanced ability to deliver DNA to pulmonary tissues. EDMPC mediates intralobar DNA delivery to rodents[1].

分子量

706.99

Formula

C38H77NO8P+

CAS 号

183283-19-4

运输条件

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

储存方式

Please store the product under the recommended conditions in the Certificate of Analysis.

参考文献
  • [1]. C M Gorman, et al. Efficient in vivo delivery of DNA to pulmonary cells using the novel lipid EDMPC. Gene Ther. 1997 Sep;4(9):983-92.

TO-PRO 1

TO-PRO 1;

TO-PRO 1 是一种 DNA 结合荧光染料,附着在 Feraheme (FH) 纳米颗粒 (NP) 的表面,以获得荧光染料功能化的 NP。TO-PRO 1 嵌入结合 DNA,用作坏死细胞的重要荧光染料。

TO-PRO 1amp;;

TO-PRO 1 Chemical Structure

CAS No. : 157199-59-2

规格 价格 是否有货
5 mM * 50 μL in DMSO ¥5500 询问价格 货期

* Please select Quantity before adding items.

生物活性

TO-PRO 1 is a DNA binding fluorochrome, that atached to the surface of the Feraheme (FH) nanoparticle (NP), to obtain a fluorochrome-functionalized NP. TO-PRO 1 binds DNA through intercalation, and acts as a vital fluorochrome for necrotic cells[1].

分子量

645.38

Formula

C24H29I2N3S

CAS 号

157199-59-2

运输条件

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

储存方式

Please store the product under the recommended conditions in the Certificate of Analysis.

参考文献
  • [1]. Hoonsung Cho, et al. Fluorochrome-functionalized nanoparticles for imaging DNA in biological systems. ACS Nano. 2013 Mar 26;7(3):2032-41.

Transfectam

生化分析试剂 Biochemical Assay Reagents
Transfectam;

Transfectam 是一种阳离子脂质,能够与 DNA 相互作用形成复合物,从而将有效的基因转移到各种真核细胞中。

Transfectam

Transfectam Chemical Structure

CAS No. : 124050-77-7

规格 是否有货
100 mg ; 询价 ;
250 mg ; 询价 ;
500 mg ; 询价 ;

* Please select Quantity before adding items.

生物活性

Transfectam is a cationic lipid able to interact with DNA to form complexes that mediate efficient gene transfer into various eukaryotic cells[1].

分子量

807.37

Formula

C49H102N6O2

CAS 号

124050-77-7

运输条件

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

储存方式

Please store the product under the recommended conditions in the Certificate of Analysis.

参考文献
  • [1]. A Kichler, et al. Influence of the DNA complexation medium on the transfection efficiency of lipospermine/DNA particles. Gene Ther. 1998 Jun;5(6):855-60.

5-Methoxyflavone

天然产物 黄酮类 Flavonoids

5-Methoxyflavone  纯度: 99.71%

5-Methoxyflavone,是一种类黄酮,是DNA聚合酶 β (DNA polymerase-beta) 的抑制剂和 β-淀粉样蛋白毒性的神经保护剂。拥有中枢神经系统镇静剂的作用,通过调控嗜离子 GABAA 受体来实现。

5-Methoxyflavone

5-Methoxyflavone Chemical Structure

CAS No. : 42079-78-7

规格 价格 是否有货 数量
10 mM * 1 mL in DMSO ¥550 In-stock
25 mg ¥500 In-stock
50 mg   询价  
100 mg   询价  

* Please select Quantity before adding items.

5-Methoxyflavone 相关产品

相关化合物库:

  • Natural Product Like Compound Library
  • Bioactive Compound Library Plus
  • Cell Cycle/DNA Damage Compound Library
  • Anti-Aging Compound Library
  • Neuroprotective Compound Library

生物活性

5-Methoxyflavone, belonged to Flavonoid family, is a DNA polymerase-beta inhibitor and neuroprotective agent against beta-amyloid toxicity. possess central nervous system (CNS) depressant effect mediated through the ionotropic GABAA receptors.

IC50 & Target

DNA polymerase-beta[1].

体外研究
(In Vitro)

5-Methoxyflavone (compound 1) is identified as a candidate compound endowed with the ability to inhibit DNA pol-β in multiple and to prevent cell-cycle initiation and subsequent neuronal apoptosis in Aβ-challenged primary neuronal cultures. 5-methoxyflavone (10-30 μM) is able to significantly enhance toxicity of MMS on 92TAg cells. 5-Methoxyflavone (1 or 10 μM) significantly reduces polymerase activity on a gapped substrate[1].
5-Methoxyflavone (5-MF, 0-100 μg/mL) results in a time dependent reduction in the levels of antiapoptotic proteins cFLIP, Mcl-1 and an increase in the proapoptotic protein BAX. 5-MF induces both TRAIL-R1(DR4) and TRAIL-R2 (DR5) in a time-dependent manner[2].

