GenomONE ® 仙台病毒包膜细胞融合试剂
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GenomONE ® 仙台病毒包膜细胞融合试剂
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标签归档：仙台病毒
GenomONE® -Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂 GenomONE® -Neo EX HVJ-E vials Transfection Reagents
GenomONE® –Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂
GenomONE® –Neo EX HVJ-E vials Transfection Reagents
- 产品特性
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- 参考文献
GenomONE®–Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂
可用于DNA、siRNA、ODN及蛋白转染！
◆原理
待转移的分子（如DNA，蛋白，Antisense Oligonucleotide, siRNA等）与 HVJ-Envelope（HVJ-E）混合后，形成了 HVJ-E 载体。利用病毒衣壳蛋白的侵染能力，在融合蛋白(F)的作用下，直接与细胞融合，将分子转入目标细胞或组织。
* HVJ-E：Hemagglutinating Virus of Japan Envelope。
** 现已有200多篇文献使用该试剂盒，如需样本案例，请向我司索取。
◆优点、特色
目前市面上独一无二的转染试剂盒，可用于细胞、组织和活体动物。可用于：
siRNA
少量 siRNA 也可高效发挥敲除作用，无需化学修饰siRNA，高表达量。
DNA
无论序列长短、线性或环状均可
Oligonucleotides
DNA、RNA
蛋白
保持酶和抗体的功能性与特异性
体内转染 !!
大量操作和文献引用证明HVJ-E载体可直接将目标分子转移到活体动物产生作用。
高通量筛选
可同时转染多种分子
1. 运用范围广
GenomONE HVJ-E 载体试剂盒可将多种分子（质粒 DNA、siRNA、寡核苷酸、蛋白、抗体等）转进培养细胞（贴壁和非贴壁细胞）和组织。也可用于敏感原代细胞和 活体动物转染。每种领域的GenomONE®-Neo EX 运用情况，均有大量文献报道。（如需文献列表，请向我司索取）
2. 安全性
与阳离子脂质体不同，GenomONE®-Neo EX 是通过膜融合作用将分子导入细胞，而脂质体转染的内吞作用可能造成转染分子经溶酶体作用而降解。GenomONE®-Neo EX 内含完全灭活的HVJ病毒颗粒，其具有侵染力而无潜在增殖能力，使用非常安全，无需特殊的防护措施
3. 方便简单
GenomONE 即开即用，试剂盒内包含了操作中主要使用的 HVJ-E 冻干粉和各种辅助试剂
◆案例、应用
GenomONE®-Neo EX 和传统的脂质体转染和电穿孔法相比，有更高的转染效率和更低的细胞毒性，可更有效的发挥 siRNA 的 knock-down 作用。
■ in vivo
【大鼠颌下腺逆行注射siRNA】
Ca2+-dependent Cl channel protein（rCLCA）表达的特异性抑制。
免疫染色
non-injection side rCLCA siRNA-injection side
rCLCA siRNA（2 nmol）和GenomONE-Neo（2AU）混合后，以逆行注射的方式注入大鼠颌下腺。四十八小时后，用免疫染色检验 siRNA 注射对氯离子通道蛋白表达的抑制作用。
ST：纹状管，G：颗粒曲管，A：腺泡
【相关文献】
K. Ishibashi et al., J. Dent. Res., 85(12), 1101-1105 (2006).
■ in vitro
【难转染细胞——U937 细胞 RNAi】
总所周知，用脂质体和电转的方法将 siRNA 转到 U937 人单核细胞白血病细胞中非常困难，但我们通过实验证明，siRNA 与 GenomONE-Neo 结合后转染该细胞，其 knock-down 效率可达85%以上。
