Enzo快速定量检测PBMCs中自噬体
经稳定转染LC3-GFP细胞系进行自噬分析,因GFP-LC3发生聚集会产生假阳性反应,不适于对临床样本分析。 对GFP-LC3斑计数仅能监测自噬体的增长,可能信号通路受阻也会产生类似结果,因此不足以确定自噬体的数量。牛津大学Anna Katharina Simon 博士和他的同事开发了一种高通量、高精度技术——流式细胞成像术来确定外周血单个核细胞(PBMCs)自噬体(1。这种技术是通过Enzo的 Lyso-ID® Red detection kit试剂盒与荧光标记的LC3单克隆抗体联用,定量检测溶酶体中的LC3标记物。原理是利用皮尔逊相关系数的变换来计算不同的荧光图像通道重叠像素强度值。经分析年轻和年老健康捐赠者的外周血单个核细胞,年老者在饥饿诱导下自噬体出现了显著地下降。此分析结果有利于对淋巴细胞和其它白血细胞的自噬研究。尽管遗传病不会对造血系统造成直接影响,但是外周血单核细胞仍能准确地反映感染组织自噬体的状态,远端遗传性运动神经病类型II就是一个典型的例子(2。
Enzo Life Sciences 推出了一系列产品可用于自噬研究,包括活细胞分析试剂盒,免疫检测,自噬化合物库和抗体,产品介绍如下:
产品 |
特点 |
检测试剂盒 |
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Lyso-ID® Red detection kit (GFP-Certified®) |
适用于活细胞溶酶体和自噬体成像。长的红色发射波长易与普通的荧光探针结合,如荧光素、香豆素和绿色荧光蛋白。荧光信号强,不易淬灭。不会转换成绿色发光染料,不需要复杂的异质性双重发射体。 |
Lyso-ID® Green detection kit |
专门用于红色荧光蛋白表达细胞系 、罗丹红荧光团, 还有蓝色、青色和橙色荧光蛋白表达细胞系(BFPs、CFPs、OFPs)。 |
Lyso-ID® Red cytotoxicity kit (GFP-Certified®) for microplates |
高通量分析,10-15 分钟快速染色。包括药物处理时间,只需3小时就能定量检测得到结果。 |
Cyto-ID® Autophagy detection kit |
操作简便,不需转染,定量分析可用于检测活细胞自噬。 |
PROTEOSTAT® Aggresome detection kit |
全面检测蛋白错误折叠,可运用于神经退化性疾病、肝病和毒理学等方面的研究。 |
p62 ELISA kit |
可靠性高,用于自噬研究。p62检测灵敏度低至100 pg/ml。 |
NBR1 ELISA kit |
率先面市,用于自噬研究。NBR1检测灵敏度低至65 pg/ml。 |
SCREEN-WELL® Autophagy library |
结构和机制上不同的化合物,可用于研究促自噬和抗自噬分子在细胞内和生物体外的作用。 |
抗体 |
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LC3, mAb (2G6) (fluorescein labeled) |
识别人的LC3/GABARAP 蛋白(Atg8 homologues),包括游离态与偶联态。 |
LC3, mAb (5H3) |
可识别人两种类型的内源LC3。 |
LC3B, mAb (2G6) |
可识别多种物种:人 、小鼠、大鼠、猴子和仓鼠的LC3B。识别两种类型的内源 LC3。 |
LC3B, mAb (5F10) |
可识别多种物种:人、小鼠、大鼠、狗和仓鼠的LC3B。 识别两种类型的内源 LC3。 |
化合物 |
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E64d |
抑制钙调蛋白和组织蛋白酶 B、H、和L。抑制自噬降解。 |
Pepstatin A |
天冬氨酸酯蛋白酶抑制剂,包括胃蛋白酶、组织蛋白酶D、肾素、凝乳酶、细菌的天冬氨酸蛋白酶和HIV蛋白酶。 |
LPS from Salmonella abortus equi S-form (TLRgrade™) |
Toll样受体4的强激活剂。在缺乏Toll样受体4的小鼠脾细胞和巨噬细胞中,不能激活Toll样受体2和其它Toll样受体家族。(即用型) |
References:
(1.) Phadwal K, et. al. A novel method for autophagy detection in primary cells: Impaired levels of macroautophagy in immunosenescent T cells. Autophagy. 2012 Apr 1;8(4). [Epub ahead of print].
(2.) Kwok AS,et. al. HspB8 Mutation Causing Hereditary Distal Motor Neuropathy Impairs Lysosomal Delivery of Autophagosomes. J Neurochem. 2011 Dec;119(6):1155-61.