Shanghai Jinpan Biotech Co Ltd has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

体内研究
(In Vivo)

5-Methoxyflavone (100, 150 mg/kg, i.p) significantly decreases the latency time to loss of righting reflex. 5-Methoxyflavone (50, 100 and 150 mg/kg, i.p) exhibits a significant and dose-dependent reduction in the spontaneous locomotor activity. 5-Methoxyflavone (50, 100 mg/kg, i.p) reduces the rearing response. 5-Methoxyflavone (100, 125 and 150 mg/kg, i.p) completely abolishesed the grooming response similar to diazepam treated animals[3].

Shanghai Jinpan Biotech Co Ltd has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

分子量

252.26

Formula

C16H12O3

CAS 号

42079-78-7

运输条件

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

储存方式
Powder -20°C 3 years
4°C 2 years
In solvent -80°C 6 months
-20°C 1 month
溶解性数据
In Vitro: 

DMSO : 125 mg/mL (495.52 mM; Need ultrasonic)

配制储备液
浓度 溶剂体积 质量 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.9642 mL 19.8208 mL 39.6416 mL
5 mM 0.7928 mL 3.9642 mL 7.9283 mL
10 mM 0.3964 mL 1.9821 mL 3.9642 mL

*

请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效
储备液的保存方式和期限:-80°C, 6 months; -20°C, 1 month。-80°C 储存时,请在 6 个月内使用,-20°C 储存时,请在 1 个月内使用。

In Vivo:

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。以下溶解方案都请先按照 In Vitro 方式配制澄清的储备液,再依次添加助溶剂:

——为保证实验结果的可靠性,澄清的储备液可以根据储存条件,适当保存;体内实验的工作液,建议您现用现配,当天使用; 以下溶剂前显示的百
分比是指该溶剂在您配制终溶液中的体积占比;如在配制过程中出现沉淀、析出现象,可以通过加热和/或超声的方式助溶

  • 1.

    请依序添加每种溶剂: 10% DMSO    40% PEG300    5% Tween-80    45% saline

    Solubility: ≥ 2.08 mg/mL (8.25 mM); Clear solution

    此方案可获得 ≥ 2.08 mg/mL (8.25 mM,饱和度未知) 的澄清溶液。

    以 1 mL 工作液为例,取 100 μL 20.8 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀;然后继续加入 450 μL生理盐水定容至 1 mL。

    将 0.9 g 氯化钠,完全溶解于 100 mL ddH₂O 中,得到澄清透明的生理盐水溶液

  • 2.

    请依序添加每种溶剂: 10% DMSO    90% (20% SBE-β-CD in saline)

    Solubility: ≥ 2.08 mg/mL (8.25 mM); Clear solution

    此方案可获得 ≥ 2.08 mg/mL (8.25 mM,饱和度未知) 的澄清溶液。

    以 1 mL 工作液为例,取 100 μL 20.8 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液中,混合均匀。

    将 2 g 磺丁基醚 β-环糊精加入 5 mL 生理盐水中,再用生理盐水定容至 10 mL,完全溶解,澄清透明
  • 3.

    请依序添加每种溶剂: 10% DMSO    90% corn oil

    Solubility: ≥ 2.08 mg/mL (8.25 mM); Clear solution

    此方案可获得 ≥ 2.08 mg/mL (8.25 mM,饱和度未知) 的澄清溶液,此方案不适用于实验周期在半个月以上的实验。

    以 1 mL 工作液为例,取 100 μL 20.8 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL玉米油中,混合均匀。

*以上所有助溶剂都可在 Shanghai Jinpan Biotech Co Ltd 网站选购。
参考文献
  • [1]. Merlo S, et al. Identification of 5-Methoxyflavone as a Novel DNA Polymerase-Beta Inhibitor and Neuroprotective Agent against Beta-Amyloid Toxicity. J Nat Prod. 2015 Nov 25;78(11):2704-11.

    [2]. Shanmugasundaram J, et al. Sedative-hypnotic like effect of 5-methoxyflavone in mice and investigation on possible mechanisms by in vivo and in silico methods. Biomed Pharmacother. 2018 Dec;108:85-94.

