FIX&PERM®细胞固定/透化试剂,助力血液恶性肿瘤研究

#流式细胞术细胞内染色方法介绍

流式细胞术及细胞内蛋白质生物标记物免疫染色技术,为细胞表型和功能特性的研究和临床诊断开辟了多种新的选择。事实上,某些细胞类型的表型鉴定需要同时标记细胞表面和细胞内的标记物。此外,典型膜分子的细胞质定位被证明是最可靠的谱系标记物,如未分化白血病的胞质CD3和CD22。因此,许多细胞生物学和功能研究中,细胞内免疫染色是必要的。为此,Nordic-MUbio公司提供了一类先进的FIX&PERM®细胞固定/透化试剂产品,使得我们在分析细胞内抗原时,变得与分析细胞表面抗原一样容易。

#FIX&PERM®细胞固定/透化试剂盒介绍

FIX&PERM®细胞固定/透化试剂盒包含2种试剂:固定试剂(试剂A)和破膜试剂(试剂B)。首先用试剂A将细胞固定在悬浮液中,然后用试剂B渗透细胞膜,这个过程使抗体能够进入细胞内结构,并使细胞的形态散射特征保持完整,特定配方在减少背景的同时,允许同时添加破膜试剂和荧光染料标记抗体,用于膜蛋白及胞内成分的染色,如胞浆酶、核蛋白、癌蛋白、细胞因子、免疫球蛋白等。FIX&PERM®细胞固定/透化试剂盒用于所有市售流式细胞仪,可分析来自各种人类生物样本(血液,骨髓等)的正常和恶性白细胞群。

FIX&PERM®细胞固定/透化试剂,助力血液恶性肿瘤研究

FIX&PERM®细胞固定/透化试剂系列产品列表

货号

产品名称

规格

产品介绍

GAS-002

FIX&PERM® Kit

8*5ml

FIX&PERM®细胞固定/透化试剂盒,适用于使用流式细胞术分析来自各种人类生物样本(血液,骨髓等)的正常和恶性白细胞群。

GSA-002-1

FIX&PERM® Kit 1000

2*100ml

GAS-002M

FIX&PERM® Sample Kit

2*5ml

GSA-002A-1

FIX&PERM® Solution A(Fix)

1*100ml

FIX&PERM® Kit中的固定试剂A,用于细胞固定

GSA-002B-1

FIX&PERM® Solution B(Perm)

1*100ml

FIX&PERM® Kit中的破膜试剂B,用于渗透细胞膜

所有FIX&PERM®系列产品均符合CE认证标准

# FIX&PERM®细胞固定/透化试剂优势

  • 温和固定细胞,保留其流式细胞仪散点特性
  • 可同时表征细胞内和细胞表面标志物
  • 整个过程不到一小时,随时分析或储存24小时
  • 严格的QC程序,用质控血样测定每批的质量,分析比较得到白细胞群的散点特征,保证批间结果的一致性和可靠性
  • 适用于一系列针对细胞膜和细胞内抗原的单克隆抗体

#FIX&PERM®细胞固定/透化试剂盒在血液恶性肿瘤研究中的应用

血液恶性肿瘤,如白血病和淋巴瘤,是一种始于骨髓等血液形成组织细胞的癌症。Ki-67是位于细胞核内的细胞增殖标记物,在这些血源性癌症患者中表达水平对临床有一定指示作用。在组织病理学中常用免疫组织化学方法检测Ki-67,而流式细胞术应用的较少,因此在不同来源的骨髓细胞群中可检测到的参数有限。 Nies等人利用流式细胞术分析了解Ki-67在癌症患者中的表达,通过对Ki-67在骨髓造血、单核细胞生成和造血细胞成熟阶段的表达情况分析,建立健康个体对于不同造血细胞谱系的参考值。采用FIX&PERM®细胞固定/透化试剂盒结合Ki-67免疫染色和流式细胞仪软件测定不同成熟途径中细胞的增殖变化。因此,可以在不同的血细胞谱系和成熟阶段确定这个细胞周期参数的参考值。

上海金畔生物科技有限公司作为专业服务中国生命科学领域16年的供应商,以专业和优质的服务赢得了众多客户的支持和信赖!目前已成为多家世界知名跨国企业中国区研发和生产基地、制药企业与诊断企业以及各大高校与科研院所官方采购平台的指定供应商。其中上海金畔生物科技有限公司代理的Nordic-MUbio品牌FIX&PERM®细胞固定/透化试剂盒广泛应用于医院和高校等科研机构,小编汇总了部分适用于FIX&PERM®细胞固定/透化试剂盒的抗体产品表,更多FIX&PERM®细胞固定/透化试剂盒产品相关信息欢迎致电上海金畔生物科技有限公司全国客服热线021-50837765或登录官网www.jinpanbio.cn查询和了解。

FIX&PERM®细胞固定/透化试剂盒适用的部分小鼠抗人单克隆抗体产品列表

Antigen

Clone

Isotype

Format

Quantity

Cat. No.

CD3

UCHT1

IgG1

Purified

0.2 mg

GM-4011

FITC-labeled

100 tests

GM-4012

PE-labeled

100 tests

GM-4013

CD22

RFB4

IgG1

Purified

0.2 mg

GM-4051

FITC-labeled

100 tests

GM-4052

PE-labeled

100 tests

GM-4053

MPO-C2

8E6

IgG1

Purified

0.2 mg

GM-4191

FITC-labeled

100 tests

GM-4192

PE-labeled

100 tests

GM-4193

Lactoferrin

4C5

IgG1

Purified

0.2 mg

GM-4111

PE-labeled

100 tests

GM-4113

Lysozyme

LZ-2

IgG1

Purified

0.2 mg

GM-4131

FITC-labeled

100 tests

GM-4132

CD68

Ki-M7

IgG1

FITC-labeled

100 tests

GM-4152

 

 

FIX&PERM®细胞固定/透化试剂,助力血液恶性肿瘤研究

Nordic-MUbio是荷兰的一家知名的免疫学试剂生产厂家,2013年2月14日,Nordic收购MUbio并正式更名为Nordic-MUbio。同年12月,收购An Der Grub Bio Research GmbH ( ADG ),增加FIX&PERM®细胞固定/透化试剂产品线。Nordic-MUbio严格遵守IS09001标准生产高质量的抗体,主要包括针对细胞粘附蛋白、核蛋白和骨架蛋白等抗体,80%以上的抗体经过冷冻组织免疫组化检测,近70%的产品通过流式细胞术验证,50%的产品通过WB验证。同时Nordic-MUbio也是斑马鱼抗体开发的引领者,拥有50多种可用于斑马鱼荧光检测的抗体。更多免疫学产品信息欢迎致电上海金畔生物科技有限公司全国客服热线021-50837765或登录官网www.jinpanbio.cn查询和了解。

参考文献:

  1. Nies, K.P.H. et al. Determination of the proliferative fractions in differentiating hematopoietic cell lineages of normal bone marrow. Cytometry A. 2018 93(11):1097-1105. PMID: 30176186.
  2. Integration of the Ki-67 proliferation index into the Ogata score improves its diagnostic sensitivity for low-grade myelodysplastic syndromes. Leuk Res. 2022 Feb;113:106789. doi: 10.1016/j.leukres.2022.106789.
  3. Optimized gating strategy and supporting flow cytometry data for the determination of the Ki-67 proliferation index in the diagnosis of myelodysplastic syndrome. Data Brief. 2022 Feb 22;41:107976. doi: 10.1016/j.dib.2022.107976.
  4. Determination of the proliferative fractions in differentiating hematopoietic cell lineages of normal bone marrow. Cytometry A. (2018) 93, 1097-1105 . doi: 10.1002/cyto.a.23564

免疫组化试验抗体选择及常用染色方法

免疫组化试验抗体选择及常用染色方法一、免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)
免疫组织化学是利用抗原抗体的特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究。免疫组织化学染色技术不仅有较高的敏感性和特异性,其特点是将形态学改变与功能、代谢变化结合起来,直接在组织切片,细胞涂片或培养细胞爬片上定位一些蛋白质和多肽类物质的存在,并可精确到亚细胞结构水平,结合电子计算机图像分析系统或激光扫描共聚集显微术等技术,对被检物质进行定量分析。
免疫组化实验所用的组织和细胞标本有哪些
实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理大片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响,但可进行抗原修复,是免疫组化中首选的组织标本制作方法。
石蜡切片为什么要做抗原修复?有哪些方法
石蜡切片标本均用甲醛固定,使得细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇,同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。所以要求在进行IHC染色时,需要先进行抗原修复或暴露,即将固定时分子之间所形成的交联破坏,而恢复抗原的原有空间形态。
常用的抗原修复方法有微波修复法,高压加热法,酶消化法,水煮加热法等,常用的修复液是pH6.0的0.01 mol/L的柠檬酸盐缓冲液。

二、免疫组化实验用抗体的选择
1、一抗选择要点
(1)选择单克隆还是多克隆抗体。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体,单克隆抗体能目标明确地与单一特异抗原决定簇结合,就象导弹精确地命中目标一样。另一方面,即使是同一个抗原决定簇,在机体内也可以由好几种克隆产生抗体,形成好几种单克隆抗体混杂物,称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中,一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对较低;而多克隆抗体特异性稍弱,抗体的亲和力强,灵敏度高,但易出现非特异性染色(可以通过封闭等有所避免)。
(2)种属来源。一般家兔来源的抗体多是多克隆;而小鼠来源的抗体多是单克隆,但也有另外。这条主要要与后面的二抗来源相匹配。
(3)实验目的是检测什么种属的抗原,即species reactivity。这一点很重要,一般说明书上都有注明,如小鼠Ms、大鼠Rat、人Hum等等。
(4)能否做免疫组化。一般一抗说明书都会注明做WB、IHC、ICC、IF等,建议最好选择注明的抗体,因为一般都是经过文章证明。
(5)检测标本类型。用于检测石蜡切片还是冰冻切片,一般能做石蜡切片的抗体,可能都可以用来检测冰冻切片,但能做冰冻切片的抗体,不一定能检测石蜡切片中的抗原。
(6)生产厂家。国外著名抗体生产商原装抗体质量一般没问题,尤其是美国Lifespan公司生产的IHCPlusAntibodies系列抗体,全部经过病理组织切片检测验证,100%质量保证,国内上海金畔生物科技有限公司有售,就是价格有点贵;而国内分装厂家用的一抗工作液,价格便宜,但有时结果的稳定性和重复性稍差,不同批次重复性较差。
(7)价格与质量的矛盾。我个人认为一抗原装质量可能会好点,因为许多一抗避免反复冻融,且在稀释液中稳定性较差(若时间长),但价格较贵。

2、二抗选择要点
(1)种属来源。主要根据一抗种属来源来决定购买二抗来源,如一抗是小鼠来源,那二抗就买抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。
(2)标记物的选择。有HRP、Biotin、荧光素等标记物。一般SP三步法二抗选择Biotin标记的二抗,以与后面的SP结合反应;而免疫荧光染色就需要购买不同荧光素标记的二抗,如罗丹明、FITC、Cy3等常用荧光素。这主要与后面有无三抗和三抗种类有关。
(3)选择IgM还是IgG。一般一抗是IgM,那么二抗就选择IgM;反之,一抗是IgG,则二抗选择IgG。
(4)生产厂家。一般SP三步法我们实验室选择中杉金桥的二抗染色试剂盒,内含有工作液的二抗,故试验中只需摸索一抗的浓度即可,效果还可以;而免疫荧光的二抗我一般选择KPL公司,效果还不错。

三、免疫组化常用的染色方法有哪些
根据标记物的不同分为免疫荧光法,免疫酶标法,亲和组织化学法,后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位,其中生物素——抗生物素染色法最常用。
免疫组织化学染色方法 IHC染色方法有很多种,按部标记物的性质可分为荧光法(荧光素标记),酶法(辣根过氧化物酶,碱性磷酸酶),免疫金银及铁标记技术等;按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步,三步或多步法);按结合方式可分为抗原-抗体结合,如PAP法和标记的葡聚糖聚合物(labeled dextran polymer,LDP)法,以及亲和连接,如ABC法、标记的链亲和素-生物素(labeled streptoavidin-biotin ,LSAB)法等,其中LSAB是最常用的使用方法。
影响免疫组化染色质量的因素很多,在实验中应注意组织的取材和固定,选择质量好的商品化抗体,恰当的选择和使用封闭和抗原修复手段,严格的技术操作和对照等。由于组织内待测抗原已被分解破坏,或抗原含量过低、或固定剂的使用不当及抗体质量不佳和稀释度不当等可出现假阴性反应;反之,由于抗体与非待检抗原发生交叉反应,或组织对抗体的非特异性吸附及内源性过氧化酶(endogenousperoxidase)没有被阻断等还可出现假阳性结果。这些可造成判断的失误。

细胞转化分析—CytoSelect™ 96孔板软琼脂克隆形成试剂盒

肿瘤是指细胞在致瘤因素作用下,基因发生了改变,失去对其生长的正常调控,导致异常增生。在癌变过程中,发生转化的细胞也具有上述特征,如生长过程中对外源生长刺激因子的依赖减少、失去细胞接触抑制效应,并通常导致永生化,这种锚定-不依赖性生长是肿瘤细胞的标识之一,也是检测恶性转化细胞最准确和严谨的标识。软琼脂培养法常用于检测肿瘤细胞和转化细胞系,该分析方案是监测锚定-不依赖性生长的常用手段。软琼脂培养法原理是利用癌细胞接触抑制效应的丧失,能在悬浮状态下能很好地成簇生长(一般正常的非转化细胞不能在悬浮状态下生长)。

细胞转化分析—CytoSelect™ 96孔板软琼脂克隆形成试剂盒常规软琼脂克隆形成实验是将细胞置于包含有软琼脂半干培养基的100mm或者60mm大小培养皿中,让细胞在软琼脂中培养3-4周以形成克隆,然后手动计数细胞克隆的形成数。该方法较为繁琐并耗时,不适合同时监测大量样品,而且在手动计数过程中带有非常大的不确定性,特别是当形成的细胞克隆大小差异较大时,很难得到更有效、精确的数据。