♦ U937 细胞经 siRNA 转染72小时后收集，用 RT-PCR 和 WB 分别检测 mRNA 和蛋白量的变化情况。
Real-time PCR Western blotting
左图：转染 Cathepsin G 的特异性 siRNA 后，其对应的 mRNA 减少到14%
右图：转染 Cathepsin G 的特异性 siRNA 后，其蛋白水平减少到15%
【相关文献】
Y. Tsuchiya et al, Free Radical Biology & Medicine, 43, 1604-1615 (2007).
◆试剂盒组成
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Cat. # |
Freeze-dried HVJ-E (inactivated HVJ) |
Reagent A (enhancer for incorporation) |
Reagent B (reagent for |
Reagent C (enhancer for introduction) |
Buffer (for suspension |
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1 vial |
1 vial |
1 vial |
1 vial |
1 vial |
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4 vials |
1 vial |
1 vial |
1 vial |
1 vial |
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385-18736 |
40 vials |
10 vials |
10 vials |
10 vials |
10 vials |
请参考附件：
GenomONE-Neo EX 常见问题1.pdf
GenomONE-Neo EX_问题解决指南1.pdf
参考文献
点击此处下载产品参考文献目录
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[1] |
Different effect of resveratrol to induction of apoptosis depending on the type of human cancer cells. |
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Takashina M, Inoue S, Tomihara K, Tomita K, Hattori K, Zhao QL, Suzuki T, Noguchi M, Ohashi W, Hattori Y.Int J Oncol. 2017 Mar;50(3):787-797. PMID: 28197625 |
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[2] |
Protein Transfection ( in vitro / in vivo ) / Peptide Transfection ( in vitro ) |
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Directly reprogramming fibroblasts into adipogenic, neurogenic and hepatogenic differentiation lineages by defined factors.Wu W, Jin YQ, Gao Z.Exp Ther Med. 2017 Jun;13(6):2685-2690. PMID: 28587331 |
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[3] |
siRNA Transfection ( in vitro / in vivo) / miRNA Transfection ( in vitro ) |
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Impaired Dual-Specificity Protein Phosphatase DUSP4 Reduces Corticosteroid Sensitivity.Kobayashi Y, Ito K, Kanda A, Tomoda K, Mercado N, Barnes PJ.Mol Pharmacol. 2017 May;91(5):475-481. PMID: 28283554 |
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[4] |
siRNA Transfection ( in vitro / in vivo) / miRNA Transfection ( in vitro ) |