    [3]. Wudtiwai B, et al. Methoxyflavone derivatives modulate the effect of TRAIL-induced apoptosis in human leukemic cell lines. J Hematol Oncol. 2011 Dec 21;4:52.

ddATP(Synonyms: 2′,3′-Dideoxyadenosine 5′-triphosphate)

生化分析试剂 Biochemical Assay Reagents
ddATP;(Synonyms: 2′,3′-Dideoxyadenosine 5′-triphosphate)

ddATP 是一种双脱氧核苷酸,为 DNA 聚合酶 (DNA polymerase) 的链延长抑制剂,可用于 Sanger 法进行 DNA 测序。

ddATP(Synonyms: 2

ddATP Chemical Structure

CAS No. : 24027-80-3

规格 是否有货
100 mg ; 询价 ;
250 mg ; 询价 ;
500 mg ; 询价 ;

* Please select Quantity before adding items.

生物活性

ddATP is a dideoxynucleotide, acts as a chain-elongating inhibitor of DNA polymerase, used for Sanger method for DNA sequencing[1].

分子量

475.18

Formula

C10H16N5O11P3

CAS 号

24027-80-3

运输条件

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

储存方式

Please store the product under the recommended conditions in the Certificate of Analysis.

参考文献
  • [1]. van der Vliet PC, et al. Role of DNA polymerase gamma in adenovirus DNA replication. Mechanism of inhibition by 2′,3′-dideoxynucleoside 5′-triphosphates. Biochemistry. 1981 Apr 28;20(9):2628-32.

NucleoSeeing <Live Nucleus Green> DNA特异性细胞核实时成像试剂

NucleoSeeing <Live Nucleus Green>
DNA特异性细胞核实时成像试剂

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

DNA特异性细胞核实时成像试剂NucleoSeeing <Live Nucleus Green>                              DNA特异性细胞核实时成像试剂

NucleoSeeing <Live Nucleus Green>

NucleoSeeing是与DNA特异性结合并发出绿色荧光的实时成像用细胞核染色试剂。不仅是动物细胞和组织,拟南芥的叶细胞中也显示出高S/N比,并可很好的观察活细胞中细胞核动态。另外,还可用作细胞核pH sensor。

※本产品基于名古屋工业大学的研究成果商品化而成。

※本产品仅供科研使用。严禁用于科研以外用途。

NucleoSeeing <Live Nucleus Green>                              DNA特异性细胞核实时成像试剂

使用了NucleoSeeing的各种样本的染色案例

将HeLa细胞(左),拟南芥表皮细胞和保卫细胞(中),小鼠脑海马切片培养(右)活细胞成像后进行观察。详情请参考各个案例的数据。

◆活细胞的细胞核成像

 

MEMO


细胞核作为DNA的储存库负责细胞分裂和控制基因表达,是细胞中最重要的细胞器之一。因此细胞核动力学的动态实时成像就成为了非常重要的课题。从以前开始就开发了各种核染色试剂,虽然核酸应答性的蓝色荧光色素Hoechst系列和DAPI被广泛运用,但由于这些蓝色荧光素使用紫外线作为激发光,光毒性强,存在不适用于活细胞成像的问题。最近,虽然开发了一些适用于活细胞的核染料,如绿色和红色荧光色素,但是化合物的细胞毒性和核染色的特异性仍然存在问题。

NucleoSeeing是名古屋工业大学的筑地真也教授等人开发的DNA特异性绿色荧光化合物,可以在细胞培养,组织培养以及拟南芥叶等的植物细胞中进行活细胞成像。本产品细胞毒性低,DNA特异性显示高S/N比,以及优异的细胞核染色性能。也可用于观察固定细胞,应用灵活。另外,由于其拥有特殊的pH依存性荧光特性,还可以用作细胞核特异性的pH sensor。近年,在细胞核内pH重要性的研究中,还可以期待本产品作为核内pH检测的专用试剂。

 

各种细胞核染料的比较参数

染色试剂名称

光特性

化合物的物性

观察方法

检测波长
激发/荧光(nm)

荧光色

光毒性

核特异性

细胞膜
渗透性

细胞毒性

活细胞

固定细胞

NucleoSeeing

488 / 520

绿

Hoechst

350 / 461

DAPI

350 / 461

×

不明

×

X公司产品

485 / 498

绿

不明

Y公司产品

646 / 680

◆原理

NucleoSeeing是细胞膜渗透性的绿色核染色试剂,由绿色荧光色素和DNA特异性结合tag组成。本产品在DNA不存在时显示折叠构造,虽然有消光状态,但与DNA结合时构造发生改变,发出绿色荧光。由于NucleoSeeing摄入细胞内后与DNA结合时发出绿色荧光,因此可以特异性观察细胞核。

