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Western Blot总是狂踩坑？这份实验优化试剂总结请收好！

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Western Blot总是狂踩坑？这份实验优化试剂总结请收好！

Western Blot总是狂踩坑？这份实验优化试剂总结请收好！




蛋白质免疫印迹法（也称蛋白印迹、免疫印迹或Western Blot）使用抗体来识别与转印膜结合的特定蛋白质靶标，利用抗体-抗原相互作用的特异性，从复杂的蛋白质混合物（例如细胞或组织裂解液）中鉴定目的蛋白。目前广泛应用于分子生物学、生物化学和免疫遗传学实验中。

然而，Western Blot步骤多、耗时长，忽略每一个细节都可能影响最终的结果。因此我们总结了一份WB专用试剂清单，全方位助您在样品准备、凝胶电泳、转膜步骤过程中避雷，提升实验效率！


◆样品制备

RIPA（Radio Immunoprecipitation Assay）裂解缓冲液，是一种传统的可用于裂解细胞或组织的快速裂解液。通常使用RIPA buffer从组织或细胞中抽提可溶性蛋白，用于后续的WB、IP、co-IP等实验。

然而，不少细胞膜上的功能性蛋白，会形成不溶性的脂筏（Lipid Raft）结构，常规的RIPA buffer不能溶解。SDS 能溶解脂筏但具有很强的变性作用，会破坏蛋白的结构和功能。UltraRIPA buffer kit则能很好地解决这个两难，使用buffer A和buffer B的组合，实现迅速、高效地提取抗去垢剂的脂筏蛋白质，且不会使蛋白失活，后续可对脂筏中蛋白进行下游分析和活性测试。


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产品编号

产品名称

规格

182-02451

RIPA Buffer

100 mL

188-02453

250 mL

F015

UltraRIPA kit for Lipid Raft
UltraRIPA 脂筏提取缓冲液套装

1 kit

◆凝胶电泳

WIDE-VIEW™ Prestained Protein Size Marker Ⅲ是预染蛋白SDS-PAGE用分子量标记，可直接使用无需稀释，可以跑出12条偶联染料的有色条带，并且不会发生弯曲，用于指示各条带的位置、判断蛋白质转膜效率。

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产品编号

产品名称

规格

236-02463

WIDE-VIEW™ Prestained Protein Size Marker Ⅲ
WIDE-VIEW™ 预染蛋白质标记Ⅲ

25 μL

230-02461

500 μL

234-02464

500 μL×3

Phos-tag™ Magenta是最受欢迎的Phos-tag™凝胶荧光染料，无需放射性物质、化学物质标签、抗体，即可在生理pH范围内对SDS-PAGE凝胶的磷酸化蛋白进行特异性染色。另还有多种颜色供选择。

产品编号

产品名称

规格

386-15221

Phos-tag™ Magenta
Phos-tag™品红荧光染料

0.2 mg

382-15201

Phos-tag™ Aqua
Phos-tag™ 浅绿荧光染料

0.2 mg

380-15241

Phos-tag™ Yellow
Phos-tag™ 黄色荧光染料

0.2 mg

389-15211

Phos-tag™ Cyan
Phos-tag™ 蓝绿荧光染料

0.2 mg

含2-巯基乙醇的传统样品缓冲液（产品编号#196-11022）适用于Laemmli体系凝胶，是一种可广泛兼容各种应用的常规缓冲液。

产品编号

产品名称

规格

196-11022

Sample Buffer Solution(2ME+)(×2)

25 mL

然而当需要分离分子量范围宽广的蛋白时，只需将独特的大范围分离缓冲液AllView PAGE Buffer替代常规电泳buffer，即可在固定浓度凝胶上实现梯度胶电泳效果，不需要花时间配梯度胶或购买昂贵的商业化梯度胶。

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产品编号

产品名称

规格

DS520

AllView PAGE Buffer

500 mL

◆蛋白质转印

为了进一步特异性检测靶蛋白，通常需要将蛋白从电泳凝胶上转印到NC膜或PVDF膜上，因此转膜是决定WB成败的最关键因素之一，转膜效率的提升对于优化实验也至关重要。高效转膜液AquaBlot™ 10×High Efficiency Transfer Buffer均通用于湿转和半干转，比传统的Towbin buffer（Tris-甘氨酸）及Towbin SDS buffer效率高。尤其适用于分析磷酸化水平的Phos-tag™凝胶的转印。