Cell BioLabs的CytoSelect™ 96孔板软琼脂克隆形成分析试剂盒(CytoSelect™  96-Well Cell Transformation Assay)克服了上述难题,使用该试剂盒不再需要3-4周漫长的克隆形成过程,只需要6-8天;而且无需进行手动计数,而是应用MTT(普通光分析)或CyQuant® GR Dye荧光染料(荧光分析),最终使用分光光度计或荧光计读取数值。由于采用上述技术,该软琼脂克隆形成分析试剂盒提供了一个定量的、高通量的方案来精确的检测细胞转化;另外,由于减少了细胞培养时间(6-8天),因此非常适用于一些原癌基因或siRNA的瞬时转染实验中的细胞分析。

常规软琼脂克隆形成分析 高级软琼脂克隆形成分析(可回收)

细胞转化分析—CytoSelect™ 96孔板软琼脂克隆形成试剂盒

细胞转化分析—CytoSelect™ 96孔板软琼脂克隆形成试剂盒

  • 克隆形成时间由原来的2-3周减少为仅需要一周
  • 结果可以直接使用荧光计读取,无需手动计数
  • 克隆形成时间由原来的2-3周减少为仅需要一周
  • 结果可以直接使用分光光度计或荧光计读取,无需手动计数
  • 经形成实验分析后的细胞可以回收并能用于后继实验
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    产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
    CytoSelect™ 96-Well Cell Transformation Assay (Soft Agar Colony Formation)  CBA-130 荧光法检测,一次96孔板分析
    CBA-130-5 荧光法检测,五次96孔板分析
    产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
    CytoSelect™ 96-Well Cell Transformation Assay (Cell Recovery Compatible)    CBA-135 光度计检测,一次96孔板分析
    CBA-135-5 光度计检测,五次96孔板分析
    CBA-140 荧光计检测,一次96孔板分析
    CBA-140-5 荧光计检测,五次96孔板分析

    Cell BioLabs的CytoSelect™ 96孔板软琼脂克隆形成分析试剂盒分两种,一种是常规软琼脂克隆形成分析,另一种是改进后的高级软琼脂克隆形成分析。常规软琼脂形成试剂盒能大大减少实验时间,并使用荧光染料提高了数据的准确性;高级软琼脂克隆形成分析试剂盒则提供了细胞回收方案,而且还分为分光光度计和荧光剂两种检测手段,您可根据您的实验要求选择最合适的细胞转化分析方案。

    Cell BioLabs为您提供全套的细胞分析检测方案,针对于细胞的克隆形成及细胞转化,除了上述软琼脂克隆形成试剂盒外,还有针对细胞包括肿瘤细胞的药物敏感性分析和克隆性肿瘤细胞分离试剂盒提供。另外,Cell Biolabs还开发出其他多方位的基于细胞功能特征,特别是肿瘤细胞的特性的细胞粘附分析、细胞转移与浸润、细胞吞噬快速分析、细胞活力/死亡/毒性分析、细胞衰老及收缩检测,以及血管生成分析等多种分析试剂盒。如果您对上述细胞分析方案感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询细胞研究的相关实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

    细胞培养基重要原料——氨基酸

    氨基酸是一种同时含有羧基(-COOH)和氨基(-NH2)的化学分子,是构成蛋白质的基本单位。在Eagle(1955)、Dulbecco和Freeman(1959)等人开创性地研究出了一种含有氨基酸、维生素的营养液(Dulbecco’s Modification of Eagles Medium, DMEM),使得细胞可以在体外进行单层贴壁培养开始,氨基酸就被认为是细胞体外培养必不可少的营养成分。

    细胞培养基重要原料——氨基酸

    氨基酸化学式

    氨基酸在细胞内的重要生理作用主要体现在以下几个方面:

    • 氨基酸作为蛋白质的基本组成单位,参与合成细胞内所有蛋白质,包括细胞骨架、酶、受体和信号分子等;
    • 氨基酸可以用于合成某些具有重要生理作用的含氮化合物,如核酸、尼克酰胺等;
    • 某些氨基酸还具有独特的生理作用,如甘氨酸参与生物转化作用,丙氨酸和谷氨酸参与细胞内氨的运输等;
    • 氨基酸还可以转变成糖和脂肪,参与氧化途径并为细胞代谢提供能量。

    下图展示了CHO细胞中氨基酸参与的细胞内代谢途径(绿色线条表示碳代谢途径,单字母表示氨基酸)。

    细胞培养基重要原料——氨基酸

    图片来源:Kanehisa et al. 2014

    氨基酸作为在大规模细胞培养中不可缺少的成分之一,对细胞的状态,高密度的维持以及蛋白产量、质量都发挥着重要的作用。并且细胞培养过程中氨基酸会随细胞表达的蛋白不同而发生变化和消耗,通常需要在细胞培养工艺的不同阶段添加不同成分和比例的氨基酸进行补充。

    细胞能利用的氨基酸是L型同分异构体,D型氨基酸不能被利用。不同的细胞对氨基酸的需求各异,但根据细胞自身能否合成,可将常见的20种氨基酸分为必需氨基酸(Essential amino acids)和非必需氨基酸(Nonessential amino acids)。其中,必需氨基酸不能由细胞自身合成,只能从培养基中获取,包括组氨酸(L-Histidine)、异亮氨酸(L-Isoleucine)、亮氨酸(L-Leucine)、赖氨酸(L-Lysine)、甲硫氨酸(L-Methionine)、苯丙氨酸(L-Phenylalanine)、苏氨酸(L-Threonine)、色氨酸(L-Tryptophan)、缬氨酸(L-Valine)、半胱氨酸(L-Cysteine)、酪氨酸(L-Tyrosine)、精氨酸(L-Arginine)及谷氨酰胺(L-Glutamine),因此在细胞培养基配方中,必需氨基酸的浓度通常较高。非必需氨基酸(Nonessential amino acids)包括了丙氨酸(L-Alanine)、天冬氨酸(L- Aspartic acid)、天冬酰胺(L- Asparagine)、谷氨酸(L- Glutamic acid)、脯氨酸(L- Proline)、丝氨酸(L-Serine)、甘氨酸(Glycine),这些氨基酸虽然可以由细胞自身合成,或通过转氨作用由其他物质转化而来,但在细胞培养基中添加适当浓度的非必需氨基酸能减轻细胞在合成方面的负担,提高其他营养成分的利用率。除了上述20种编码蛋白质的氨基酸以外,在细胞培养基中常用到的还包括L-胱氨酸(由2个L-半胱氨酸以二硫键结合形成)和L-羟脯氨酸等。

    上海金畔生物科技有限公司代理的Applichem品牌可提供品类齐全的高品质非动物源氨基酸系列产品,可满足生物制药企业大规模细胞培养的高标准级别需求,产品详情见下表。

    货号

    中文名称

    英文名称

    级别

    CAS No.