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AIM2 Inflammasome Is Critical for Influenza-Induced Lung Injury and Mortality Zhang H, Luo J, Alcorn JF, Chen K, Fan S, Pilewski J, Liu A, Chen W, Kolls JK, Wang J. J Immunol. 2017 Jun 1;198(11):4383-4393. PMID: 28424239 |
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[5] |
siRNA Transfection ( in vitro / in vivo) / miRNA Transfection ( in vitro ) |
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Human monocytes downregulate innate response receptors following exposure to the microbial metabolite n-butyrate |
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[6] |
siRNA Transfection ( in vitro / in vivo) / miRNA Transfection ( in vitro ) |
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Inhibition of TrkB limits development of the zebra finch song system. |
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[7] |
Plasmid DNA Transfection ( in vivo / in vitro ) |
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High-efficiency generation of induced pluripotent mesenchymal stem cells from human dermal fibroblasts using recombinant proteins Chen F, Zhang G, Yu L, Feng Y, Li X, Zhang Z, Wang Y, Sun D, Pradhan S. Stem Cell Res Ther. 2016 Jul 30;7(1):99. PMID: 27473118 |
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[8] |
siRNA Transfection ( in vitro / in vivo) / miRNA Transfection ( in vitro ) |
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Netrin-1 prevents the development of cardiac hypertrophy and heart failure. |
请参考附件：
GenomONE_参考文献_体外实验.pdf
GenomONE_参考文献_体内实验.pdf
产品列表
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 385-18731 | GenomONE® –Neo EX (FD) GenomONE® –Neo EX （FD）转染试剂套装 |
1 set | – | – |
| 381-18733 | GenomONE® –Neo EX (FD) GenomONE® –Neo EX （FD）转染试剂套装 |
4 sets | – | – |
| 389-18734 | GenomONE® –Neo EX (FD) GenomONE® –Neo EX （FD）转染试剂套装 |
16 sets | ||
| 385-18736 | GenomONE® –Neo EX (FD) GenomONE® –Neo EX （FD）转染试剂套装 |
40 sets |
GenomONE ® 仙台病毒包膜细胞融合试剂 GenomONE ® – CF EX SeV-E (HVJ-E) Cell Fusion Reagents
GenomONE ® 仙台病毒包膜细胞融合试剂
GenomONE ® – CF EX SeV-E (HVJ-E) Cell Fusion Reagents
- 产品特性
- 相关资料
- Q&A
- 参考文献
GenomONE ® –CF EX
GenomONE ® 仙台病毒包膜细胞融合试剂
GenomONE®–CF EX 含有仙台病毒包膜和专用缓冲液，可促使细胞融合。
适用于贴壁/悬浮状态的所有细胞，仅需 30 min，即可制备融合细胞和杂交瘤。
◆用途
● 制备杂交瘤