NucleoSeeing <Live Nucleus Green>                              DNA特异性细胞核实时成像试剂

◆特点

● 仅在与DNA结合时发出绿色荧光,显示高S/N比。由于在培养基中会消光,因此在添加了培养基的状态下也可以高灵敏度地进行观察

● ※想要提高灵敏度,则建议染色后更换培养基后再进行观察。

● 激发光/发射光波长:488 nm/520 nm

● 和传统的Hoechst等试剂相比,几乎没有发现细胞毒性

● 不仅仅是活细胞成像,还可以染色固定细胞,活细胞成像后再固定细胞进行观察,也可以用于免疫染色实验。

● 无论是动物来源的细胞和组织培养,还是植物细胞(拟南芥叶细胞),都可以进行高S/N比的核染色。

● 观察植物细胞时,不受叶绿体来源的自身荧光(Em:>615 nm)的影响,可以仅将细胞核可视化。

● 能够可逆性染色。培养基更换12~24小时后,染料几乎全部被排出细胞外。

● 由于可以看见pH依赖性的荧光强度的变化,所以在pH 6~8之间,可以通过2个波长的荧光强度比(Ex 405 nm, Em 520 nm / 460 nm),

      作为细胞核内的pH sensor使用。

◆应用

● 动物来源培养细胞的活细胞成像

● 植物细胞的活细胞成像

● 免疫染色中的细胞核染色

● 细胞核内pH sensor(pH 6~8)

◆原著论文

※ 本产品NucleoSeeing是以下论文中的hoeAc2FL。

1.

Nakamura, A., et al., Chem. Commun., 50, 6149~6152 (2014)

"Hoechst tagging: a modular strategy to design synthetic fluorescent probes for live-cell nucleus imaging."

2.

Ueda, M., et al., ACS Cent. Sci., 3 (5), 462~472 (2017)

"Noncanonical function of a small-molecular virulence factor coronatine against plant immunity: an in vivo raman imaging 

approach."


3.

Nakamura, A. and Tsukiji, S., Bioorg. Med. Chem. Lett., 27 (14), 3127~3130 (2017)"Ratiometric fluorescence imaging of 

nuclear pH in living cells using hoechst-tagged fluorescein."

◆应用实例

DNA应答性的荧光特性和细胞核特异性染色

左:NucleoSeeing仅在DNA存在时显示出强的绿色荧光。激发光488 nm。

右:在活细胞中,与DNA特异性结合的Hoechst33342(蓝)和NucleoSeeing(绿)进行共染色的结果,显示出高度的一致性。

NucleoSeeing <Live Nucleus Green>                              DNA特异性细胞核实时成像试剂

细胞毒性

作为蓝色核染色试剂被广泛使用的Hoechst33342和NucleoSeeing,利用MTT法确认其细胞毒性。Hoechst在5 μM时观察到了显著的细胞死亡,而NucleoSeeing在5 μM时还未观察到细胞毒性。

NucleoSeeing <Live Nucleus Green>                              DNA特异性细胞核实时成像试剂

可逆性染色

为了评价Hoechst33342和NucleoSeeing的细胞滞留性,分别用1 μM两种试剂处理15分钟后,更换培养基,去除剩余的试剂,观察24小时荧光强度的变化。Hoechst33342在24小时后依然维持80%的荧光强度,显示出不可逆性,与之相对NucleoSeeing随着时间推移,荧光强度逐渐减弱,12小时以后几乎全部排出。因此,NucleoSeeing可以作为可逆性的核染色试剂使用。