产品编号

产品名称

规格

019-26211

AquaBlot™ 10×High Efficiency Transfer Buffer 

30 mL

015-26213

1 L

Phos-tag™ Biotin是与生物素结合的Phos-tag™，不受氨基酸种类和序列的影响，可直接灵敏检测PVDF膜上的磷酸化蛋白，无需PVDF膜的封闭处理，无需预先进行电泳分离。其中以BTL-111的灵敏度最高。

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使用Phos-tag™ Biotin检测

产品编号

产品名称

规格

308-97201

Phos-tag™ BiotinBTL-111 1mM AqueousSolution

 Phos-tagWestern Blot总是狂踩坑？这份实验优化试剂总结请收好！ 生物素1mM水溶液

0.1 mL

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Immuno-enhancer是免疫印迹抗原抗体反应促进剂。当抗体的反应性不理想时，Immuno-enhancer可以作为稀释液和抗体混合，促进抗原-抗体反应，提高WB检测灵敏度，获得高信噪比的成像效果。

产品编号

产品名称

规格

290-68603

Immuno-enhancer

免疫印迹抗原抗体反应促进剂

10 tests

298-68604

40 tests

还在排队等成像系统？

Enzo的WESTERNVIEW™ Detection Kit是专用于Western Blot检测的免疫印迹显色试剂。在抗体孵育后加入，无需显影、无需专用设备，即可肉眼观测到低背景、信号持久的清晰条带。无需成像设备和显影液也可使用！


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使用抗体孵育后，再用WESTERNVIEW™ Detection Kit (Anti-Mouse)显影

产品编号

产品名称

规格

ENZ-KIT182-0001

WESTERNVIEW™ Detection Kit (Anti-Mouse)

免疫印迹显色试剂盒（抗小鼠）

1 kit

ENZ-KIT183-0001

WESTERNVIEW™ Detection Kit (Anti-Rabbit)

WESTERNVIEW™检测试剂盒（抗兔）

1 kit

ENZ-KIT163-0001

WESTERNVIEW™ Dual Detection Kit (Anti-Mouse/Anti-Rabbit) 

1 kit

WESTERN-VIEW™ Western蛋白marker WESTERN-VIEW™ Western Protein Size Marker(32-165kDa)

发表于由

WESTERN-VIEW™ Western蛋白marker
WESTERN-VIEW™ Western Protein Size Marker(32-165kDa)

  • 产品特性
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WESTERN-VIEW™ Western 蛋白marker(32-165 kDa)WESTERN-VIEW™ Western蛋白marker WESTERN-VIEW™ Western Protein Size Marker(32-165kDa)

 

◆原理


      用于免疫印迹的蛋白marker，包括5种抗体结合的条带（32~165 kDa）和两种与色素体结合的条带（蓝色：29 kDa，橙色：105 kDa）。这 5种抗体结合的蛋白可以结合实验中使用的抗体，检测时会以条带形式出现，无需进行另外的实验步骤，也不需要另外的试剂。每种蛋白是E.coli表达的重组蛋白。可全程监控免疫印迹实验中蛋白的位置。

 


◆优点・特色


● 　免疫印迹实验时可检测到

●　包括两种结合色素体的条带和5种抗体结合的条带

●　 不需要煮沸或者稀释

 


◆案例・应用


1、使用前将产品放置在室温

2、用枪头或则震荡仪充分混匀液体

3、每块胶 2~5 μL/道

4、转移到膜上后，在抗体反应时候，使用的抗体也会结合到marker上


WESTERN-VIEW™ Western蛋白marker WESTERN-VIEW™ Western Protein Size Marker(32-165kDa)

胶：SuperSep™ Ace, 10-20%, 17 wells

（产品编号：198-15041 ）

Running Buffer：SDS-PAGE Buffer, pH 8.5

（产品编号：192-16801）


蛋白marker：该产品（产品编号：236-02723 ）5 μL/道


膜：Clear Trans SP PVDF Membrane, Hydrophobic, 0.2 μm

（产品编号：033-22453 ）


抗体：抗山羊IgG，过氧化氢标记

化学发光试剂 ImmunoStar Zeta（产品编号：295-72404）

     