    A3198

    L-丙氨酰-L-谷氨酰胺

    L-Alanyl-L-Glutamine

    细胞培养级

    39537-23-0

    A1688

    L-丙氨酸

    L- Alanine

    欧洲药典、美国药典

    56-41-7

    A1668

    L-天冬酰胺,一水

    L-Asparagine 1-hydrate

    欧洲药典、美国药典

    5794-13-8

    A1701

    L-天冬氨酸

    L-Aspartic Acid

    欧洲药典、美国药典

    56-84-8

    A1425

    L-半胱氨酸

    L-Cysteine

    药典级

    52-90-4

    A1702

    L-半胱氨酸盐酸盐,一水

    L-Cysteine Hydrochloride 1-hydrate

    欧洲药典、美国药典

    7048-04-6

    A1703

    L-胱氨酸

    L-Cystine

    欧洲药典

    56-89-3

    A0622

    L-胱氨酸盐酸盐

    L-Cystine Dihydrochloride

    化学纯

    30925-07-6

    A1704

    L-谷氨酸

    L-Glutamic Acid

    欧洲药典、美国药典

    56-86-0

    A1420

    L-谷氨酰胺

    L-Glutamine

    欧洲药典、美国药典

    56-85-9

    141340

    甘氨酸

    Glycine

    欧洲药典、美国药典

    56-40-6

    A1705

    L-羟脯氨酸

    L-Hydroxyproline pure

    化学纯

    51-35-4

    A1440

    L-异亮氨酸

    L-Isoleucine

    欧洲、美国药典

    73-32-5

    A1426

    L-亮氨酸

    L-Leucine

    欧洲药典、美国药典

    61-90-5

    A1342

    L-赖氨酸 一水

    L-Lysine

    药典级

    39665-12-8

    A1706

    L-赖氨酸盐酸盐

    L-Lysine Monohydrochloride

    欧洲药典、美国药典

    657-27-2

    A1340

    L-甲硫氨酸

    L-Methionine

    欧洲药典、美国药典

    63-68-3

    A1344

    L-苯丙氨酸

    L- Phenylalanine

    欧洲药典、美国药典

    63-91-2

    A1707

    L-脯氨酸

    L- Proline

    欧洲药典、美国药典

    147-85-3

    A1708

    L-丝氨酸

    L-Serine

    欧洲药典、美国药典

    56-45-1

    A1419

    L-苏氨酸

    L-Threonine

    欧洲药典、美国药典

    72-19-5

    A1645

    L-色氨酸

    L-Tryptophan

    欧洲药典、美国药典

    73-22-3

    A1677

    L-酪氨酸

    L-Tyrosine

    欧洲药典、美国药典

    60-18-4

    A1637

    L-缬氨酸

    L-Valine

    欧洲药典、美国药典

    72-18-4

    细胞培养基重要原料——氨基酸

    PanReac AppliChem是来自欧洲品质优良的生物化学试剂与制药原料生产商之一,已通过多项ISO 9001质量体系认证,是全球科研、知名CRO企业、大型制药、诊断、食品、化妆品等工业企业的重要供应商。作为全球多家知名培养基生产企业和制药企业长期固定供应商,AppliChem全面提供细胞培养级、符合药典级、生化级、超纯级等培养基化学品组分,包括氨基酸、蛋白质、维生素、抗生素、脂类、无机盐、缓冲液、泡沫稳定剂、指示剂等和制药工艺中常用化学品如尿素、Tris、葡聚糖等。

    上海金畔生物科技有限公司是PanReac AppliChem的中国区一级代理商,为用户提供完善的技术支持与售后服务。如对以上产品感兴趣欢迎拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或登录网站www.jinpanbio.cn了解更多信息。

    参考文献:

    1. Salazar A, Keusgen M , Hagen J V . Amino acids in the cultivation of mammalian cells[J]. Amino Acids, 2016, 48(5).
    2. Ritacco F V , Wu Y , Khetan A. Cell culture media for recombinant protein expression in Chinese hamster ovary (CHO) cells: History, key components, and optimization strategies[J]. Biotechnology Progress, 2018, 34(6).

    Cell Biolabs彗星实验试剂盒

    由于环境因素和细胞内的正常代谢过程造成的DNA损伤,每个细胞每天都会发生1,000到1,000,000个。虽然这些只占人类基因组约60亿个碱基中的一小部分,但如果关键基因损伤未及时修复,可能会阻碍细胞的正常生理功能,进而增加癌变可能。彗星实验,或称单细胞凝胶电泳(Single cell gel electrophoresis,SCGE),是一种测量单个细胞DNA损伤的常用技术。其原理很简单,即在电泳场中,将受损细胞DNA(包含片段和链断裂)与完整的DNA分离,通过显微镜可观察到损伤细胞呈现出典型的彗星状尾巴,然后通过测量计算彗尾大小对比出细胞DNA损伤的程度。因为彗星实验的特点,该方法几乎被用来评估任何类型的真核细胞的 DNA 修复能力,包括双、单链断裂的不同的 DNA 损伤情况。是一种能快速、大通量检测真核细胞DNA损伤进而判别遗传毒性的技术。

    Cell Biolabs彗星实验试剂盒

    彗星实验结果图

    彗星实验原理虽简单,但操作繁琐,需要丰富的实验经验和技巧,尤其常常出现的“脱胶”问题,困扰了许多科研人员。除此之外,有时为了跑出完美的“彗星”图案放在paper里,还需要重复做许多次实验,费时费力。为了解决上述问题,我们推荐CellBiolabs的OxiSelectTMComet Assay Kit即彗星实验试剂盒来检测细胞的DNA损伤。该试剂盒不仅能让彗星实验化繁为简,还有两种不同规格(3孔和96孔)的细胞电泳凝胶板供选择,让少量样本和大量样本的DNA损伤检测通通轻松hold住。用该试剂盒做彗星实验流程如下图。

    Cell Biolabs彗星实验试剂盒

    除了操作简便,OxiSelectTMComet Assay Kit还有以下优点:

    1)      适用于各种DNA损伤检测,是一款非常好用的DNA损伤检测筛选工具;

    2)      试剂盒中的载玻片经过特殊处理以粘附低熔点琼脂糖,避免“脱胶”问题出现;

    3)      采用特殊的DNA荧光染料,能有效降低背景干扰,更加方便读取实验结果。


    彗星实验试剂盒信息:

    品名

    货号

    规格

    说明

    OxiSelectTM Comet Assay Kit (3-Well Slides)

    STA-350

    15 assays

    试剂盒内有5张3孔载玻片和彗星实验所需的低熔点琼脂糖、裂解液及DNA荧光染料等,共可检测15个样品。

    OxiSelectTM Comet Assay Kit (3-Well Slides)

    STA-351

    75 assays

    试剂盒内有25张3孔载玻片和彗星实验所需的低熔点琼脂糖、裂解液及DNA荧光染料等,共可检测75个样品。

    OxiSelectTM Comet Assay Kit (96-Well Slides)

    STA-355

    96 assays

    试剂盒内有1张96孔载玻片和彗星实验所需的低熔点琼脂糖、裂解液及DNA荧光染料等,共可检测96个样品。

    为了满足客户更多样的实验需求,彗星实验试剂盒内特殊处理电泳载玻片还可以单独购买,详情如下:

    品名

    货号

    规格

    产品图片

    Comet Assay Slides, 3-Well

    STA-352

    5 slides

    Cell Biolabs彗星实验试剂盒

    STA-353

    25 slides

    Comet Assay Slides, 96-Well

    STA-356

    1 slides

    Cell Biolabs彗星实验试剂盒

    STA-356-5

    5 slides

    产品部分发表文献:

    • Wang, T. et al. (2021). The effects of glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency on benzene-induced hematotoxicity in mice. Ecotoxicol Environ Saf. 226:112803. doi: 10.1016/j.ecoenv.2021.112803.
    • Ciminera, A.K. et al. (2021). Elevated glucose increases genomic instability by inhibiting nucleotide excision repair. Life Sci Alliance. 4(10):e202101159. doi: 10.26508/lsa.202101159.
    • Hudita, A. et al. (2021). Bioinspired silk fibroin nano-delivery systems protect against 5-FU induced gastrointestinal mucositis in a mouse model and display antitumor effects on HT-29 colorectal cancer cells in vitro. Nanotoxicology. doi: 10.1080/17435390.2021.1943032.
    • Hung, S.Y. et al. (2021). Bavachinin Induces G2/M Cell Cycle Arrest and Apoptosis via the ATM/ATR Signaling Pathway in Human Small Cell Lung Cancer and Shows an Antitumor Effect in the Xenograft Model. J Agric Food Chem. doi: 10.1021/acs.jafc.1c01657.
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    • Cho, D.H. et al. (2021). Far-infrared irradiation inhibits breast cancer cell proliferation independently of DNA damage through increased nuclear Ca2+/calmodulin binding modulated-activation of checkpoint kinase 2. J Photochem Photobiol B. doi: 10.1016/j.jphotobiol.2021.112188.
    • Li, J. et al. (2021). Melatonin ameliorates cypermethrin-induced impairments by regulating oxidative stress, DNA damage and apoptosis in porcine Sertoli cells. Theriogenology. 167:67-76. doi: 10.1016/j.theriogenology.2021.03.011.
    • Li, M.Z. et al. (2021). Discovery of MTR-106 as a highly potent G-quadruplex stabilizer for treating BRCA-deficient cancers. Invest New Drugs. doi: 10.1007/s10637-021-01096-4.
    • Jeske, R. et al. (2021). Agitation in a Microcarrier-based Spinner Flask Bioreactor Modulates Homeostasis of Human Mesenchymal Stem Cells. Biochem Eng J. doi: 10.1016/j.bej.2021.107947.
    • Zhou, W. et al. (2021). Fine polystyrene microplastics render immune responses more vulnerable to two veterinary antibiotics in a bivalve species. Mar Pollut Bull. 164:111995. doi: 10.1016/j.marpolbul.2021.111995.
    • Park, K. et al. (2021). Aicardi-Goutières syndrome-associated gene SAMHD1 preserves genome integrity by preventing R-loop formation at transcription–replication conflict regions. PLoS Genet. 17(4): e1009523. doi: 10.1371/journal.pgen.1009523.
    • Ramos, H. et al. (2021). A selective p53 activator and anticancer agent to improve colorectal cancer therapy. Cell Rep. 35(2):108982. doi: 10.1016/j.celrep.2021.108982.
    • Planelló, R. et al. (2021). Genotoxic effects and transcriptional deregulation of genetic biomarkers in Chironomus riparius larvae exposed to hydroxyl- and amine-terminated generation 3 (G3) polyamidoamine (PAMAM) dendrimers. Sci Total Environ. doi: 10.1016/j.scitotenv.2021.145828.
    • Fan, D. et al. (2021). A Novel Salt Inducible Kinase 2 Inhibitor, ARN-3261, Sensitizes Ovarian Cancer Cell Lines and Xenografts to Carboplatin. Cancers (Basel). 13(3):446. doi: 10.3390/cancers13030446.
    • Siemionow, M. et al. (2020). Transplantation of Dystrophin Expressing Chimeric (DEC) Human Cells of Myoblast/MSC Origin Improves Function in Duchenne Muscular Dystrophy Model. Stem Cells Dev. doi: 10.1089/scd.2020.0161.
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    • Shibayama, Y. et al. (2020). Aberrant (pro)renin receptor expression induces genomic instability in pancreatic ductal adenocarcinoma through upregulation of SMARCA5/SNF2H. Commun Biol. 3(1):724. doi: 10.1038/s42003-020-01434-x.
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    • Ibnu Rasid, E.N. et al. (2020). Effect of Dioscorea hispida var. Daemona (Roxb) Prain & Burkill on Oxidative Stress and DNA Damage in the Liver of Pregnant Rats. Int J Biomed Sci. 16(3).
    • Le, B.V. et al. (2020). TGFβR-SMAD3 Signaling Induces Resistance to PARP Inhibitors in the Bone Marrow Microenvironment. Cell Rep. 33(1):108221. doi: 10.1016/j.celrep.2020.108221.
    • Klotz-Noack, K. et al. (2020). SFPQ Depletion Is Synthetically Lethal with BRAFV600E in Colorectal Cancer Cells. Cell Rep. 32(12):108184. doi: 10.1016/j.celrep.2020.108184.
    • Ito, S.S. et al. (2020). Inhibition of the ATR kinase enhances 5-FU sensitivity independently of non-homologous end-joining and homologous recombination repair pathways. J Biol Chem. doi: 10.1074/jbc.RA120.013726.
    • Klak, M. et al. (2020). Irradiation with 365 nm and 405 nm wavelength shows differences in DNA damage of swine pancreatic islets. PLoS One. 15(6):e0235052. doi: 10.1371/journal.pone.0235052.
    • Khalil, A.M. et al. (2020).  Association between Mobile Phone Using and DNA Damage of Epithelial Cells of the Oral Mucosa. J Biotechnol Biomed. 3(2020): 50-66. doi: 10.26502/jbb.2642-91280027.
    • Wang, Y. et al. (2020). Targeting therapeutic vulnerabilities with PARP inhibition and radiation in IDH-mutant gliomas and cholangiocarcinomas. Sci Adv. doi: 10.1126/sciadv.aaz3221.
    • Fang, Y. et al. (2020). Epigenetic dysregulation of Mdr1b in the blood-testis barrier contributes to dyszoospermia in mice exposed to cadmium. Ecotoxicol Environ Saf. 190:110142. doi: 10.1016/j.ecoenv.2019.110142.
    • Cupello, S. et al. (2019). Distinct roles of XRCC1 in genome integrity in Xenopus egg extracts. Biochem J. 476(24):3791-3804. doi: 10.1042/BCJ20190798.
    • Naci, D. et al. (2019). Cell adhesion to collagen promotes leukemia resistance to doxorubicin by reducing DNA damage through the inhibition of Rac1 activation. Sci Rep. 9(1):19455. doi: 10.1038/s41598-019-55934-w.
    • Lu, S. et al. (2019). Additive effects of a small molecular PCNA inhibitor PCNA-I1S and DNA damaging agents on growth inhibition and DNA damage in prostate and lung cancer cells. PLoS One. 14(10):e0223894. doi: 10.1371/journal.pone.0223894.