NucleoSeeing <Live Nucleus Green>                              DNA特异性细胞核实时成像试剂

各种培养细胞的核染色

添加1 μM的 NucleoSeeing 至各种培养细胞的培养基中,染色15分钟后,更换培养基观察活细胞,无论哪种细胞都观察到了核特异性的信号。

NucleoSeeing <Live Nucleus Green>                              DNA特异性细胞核实时成像试剂

小鼠脑(海马)切片培养组织的染色案例

添加20 μM 的NucleoSeeing至小鼠脑海马切片培养组织的培养基中,染色15分钟后,更换培养基在未固定的条件下进行观察。

NucleoSeeing <Live Nucleus Green>                              DNA特异性细胞核实时成像试剂

固定细胞的染色案例

左:用4%多聚甲醛固定处理HeLa细胞后,用PBS清洗细胞,添加1 μM的 NucleoSeeing染色15分钟。染色后,清洗并观察。

右:添加5 μM 的NucleoSeeing染色15分钟,用4%多聚甲醛固定细胞并进行观察。

右:※虽然也可用甲醇进行固定,但信号可能会减弱。

NucleoSeeing <Live Nucleus Green>                              DNA特异性细胞核实时成像试剂

拟南芥叶的保卫细胞染色案例

用20 μM 的NucleoSeeing处理拟南芥叶的切片60分钟后,清洗切片进行观察。激发光为488 nm时,在绿色荧光范围490~555 nm内观察保卫细胞的细胞核,615 nm以上波长范围中观察到叶绿体来源的自身荧光。通过使用本试剂,可以在观察时区分叶绿体的自身荧光和细胞核荧光,期待本品可作为植物细胞的核动态成像试剂使用。

※拟南芥叶的保卫细胞的核染色是由名古屋工业大学的筑地教授等人和东北大学上田实教授等人共同研究发现的成果。

Ueda, M., et al., ACS Cent. Sci., 3 (5), 462~472 (2017)

"Noncanonical function of a small-molecular virulence factor coronatine against plant immunity: an in vivo raman imaging approach."

NucleoSeeing <Live Nucleus Green>                              DNA特异性细胞核实时成像试剂

拟南芥叶表皮细胞的染色案例

用20 μM的 NucleoSeeing处理拟南芥叶的切片60分钟后,清洗切片进行观察。确认表皮细胞的核特异性染色。

NucleoSeeing <Live Nucleus Green>                              DNA特异性细胞核实时成像试剂

◆使用NucleoSeeing作为核内pH sensor

细胞核有着由外膜和内膜这两层脂质双分子层膜构成的核膜这种独特结构,与细胞质分隔开来。细胞核内和细胞质之间的物质交流需要通过细胞核孔进行,但学者们认为细胞核内的环境和细胞质的环境是不同的。近年,有学者提出核膜中存在核膜特异性质子泵(H+-ATPase),在细胞核和细胞质之间产生质子梯度。虽然可以期待通过生理现象变化来检测细胞核内的pH值,但是至今还没有开发出十分理想的试剂。

名古屋工业大学筑地教授等人证明NucleoSeeing具有pH依赖性荧光特性,可以作为细胞核传感器使用。NucleoSeeing作为细胞核染色试剂,一般在激发光480 nm/荧光520nm的范围使用,但是在激发光405 nm时使用的话,在460 nm以及520 nm左右的荧光会依赖pH值发生变化。通过检测激发光405 nm时460 nm和520 nm的荧光强度比(F520 / F460),观察pH5.5~8.5之间的S形曲线。利用这个原理,就可以评估细胞核内的pH值。

■ 原著论文

Nakamura, A. and Tsukiji, S., Bioorg. Med. Chem. Lett., 27 (14), 3127~3130 (2017)

"Ratiometric fluorescence imaging of nuclear pH in living cells using hoechst-tagged fluorescein."

◆NucleoSeeing用作细胞核内pH sensor的原理和特点

 

(参考数据)in vitro中NucleoSeeing的pH依赖性荧光特性

左:在NucleoSeeing的激发波长405 nm时荧光光谱和pH依赖性。在pH5.5~8.5之间,460 nm和520 nm附近的荧光强度随着pH值降低而增强。

右:在各pH值中,460 nm和520 nm的荧光强度F(激发波长405 nm)和荧光强度比(F520 / F460)。

<注>NucleoSeeing针对活细胞用的细胞膜渗透性进行了优化,摄入细胞内以后,被酯酶水解并转化为活性本体。本数据是为了验证使用了化学合成的活性本体(NucleoSeeing的水解产物)进行in vitro获得的数据。请注意直接使用NucleoSeeing进行in vitro不可能重现本数据。

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◆在in cellulo 中使用NucleoSeeing观察细胞核内pH

用NucleoSeeing染色培养细胞(HeLa细胞)后,用含有K+ / H+离子载体Nigericin * 的pH buffer培养后,用共聚焦显微镜观察在激发光405 nm时的荧光强度比(FFluorescein / FHoechst

左:各pH值的荧光观察图像

右:定量结果分析与in vitro相同,可以观察到pH依赖性和荧光强度比的对应关系,并且预估生理性(未添加Nigericin)的核内pH值为7.4。

* Nigericin是代表性的K+ / H+离子载体,在细胞外溶液的pH值和细胞内pH值一致时使用。

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※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。


产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
FDV-0029 NucleoSeeing  
NucleoSeeing活细胞核绿色荧光染料
0.1 mg

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 ENZ-GEN106-0100

 Genomic DNA (human),   male

100µg

ENZ-GEN106

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