组成：

125 mmol/L Tris-HCl (pH 6.8), 10 mmol/L DTT, 5 mmol/L EDTA, 
17.4 w/v% 甘油, 3 w/v% SDS, 0.01 w/v% 酚红 

备注：

●　避免反复冻融

●　产品的检测灵敏度取决于抗体和使用的检测试剂

●　高灵敏度的检测系统会导致有额外的条带。请减少上样量。

●　与Native-PAGE实验不兼容

WESTERN-VIEW™ Western蛋白marker WESTERN-VIEW™ Western Protein Size Marker(32-165kDa)

   

抗体结合条带（32~165 kDa）的标准曲线

 

◆产品列表

产品名称

规格

货号

级别

保存条件

WESTERN-VIEW™ Western Protein Size Marker(32 – 165 kDa)

25 μL（5~12次）

230-02721

电泳实验

-20℃

250 μL（50~120次）

236-02723



◆其他相关产品

产品名称

包装规格

货号

级别

保存条件

SuperSep™ Ace, 10-20%, 17 well

10块

198-15041

电泳

2~10℃

SDS-PAGE Buffer, pH 8.5

5 L

192-16801

25℃以下

ClearTrans SP PVDF Membrane, Hydrophobic

0.2 μM

033-22453

免疫印迹实验

室温

ImmunoStar Zeta

200 cm2

291-72401

-80℃

2000 cm2

295-72404

1000 cm2

297-72403


产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
230-02721 WESTERN-VIEW™ Western Protein Size Marker(32-165kDa)
WESTERN-VIEW™ Western蛋白marker		 25 μL – –
236-02723 WESTERN-VIEW™ Western Protein Size Marker(32-165kDa)
WESTERN-VIEW™ Western蛋白marker		 25 μL – –

免疫印迹显色试剂盒（抗小鼠） Chromogenic Western Blot Kit (Anti-Mouse)

发表于由

免疫印迹显色试剂盒（抗小鼠）
Chromogenic Western Blot Kit (Anti-Mouse)

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免疫印迹显色试剂盒（抗小鼠）免疫印迹显色试剂盒（抗小鼠） Chromogenic Western Blot Kit (Anti-Mouse)

Chromogenic Western Blot Kit (Anti-Mouse)

信号、灵敏度更强的蛋白印迹显色试剂盒

Chromogenic Western Blot kit with increased signal and sensitivity

●　更灵敏的检测——能够检测较低浓度的蛋白质

●　易于使用——所有试剂均可随时使用或即可稀释，节省宝贵的时间

●　适应性好——适用于各种小鼠来源的蛋白质

显色蛋白质印迹试剂盒（抗小鼠）能通过免疫检测来识别蛋白质印迹上的一抗。该试剂盒内有完整的一套试剂，包含经优化的即用型或即可稀释试剂。

高灵敏度，可检测ng级蛋白，低表达蛋白无需纯化或浓缩样品，节省1~2h实验时间。


抗Iba1，兔（用于免疫印迹） Anti Iba1, Rabbit (for Western Blotting)

发表于由

抗Iba1，兔（用于免疫印迹）
Anti Iba1, Rabbit (for Western Blotting)

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抗Iba1，兔（用于免疫印迹） Anti Iba1, Rabbit (for Western Blotting)抗Iba1，兔（用于免疫印迹）

Anti Iba1, Rabbit (for Western Blotting)

Iba1是在巨噬细胞/小胶质细胞特异性表达的钙结合蛋白，分子量17 kDa。本产品为与Iba1特异性反应的兔源多克隆抗体。

神经研究用标签抗体。

近年来，小胶质细胞除了神经营养和保护作用以外，其通过产生NO、TNF-α和IL-1β引起的神经损伤作用也备受关注。 本产品是一种WB用的Iba1抗体，适用于特异性检测小胶质细胞。

◆产品信息

生产方法：使用Iba1的C端肽对兔进行免疫。使用抗原亲和法纯化抗血清。

储存条件: 冷冻（干冰运输）

抗原来源动物：大鼠

物种交叉反应性：人，小鼠，大鼠

免疫动物：兔

适用实验：WB

点击此处查看使用论文

抗Iba1，兔（用于免疫印迹） Anti Iba1, Rabbit (for Western Blotting)