    Cell Biolabs彗星实验试剂盒

    上海金畔生物科技有限公司是Cell Biolabs品牌全国一级代理,为用户提供完善的技术支持与售后服务。如对产品感兴趣欢迎拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或了解更多信息。

    高效实现细胞表面与胞内蛋白共染的流式细胞处理方法

    在科研和临床诊断中,因流式细胞术可以对细胞内的生物标志物进行免疫染色和鉴定,其在鉴定细胞表型和功能中的应用已越来越重要。在细胞表型鉴定工作中,由于一些典型的膜分子定位在细胞质内,如未分化白细胞的CD3和CD22定位在细胞质中,因此除了对细胞表面分子的染色,细胞内生物分子的免疫染色是必不可少的。

    高效实现细胞表面与胞内蛋白共染的流式细胞处理方法

    为了使细胞内生物分子的免疫染色达到更好的效果,Nordic-MUbio推出了一款适用于流式细胞固定和通透的试剂盒FIX&PERM®,该试剂盒可以同时对细胞表面和细胞内的生物标志物进行免疫染色,将整个流式细胞免疫染色时间缩短到1h以内,为细胞内生物分子的鉴定提供了一种更好、更高效的选择。有研究者使用FIX&PERM®试剂盒,对多种细胞表面CD分子和细胞内Ki-67(一种细胞内的增殖标志物)进行双重染色,通过流式分析增殖细胞(Ki-67阳性)数量,来证明疾病状态之间存在着显著差异。

    FIX&PERM®试剂盒由A液和B液两个试剂构成,其中A液能够温和地固定细胞,B液则起到通透细胞膜的作用。FIX&PERM®试剂盒的独特配方能有效地降低背景,把通透液和抗体一起加入细胞,还能让抗体更高效地穿过细胞膜,与细胞内生物分子结合(如细胞质或核酶、癌蛋白、细胞因子、免疫球蛋白等)。

    FIX&PERM® Cell Fixation and Permeabilization Kit

    货号: GAS-002

    规格:8 x 5ml

    应用:Flow Cytometry

    FIX&PERM®优势特点:

    • 固定细胞更加温和,保持细胞在流式细胞仪中的分散性;
    • 可同时对细胞内和细胞表面的生物分子进行双重染色;
    • 用时更短——-整个处理过程可在1h内完成,处理后的细胞可以立即检测,也可以暂时保存后检测(不超过24h);
    • 质控更严格——每个批次产品都要用已标定的血液样本检测,通过比较获得的白细胞分散性特征来确保不同批次试剂盒的一致性和稳定性。
    • FIX&PERM®试剂盒还可搭配Nordic-MUbio的细胞内生物标志物抗体,使流式检测效果更佳。

    FIX&PERM®使用方法

    1. 取50µl待测样品(如全血、骨髓或单核细胞悬液)于5ml离心管中;
    2. 加入100µl A液(固定液),室温孵育15min;
    3. 加入5ml PBS,300g离心5min;
    4. 移除上清,加入100µl B液(通透液)和20µl流式抗体,低速涡旋1-2s;
    5. 室温孵育15min;
    6. 参照第3步,用PBS再洗一遍细胞;
    7. 移除上清,用鞘液重悬细胞后做流式分析;如不能立即检测,可用0.5ml 1.0%甲醛重悬细胞,2-8℃避光保存,并在24h内检测。

    Nordi-MUbio热销单克隆流式抗体

    Nordic-MUbio还提供了一些列小鼠抗人PE/FITC耦连单克隆流式抗体,与FIX&PERM®试剂盒配合使用效果更佳。

    抗原

    克隆

    IgG类型

    抗体偶联物

    规格

    货号

    CD3

    UCHT1

    IgG1

    Purified

    0.2 mg

    GM-4011

    FITC-labeled

    100 tests

    GM-4012

    PE-labeled

    100 tests

    GM-4013

    CD22

    RFB4

    IgG1

    Purified

    0.2 mg

    GM-4051

    FITC-labeled

    100 tests

    GM-4052

    PE-labeled

    100 tests

    GM-4053

    Lactoferrin

    4C5

    IgG1

    Purified

    0.2 mg

    GM-4111

    PE-labeled

    100 tests

    GM-4113

    Myeloperoxidase

    8E6

    IgG1

    Purified

    0.2 mg

    GM-4191

    (MPO-C2)

    FITC-labeled

    100 tests

    GM-4192

    PE-labeled

    100 tests

    GM-4193

    Lysozyme

    LZ-2

    IgG1

    Purified

    0.2 mg

    GM-4131

    FITC-labeled

    100 tests

    GM-4132

    CD68

    Ki-M7

    IgG1

    FITC-labeled

    100 tests

    GM-4152

    IL-1 beta

    FIB3

    IgG1

    FITC-labeled

    100 tests

    GM-4162

    IFN-gamma

    GZ4

    IgG1

    FITC-labeled

    100 tests

    GM-4172

    Negative control

    Vl-AP

    IgG1

    FITC-labeled

    50 tests

    GIC-201

    PE-labeled

    50 tests

    Lysozyme

    LZ-2

    IgG1

    FITC-labeled

    50 tests

    GIC-206

    Lactoferrin

    4C5

    IgG1

    PE-labeled

    50 tests

    Myeloperoxidase

    8E6

    IgG1

    FITC-labeled

    50 tests

    GIC-212

    Lactoferrin

    4C5

    IgG1

    PE-labeled

    50 tests

    Myeloperoxidase

    8E6

    IgG1

    FITC-labeled

    50 tests

    GIC-213

    CD3

    UCHT1

    IgG1

    PE-labeled

    50 tests

    Myeloperoxidase

    8E6

    IgG1

    FITC-labeled

    50 tests

    GIC-214

    CD22

    RFB4

    IgG1

    PE-labeled

    50 tests

    高效实现细胞表面与胞内蛋白共染的流式细胞处理方法

    图1  Flow cytrometric analysis of normal bone marrow (BM) after fixation and pemeabilization using GAS-002, followed by immunostaining for lactoferrin and MPO-C2.

    图2  Immunostaining with Nordic-MUbio CD22-PE conjugate of undifferentiated leukemia cells of B-ALL type.

    图3  Immunostaining with Nordic-MUbio CD3-PE conjugate of surface CD3-negative undifferentiated leukemia cells of T-ALL type.

    上海金畔生物科技有限公司作为一站式生物试剂采购供应商,致力于整合全球优质资源,为生物研究领域客户提供丰富的产品与专业的服务。上海金畔是Nordic-MUbio品牌中国区一级代理,为客户提供完善的技术支持与售后服务。如对上述产品感兴趣,欢迎随时拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或登录上海金畔生物科技有限公司官网www.jinpanbio.cn查询订购。

    参考文献:

    Nies KPH, Kraaijvanger R, Lindelauf KHK, Drent RJMR, Rutten RMJ, Ramaekers FCS, Leers MPG. Determination of the proliferative fractions in differentiating hematopoietic cell lineages of normal bone marrow. Cytometry A. (2018) 93, 1097-1105 . doi: 10.1002/cyto.a.23564.