● 应用于癌细胞与树状细胞融合的癌症免疫研究
● 应用于内脏来源细胞与干细胞融合的再生医疗研究
● 应用于去核未受精卵的核移植等的发育、繁殖和育种研究
● 替代电融合法、PEG 法
◆HVJ Envelope（HVJ-E）：
HVJ 包膜（HVJ-E）是完全灭活和纯化仙台病毒（HVJ*），即只留下细胞膜融合能力的衣壳蛋白包膜。仙台病毒的HN蛋白可与细胞膜外的唾液酸受体结合，通过Ｆ蛋白的作用，引起细胞膜融合。在 HVJ-E 中，仙台病毒的基因组 RNA 已经完全失活，在人类和实验动物体内不存在感染或增殖。因而不需要特殊的操作和设备，它可以安全地在普通的实验室使用。
*HVJ：日本仙台病毒
◆HVJ-E 细胞融合原理
在低温（0 – 8℃)条件下，每一个细胞与数百个以上的 HVJ – E 接触，HVJ – E 与细胞膜上的唾液酸受体结合，通过细胞表面吸附（步骤１），细胞通过 HVJ-E 相互连接（步骤２），形成细胞彼此聚集的状态。当该细胞/HVJ-E 的复合物加热到 37℃ 时，细胞膜干扰就会进一步扩大，细胞膜内膜结构也暂时改变。这种变化是短暂的，随后会立即返回到正常结构，但是在这个期间，细胞膜利用强疏水性结合力进行相互融合（步骤３）。
| 步骤一 | 步骤二 | 步骤三 |
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◆应用方法
| 悬浮法 | 电融合法 |
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◆悬浮细胞融合案例
同种细胞融合
异种细胞融合
荧光标记的红（* 1）细胞和绿色荧光标记（* 2）细胞（每1.0×105个）在融合缓冲液 50 μL 混合后，加入 HVJ-E 冰敷５分钟，随后 37℃ 下反应 15 分钟后，融合细胞（黄色）进行了观察。
◆黏着态和悬浮态细胞融合案例
在粘合状态BHK-21（红）和在浮动状态（绿色）的P19细胞的融合
胶粘状态的HeLa S3（红）在浮动状态（绿色）的P19细胞的融合
荧光标记的（* 1）中的红，附着的细胞在 12 孔平板，绿色荧光标记（* 2）中，添加预先准备的 HVJ-E，来处理漂浮细胞１×105个的悬浮液（融合缓冲污染），并在室温下离心（1000转），每个板５分钟。随后孵育37℃15分钟后，更换增殖用的培养基继续细胞培养。观察３个小时后的融合细胞（黄色）。
◆和 PEG 法的比较
红色荧光标志(* 1）的 ratMSC（骨髓由来老鼠间叶系细胞）和绿色荧光标识的老鼠原代培养心肌细胞２×105个融合缓冲液 50 μL 中混合后，添加 HVJ – E，冰浴５分钟，然后 37℃ 孵育反应15分钟，观察融合细胞（黄色）。１-２日培养后，观察到粘着的融合细胞。在 PEG 法中融合紧接之后细胞毒性强烈，融合细胞的数量很少。
◆安全性说明
HVJ-E 失活的确认（确认无感染性病毒的存在）
| 1. |
细胞增值实验（荧光灶单元（FFU）法） 处理 LLC-MK2 细胞，一到两天后，病毒生长性的 HVJ 融合蛋白F抗体通过荧光抗体法测定，已证实未检测到病毒蛋白。<制造阶段实验> |
| 2. |
受精卵生长试验（血凝单位测定） 处理受精卵，３天后的病毒增殖，包括在 HVJ 表面的 HN 蛋白的红血细胞聚合活性（HAU）测量作为指标，已经证实，没有看到病毒的生长。<制造阶段实验> |
| 3. |
小鼠感染性研究 鼻腔给药小鼠和未处理小鼠（SIX周）在相同笼中饲养，通过测定血清中的抗 HVJ 抗体滴度进行了个体之间感染性的检测。其结果是，在非给药的情况下未观察到抗体滴度增加，表明未感染 HVJ-E。 |
| 4. |
动物个体的遗传基因导入实验 小鼠、大鼠等实验动物的各种药物实验（肺、气管、肝和静脉等）。已证实完全没有病毒感染或是可疑的事例。 |
Q&A
Q1：什么是GenomONE®–CF EX？
A1：GenomONE®–CF EX 是由 HVJ 包膜（HVJ-E）和特殊缓冲液组成的细胞融合试剂盒。 它可以用于贴壁细胞和悬浮细胞。 使用该试剂盒
A1：融合相同或不同类型的细胞只需30分钟。
Q2：HVJ-E的特性？
A2：HVJ包膜是通过完全灭活的仙台病毒（HVJ：日本血凝素病毒）纯化后的产物。 它是一种囊泡，其中仅保留仙台病毒具有细胞膜融合能力
的包膜蛋白。 众所周知，在鞘膜外耳炎（包膜）仙台病毒中的HN蛋白能识别细胞膜上的受体（在糖链的末端具有唾液酸）并且将其吸收，
从而通过F蛋白（包膜的另一组分）介导膜融合。 HVJ-E中包含的仙台病毒基因组RNA已经完全灭活，并且在人或实验动物中既不能感染
也没有增殖潜力。HVJ-E可以在普通实验室中安全使用，无需任何特殊操作或设施。
Q3：失效日期？
A3：在铝纸包装上印刷了冻干的 HVJ-E 的保质期。
Q4：对于 HVJ 灭活方法？
A4：虽然HVJ-E使用HVJ（仙台病毒/鼠副流感病毒1）作为原料，但HVJ的基因组RNA已经通过药物治疗而完全灭活*。 HVJ-E不会在人或动物
中增殖或表现出致病作用。
A4：参考文献：Prior, P. et al.: BioPharm, 22-33 (Oct. 1996) Kaneda, Y. et al.: Advances in Genetics, 53, 308-332 (2005).