◆物理特性

外观

   冷冻的TBS溶液（不含防腐剂）
   无色液体

特异性

   与人，小鼠，大鼠Iba1发生反应

溶解度

   溶于水

   ※ “溶解性信息”不一定包含最适用溶剂。

浓度

   0.5-0.6 mg/mL

物理特性中的信息仅供参考。除规定值外，其中的数值并不能保证本产品的性能。

有关本产品的质量以及性能请参阅产品说明书。

另外，也建议根据自身的研究目的，在实验前预先进行探讨。

◆抗体信息

抗原名

   Iba1

抗原别名

   Iba1

   Iba 1

◆Anti Iba1抗体系列

产品详情

产品等级

   小胶质细胞标记物抗体——Anti   Iba1抗体

免疫化学用

   抗Iba1,   重组兔源单克隆抗体（6A4）

免疫化学用

   抗Iba1，兔（免疫细胞化学用）

免疫化学用

   抗Iba1，兔（石蜡切片用）

免疫化学用

   抗Iba1，兔 生物素结合

免疫化学用

   抗Iba1，兔源（结合488绿色荧光）（Prototype）

免疫化学用

   抗Iba1, 兔源, 结合SPICA Dye™ 568

免疫化学用

   抗   Iba1，兔源，SPICA Dye™ 594偶联

免疫化学用

   Anti-Iba1、红色荧光染料（635）结合

免疫化学用

   抗Iba1，山羊多克隆抗体

免疫化学用

   鼠源Iba1抗体，无标签，单克隆抗体（NCNP24）

免疫化学用

   抗Iba1, 兔源单克隆抗体（NCNP27）

免疫化学用

相关资料


抗Iba1，兔（用于免疫印迹） Anti Iba1, Rabbit (for Western Blotting)

小胶质细胞产品目录


产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
016-20001 Anti Iba1, Rabbit (for Western Blotting) 
抗Iba1，兔（用于免疫印迹）		 50 μg 免疫化学用 –

Anti Iba1, Rabbit (for Western Blotting) 小胶质细胞/巨噬细胞特异性蛋白抗体（免疫印迹） 品牌：FUJIFILM Wako

发表于由

Anti Iba1, Rabbit (for Western Blotting)

小胶质细胞/巨噬细胞特异性蛋白抗体（免疫印迹）

品牌：FUJIFILM Wako
CAS No.：
储存条件：-20℃
纯度：–
产品编号

(生产商编号)

 等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

016-20001

 for Immunochemistry 50ug – 4,940.00 – –


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。

原装进口美国KPL公司WB化学发光底物–现货供应

发表于由

Western Blot（免疫印迹，简称WB）法是利用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨出专一目的蛋白。将聚丙烯酰胺凝胶上分辨出的蛋白转移到硝酸纤维素膜上，膜以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及免疫原性。一抗特异地与蛋白上的抗原决定簇结合，然后用二抗检测已结合上去的抗体。再加入底物进行显色或发光，从而实现对目的蛋白进行定性或定量检测。该技术已广泛应用于检测蛋白水平的表达。

Western Blot的优点是灵敏度高，可达ng级，用化学发光显色法可达pg 或fg级，方便，特异性高。经典的Western Blot 包括蛋白电泳—转膜—封闭—抗体—显色等五个步骤。

Western Blot 实验要得到一个优质的实验图片，除了与使用高质量的一抗、二抗以外，还与后期的检测系统的灵敏度有很重要的关系。Western Blot目前使用最多的是化学发光显色，当然也有采用普通沉淀型底物进行比色法分析，或者使用荧光二抗进行的荧光法检测也越来越受欢迎。上海金畔生物科技有限公司代理的KPL公司为您提供各种检测方法，各种灵敏度的WB显色底物，可以满足您不同的实验需求。

上海金畔现货供应KPL公司Western Blot （WB）底物产品信息

检测方法

酶

热销度

品名

货号

组分

膜张数
(10cm2)

颜色

灵敏度
(HRP g/ml)

化

学

发

光

HRP

AAAAA

LumiGLO 2-C

54-61-00

2*120 ml(A液+B液)

240

–

(pg)10-12

AAA

LumiGLO Reserve 3-C

54-71-02

1*17 mL A液,1*34 mL B液,1*100 mL 20X洗脱液

100

–

(pg~fg)

10-15~10-12

AAA

LumiGLO Ultra 2-C

54-51-00

2*25 ml(A液+B液)