    重组胰酶:安全、高效、稳定

    胰蛋白酶以下简称胰酶)属于丝氨酸蛋白酶家族成员,是一种肽链内切酶,可以在赖氨酸和精氨酸C端切断肽链是生物制品生产过程中应用非常广泛的一种生物原材料。在细胞培养过程中,胰酶主要功能是分解细胞间的粘蛋白和糖蛋白,使细胞彼此分开,然后进行细胞传代培养。胰酶除了具有消化细胞的功能外,在某些病毒疫苗生产过程中,如细胞培养制备的流感疫苗轮状病毒疫苗,往往需要在病毒培养阶段加入适量胰酶,使病毒抗原暴露并与细胞受体结合,从而提高病毒感染效率对于某些重组蛋白制品,如重组胰岛素,通常使用胰酶作为剪切酶,将胰岛素原转化为具有生物活性的胰岛素。


    当前使用最广泛的胰酶主要是由动物胰脏浸出液提纯冻干后制备而成,其原料主要来自牛或胰脏。尽管胰酶制备要经过适当的纯化工艺,但由于动物本身可能携带多种病毒(如疯牛病病毒朊病毒猪瘟病毒受到制备工艺、生物原材料特点以及当前检测手段所限,动物源胰酶存在较高的外源病毒污染风险影响了生物制品的安全性2010葛兰素史克(GSK生产的口服轮状病毒疫苗就曾检测出PCV1病毒序列,经溯源发现有可能是制备轮状病毒疫苗所用Vero细胞被胰酶引入了PCV1病毒污染所致加之近年来非洲猪瘟、COVID-19人兽共患病毒传染病引发的公共安全危机,在生物制品生产过程中使用安全性更高、风险更可控的重组生物原材料替代动物已经主要趋势

    重组胰酶:安全、高效、稳定

     

    上海金畔科技有限公司代理的KERRY重磅推出了一款重组胰蛋白酶Sheffield™ rTrypsin ACF重组胰酶采用基因工程技术生产,生产过程中不添加任何动物源成分,无外源病毒污染风险,安全性高,纯度高,活性强非常适用于细胞培养疫苗/重组病毒生产、干细胞培养以及治疗性原代细胞培养等应用是一款应用效果和风险控制方面动物源胰酶更好的替代产品。


    传统动物源胰酶相比,KERRY重组胰酶Sheffield™ rTrypsin ACF优势特点主要以下几个方面


    • 质量控制方面Sheffield™ rTrypsin ACF重组胰酶无动物源成分(ACF),避免了引入外源病毒污染风险,生物安全性更高,符合CDE生物制品生产用原材料的质量控制要求
    • 从产品性能方面,其适用细胞类型广泛(Vero、HEK、MRC-5消化效率更加温和,不伤细胞,主要表现为消化传代后的细胞倍增时间更短,细胞活率更高。
    • Sheffield™ rTrypsin ACF重组胰酶的基因序列是微生物胰酶,蛋白稳定性更配成液体室温放置一个月,胰酶活性不降低。
    • Sheffield™ rTrypsin ACF重组胰酶消化细胞无需洗细胞面也无需添加胰酶抑制剂直接加入新鲜培养基继续培养细胞即可


    与其他商品化重组胰酶相比KERRY重组胰酶Sheffield™ rTrypsin ACF表现出同等甚至更优的性能(如下图所示)主要表现为KERRY重组胰酶Sheffield™ rTrypsin ACF消化细胞所需要的时间更短,消化传代后细胞的生长表现更好并且批间稳定性也非常可靠。

    重组胰酶:安全、高效、稳定

     

    KERRY重组胰酶Sheffield™ rTrypsin ACF产品信息/参数指标

    货号

    30624799

    规格

    1g/ 5g/ 如需更大包装可联系上海金畔生物科技有限公司

    性状

    浅棕色颗粒状粉末

    酶活性

    ≥800 U/mg

    菌落数

    <10000 cfu/g

    稳定性

    0-25℃条件可稳定保存至少2

     

     

    重组胰酶:安全、高效、稳定

     

    美国KERRY集团旗下Sheffield Bio-Science服务全球超过70年,作为全球生物制药疫苗行业规模大专业性强的细胞营养原料供应商,已成为全球单个药物年销售额超过10亿美金的10个“生物炸弹药”中7个生物药的培养基原料供应商,是全球少有的同时生产酵母粉和蛋白胨并针对不同细胞株/菌种开发提供非动物源性复合添加物系统的生产商,引领全球制药、疫苗、无血清培养基、传统发酵和诊断培养基工业的发展。

    北京金畔生物科技有限公司是KERRY品牌细胞培养产品线中国一级代理商,为用户提供完善的技术支持与售后服务。如对以上产品感兴趣欢迎拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或登录网站www.jinpanbio.cn了解更多信息。

    参考文献

    1.洪小栩. 关于加强生物制品生产用胰酶质量控制的思考. 中国生物制品学杂志,2014, 27(7):981-984.

    2.Heuer AH. Engineering and vaccine production for an influenza pandemic [J]. The Bridge, 2006, 36(3):3-5.

    3. Angel J, Franco MA, Greenberg HB. Rotavirus vaccines: recent developments and future considerations [J]. Nat Rev Microbio, 2007, 5(7):529-539.


    胰蛋白酶以下简称胰酶)属于丝氨酸蛋白酶家族成员,是一种肽链内切酶,可以在赖氨酸和精氨酸C端切断肽链是生物制品生产过程中应用非常广泛的一种生物原材料。在细胞培养过程中,胰酶主要功能是分解细胞间的粘蛋白和糖蛋白,使细胞彼此分开,然后进行细胞传代培养。胰酶除了具有消化细胞的功能外,在某些病毒疫苗生产过程中,如细胞培养制备的流感疫苗轮状病毒疫苗,往往需要在病毒培养阶段加入适量胰酶,使病毒抗原暴露并与细胞受体结合,从而提高病毒感染效率对于某些重组蛋白制品,如重组胰岛素,通常使用胰酶作为剪切酶,将胰岛素原转化为具有生物活性的胰岛素。

    当前使用最广泛的胰酶主要是由动物胰脏浸出液提纯冻干后制备而成,其原料主要来自牛或胰脏。尽管胰酶制备要经过适当的纯化工艺,但由于动物本身可能携带多种病毒(如疯牛病病毒朊病毒猪瘟病毒受到制备工艺、生物原材料特点以及当前检测手段所限,动物源胰酶存在较高的外源病毒污染风险影响了生物制品的安全性2010葛兰素史克(GSK生产的口服轮状病毒疫苗就曾检测出PCV1病毒序列,经溯源发现有可能是制备轮状病毒疫苗所用Vero细胞被胰酶引入了PCV1病毒污染所致加之近年来非洲猪瘟、COVID-19人兽共患病毒传染病引发的公共安全危机,在生物制品生产过程中使用安全性更高、风险更可控的重组生物原材料替代动物已经主要趋势