Q5：病毒灭活的评估和确认？
A5：通过对培养的细胞和生长的鸡蛋进行病毒增殖性电位排除试验，证实了每批的 HVJ 已经失活。
Q6：确认病毒灭活的方法？
A6：通过以下三种方法证实了在人或实验动物中缺乏HVJ-E的感染或增殖的可能性。
A6：（1）使用培养细胞的测定
A6：（2）使用受精的鸡蛋进行测定
A6：（3）使用小鼠进行测定
Q7：实验室生物实验安全级别，使用注意事项？
A7：GenomONE® 可以在普通实验室安全使用。虽然 HVJ-E 使用 HVJ（仙台病毒/鼠副流感病毒1）作为原料，但HVJ的基因组RNA已经通过
药物治疗而完全灭活。 HVJ-E不会在人或动物中增殖或表现出致病作用。
然而，当使用该产品进行细胞融合实验时，产生的重组生物体等可能属于卡塔赫纳生物安全议定书的限制。
使用本产品生产重组生物体的实验者必须采取适当措施，防止此类生物体扩散，然后再使用本产品进行实验。
此外， DNA 重组实验，必须遵循重组 DNA 实验规则（在使用国的相关法规中规定或由相关设施的安全委员会规定），并且实验只能在具
有合适设施的实验室中进行 DNA 重组实验。
Q8：质量保证？
A8：
A8：◆ 通过对培养细胞和受精鸡蛋的病毒增殖性电位排除试验，确认每批 HVJ 的灭活。
A8：◆ 无菌检测证实了不存在细菌和真菌污染。
A8：◆ 内毒素水平已被证实小于 2.5 EU / mL（鲎细胞裂解物凝胶凝块测定）。
Q9：许可证要求和商业用途？
A9：本产品由一个或多个专利的权利要求所覆盖，并且仅授予研究用途。 未经制造商事先书面许可，不得用于任
A9：何商业或其他目的，或在修改后转售等（Ishihara Sangyo Kaisha, Ltd.）。
Q10：每种试剂的作用？
A10：
A10：◆ 冻干的 HVJ-E：HVJ-E 是通过完全灭活 HVJ（仙台病毒）制备的纯化囊泡，其中仅保留 HVJ 具有细胞膜融合能力的包膜蛋白。
A10：◆ HVJ-E悬浮缓冲液：用于复融，重悬，稀释 HVJ-E 或其他目的的生理浓度的中性缓冲液。
A10：◆ 细胞融合缓冲液：用于细胞融合的优化缓冲液。
A10：◆ “细胞融合缓冲液（20X浓缩物）”应在使用前用无菌纯水（例如，不含内毒素的注射用水）以1：20 稀释。
Q11：每种试剂的成分和浓度？
A11：无相关数据。
Q12：重组 HVJ-E 悬浮液的储存？
A12：
A12：◆ 为了连续使用，请在冰箱（２-８°C）存放最多两个星期。
A12：◆ 对于长期储存，根据每次使用量将试剂分装保存在 -80℃ 下冷冻最多３个月。 冷冻后只能解冻一次。
Q13：“HVJ-E 悬浮缓冲液”和“细胞融合缓冲液（20X）”的保存？
A13：储存在冰箱（２-８°C）。 不要冻结。
Q14：HVJ-E 的粒度？
A14：约 300 nm（200-400 nm）
Q15：HVJ-E 颗粒数？
A15：40 mL 复融的 HVJ-E 悬浮液包括约 109-1010 个 HVJ-E 颗粒。
Q16：HVJ-E 的血细胞凝集单位（HAU）？
A16：40 mL 复融的 HVJ-E 悬浮液，相当于约 1,000-2,000个血凝单位（HAU）。
Q17：使用频率？
A17：
A17：◆ 对于相同或不同类型的细胞的融合：约 100 次
A17：◆ 用于制备Ｂ细胞杂交瘤：约 10 次
参考文献
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产品列表
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 388-18721 | GenomONE ® – CF EX SeV-E (HVJ-E) 1 vial Cell Fusion Reagents GenomONE ® – CF EX 仙台病毒包膜（1只装）细胞融合试剂 |
1 set | － | － |
| 384-18723 | GenomONE ® – CF EX SeV-E (HVJ-E) 1 vial Cell Fusion Reagents GenomONE ® – CF EX 仙台病毒包膜（1只装）细胞融合试剂 |
4 sets | ||
| 382-18724 | GenomONE ® – CF EX SeV-E (HVJ-E) 1 vial Cell Fusion Reagents GenomONE ® – CF EX 仙台病毒包膜（1只装）细胞融合试剂 |
16 sets |