100

–

(fg)10-15

AP

AA

PhosphaGLO 1-C

55-60-03

1* 30 mL

60

–

(pg)10-12

AA

PhosphaGLO Reserve 1-C

55-60-01

1*30 mL

60

–

(fg)10-15

比

色

法

HRP

AAAA

TMB 1-C

50-77-18

1* 100 mL

100

深蓝色

(pg)10-12

AAA

TMB Membrane System  3-C

50-77-00

4*100 ml(A液+B液)
1*40 ml增强剂

400

深蓝色

(ng)10-9

AP

AAA

BCIP/NBT 1-C

50-81-18

1* 100 mL

100

蓝紫色

(ng~pg)

10-12~10-9

AAA

BCIP/NBT System 2-C

50-81-00

2*100 ml(A液+B液)
1*100 ml缓冲液

200

蓝紫色

(ng~pg)

10-12~10-9

AAA

FirePhos 1-C

50-81-30

1* 100 mL

100

红色

(ng~pg)

10-12~10-9

LumiGLPeroxidase Chemiluminescent Substrate是基于鲁米诺开发的一种非同位素的HRP底物，当有H2O2存在时，HRP可催化鲁米诺发光，且这个反应相当迅速。该底物检测信号与被检蛋白浓度呈非常好的正相关关系，灵敏度高达pg级别。此外，反应物可从膜上洗去，然后重新加入底物反应，如此进行实验结果的优化而不再需要重复全部WB过程。LumiGLO Reserve是对LumiGLO的第二代升级产品，可检测pg-fg级(HRP g/ml)，LumiGLO Ultra则是第三代产品，信号超强，能检测fg级。

产品特点：

1.既可用于WB又可用于ELISA；

2.信号产生迅速；

3.灵敏度高，是同类产品的2倍以上

4.全部试剂均为即用型的，使用方便；

5.工作液可存放8~24h；

6.发光时间长，可持续1~2小时；

7.可于2~8℃稳定保存1年以上。

KPL是世界上很大的二抗和底物显色系统生产商，也是世界上很早实现亲和纯化二抗商业化的生物公司。 KPL拥有近 40 年的产品研发经验， 通过ISO 9001 质量体系认证，所有产品具有质量批间差小，品质可靠，高纯度、高灵敏度、高信噪比 (信号强、背景低)等特点，成为深受广大诊断企业好评。

上海金畔作为KPL的中国一级代理商，致力于KPL优秀产品的中国推广，为国内的广大科研工作者提供专业的产品和服务。如果你对上述产品及相关技术信息感兴趣，请致电021-50837765 到上海金畔生物科技有限公司垂询相关的最优产品和解决方案，或索取相关手册和资料。我们会为您做的更多！

Western 7 Protein Ladder 品牌：Nippon Gene

发表于由

Western 7 Protein Ladder

品牌：Nippon Gene
CAS No.：
储存条件：-20℃
纯度：–
产品编号

(生产商编号)

 等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

311-07741

 – 500uL×2 – 咨询 – –


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。

BSP0161-PALL FluoroTrans W膜PVDF膜Western转印膜

发表于由

产品型号BSP0161

品       牌颇尔

厂商性质代理商

产品简介

PALL FluoroTrans W膜PVDF膜Western转印膜，适用于Western转印应用。通过这种膜，可以进行低本底和极低蛋白质穿透率的敏感蛋白质检测。可以借助Comassie Blue,Amido Black,Ponceau S和Colloidal Gold来检测固定蛋白质。介质：疏水性PVDF，孔径0.2um，厚度127um，规格：26cm*3.3m

详情介绍

PALL FluoroTrans W膜PVDF膜Western转印膜0.2um孔径BSP0161

FluoroTrans W膜经过了优化，适用于Western转印应用。通过这种膜，可以进行低本底和极低蛋白质穿透率的敏感蛋白质检测。可以借助Comassie Blue,Amido Black,Ponceau S和Colloidal Gold来检测固定蛋白质。敏感度很高可用于小肽段。介质：疏水性PVDF，孔径0.2um，厚度127um，规格：26cm*3.3m

BSP0161-PALL FluoroTrans W膜PVDF膜Western转印膜

Dr. Western 品牌：O Yeast

发表于由

Dr. Western

品牌：O Yeast
CAS No.：
储存条件：-20℃
纯度：–
产品编号

(生产商编号)

 等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

304-51663

 – 40 ul – 咨询 – –


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。