    重组胰酶:安全、高效、稳定

    上海金畔科技有限公司代理的KERRY重磅推出了一款重组胰蛋白酶Sheffield™ rTrypsin ACF重组胰酶采用基因工程技术生产,生产过程中不添加任何动物源成分,无外源病毒污染风险,安全性高,纯度高,活性强非常适用于细胞培养疫苗/重组病毒生产、干细胞培养以及治疗性原代细胞培养等应用是一款应用效果和风险控制方面动物源胰酶更好的替代产品。


    传统动物源胰酶相比,KERRY重组胰酶Sheffield™ rTrypsin ACF优势特点主要以下几个方面


    • 质量控制方面Sheffield™ rTrypsin ACF重组胰酶无动物源成分(ACF),避免了引入外源病毒污染风险,生物安全性更高,符合CDE生物制品生产用原材料的质量控制要求
    • 从产品性能方面,其适用细胞类型广泛(Vero、HEK、MRC-5消化效率更加温和,不伤细胞,主要表现为消化传代后的细胞倍增时间更短,细胞活率更高。
    • Sheffield™ rTrypsin ACF重组胰酶的基因序列是微生物胰酶,蛋白稳定性更配成液体室温放置一个月,胰酶活性不降低。
    • Sheffield™ rTrypsin ACF重组胰酶消化细胞无需洗细胞面也无需添加胰酶抑制剂直接加入新鲜培养基继续培养细胞即可


    与其他商品化重组胰酶相比KERRY重组胰酶Sheffield™ rTrypsin ACF表现出同等甚至更优的性能(如下图所示)主要表现为KERRY重组胰酶Sheffield™ rTrypsin ACF消化细胞所需要的时间更短,消化传代后细胞的生长表现更好并且批间稳定性也非常可靠。

    重组胰酶:安全、高效、稳定

    KERRY重组胰酶Sheffield™ rTrypsin ACF产品信息/参数指标

    货号

    30624799

    规格

    1g/ 5g/ 如需更大包装可联系上海金畔生物科技有限公司

    性状

    浅棕色颗粒状粉末

    酶活性

    ≥800 U/mg

    菌落数

    <10000 cfu/g

    稳定性

    0-25℃条件可稳定保存至少2

    重组胰酶:安全、高效、稳定

    美国KERRY集团旗下Sheffield Bio-Science服务全球超过70年,作为全球生物制药疫苗行业规模大专业性强的细胞营养原料供应商,已成为全球单个药物年销售额超过10亿美金的10个“生物炸弹药”中7个生物药的培养基原料供应商,是全球少有的同时生产酵母粉和蛋白胨并针对不同细胞株/菌种开发提供非动物源性复合添加物系统的生产商,引领全球制药、疫苗、无血清培养基、传统发酵和诊断培养基工业的发展。

    北京金畔生物科技有限公司是KERRY品牌细胞培养产品线中国一级代理商,为用户提供完善的技术支持与售后服务。如对以上产品感兴趣欢迎拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或登录网站www.jinpanbio.cn了解更多信息。

    参考文献

    1.洪小栩. 关于加强生物制品生产用胰酶质量控制的思考. 中国生物制品学杂志,2014, 27(7):981-984.

    2.Heuer AH. Engineering and vaccine production for an influenza pandemic [J]. The Bridge, 2006, 36(3):3-5.

    3. Angel J, Franco MA, Greenberg HB. Rotavirus vaccines: recent developments and future considerations [J]. Nat Rev Microbio, 2007, 5(7):529-539.

    细胞培养基重要的原料——维生素

    细胞培养基是为了提供一个能支持细胞体外生长和维持,以及生产蛋白类大分子药物,如单克隆抗体的环境,其主要成分包括氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子以及血清、细胞因子等。其中,维生素是生物体内一类量微、化学结构各异、具有特殊功能的小分子化合物,是维持细胞生长的重要生物活性物质。这类物质既不是构成细胞的原料,也不是能量的来源,通常以辅酶或辅基的形式参与体内酶促反应体系,在代谢过程中起重要调节作用。大部分维生素在细胞内不能合成或合成量不足,因而是细胞培养基中不可缺少的重要成分。

    常用于细胞培养基添加的维生素包括B族维生素(如核黄素、维生素B12、叶酸、生物素等)和维生素C等。上海金畔生物科技有限公司代理的Applichem品牌可提供多种高品质维生素(详见下表),是生物制品细胞培养工艺添加原料的不二之选。

    名称

    作用机制

    货号

    规格

    CAS No.

    级别

    核黄素(维生素B2)

    Riboflavin

    与特定的蛋白质结合生成黄酶。黄酶在物质代谢中起传递氢的作用,参与组织的呼吸过程。

    A6279

    100g, 250g

    83-88-5

    药典级

    叶酸(维生素B9)

    Folic acid

    是合成四氢叶酸的重要原料,四氢叶酸在核酸的生物合成和蛋白质的生物合成过程中起重要作用。

    A7092

    25g, 100g

    59-30-3

    药典级

    钴胺素(维生素B12)

    Vitamin B12

    作为甲基转移酶的辅因子,参与蛋氨酸、胸腺嘧啶等的合成,从而促进蛋白质的生物合成;保护叶酸在细胞内的转移和贮存。

    A8454

    1g, 25g, 500g

    68-19-9

    药典级

    泛酸钙(维生素B5)

    D-Pantothenic Acid Calcium Salt

    是辅酶A的组成部分,只有右旋体(D-)具有维生素活性,参与蛋白质、脂肪、糖等多种物质代谢;参与类固醇、卟啉、乙酰胆碱等物质的合成。

    A2088

    100g

    137-08-6

    生化级

    盐酸吡哆醇(维生素B6)

    Pyridoxine Hydrochloride

    是多种酶如转氨基酶、脱羧酶、消旋酶、脱氢酶、合成酶和羟化酶等的辅酶,且可帮助糖类和蛋白质的分解利用;维生素B6还能增加氨基酸及钾离子逆浓度进入细胞的运转速度。

    A8093

    100g

    58-56-0

    药典级

    生物素(维生素B7)

    D(+)-Biotin

    是一些特异羧化酶的组成部分,参与糖代谢和脂肪酸的合成过程。

    143977

    1g, 50g

    58-85-5

    药典级

    肌醇(维生素B8)

    myo-Inositol

    用于合成肌酸磷脂膜磷脂、鞘脂等前体物质,为多种细胞生长所必需。

    A1716

    100g, 250g, 10kg

    87-89-8

    生化级

    烟酰胺

    Nicotinamide

    是辅酶I和辅酶II的组成部分,也是许多脱氢酶的辅酶。

    A0959

    250g

    98-92-0

    药典级

    烟酸

    Nicotinic Acid

    可转化为烟酰胺,再与核糖腺嘌呤等组成辅酶I和辅酶II,为脂质氨基酸、蛋白、嘌呤代谢,组织呼吸的氧化作用和糖原分解所必需。

    A0963

    100g, 250g

    59-67-6

    药典级

    抗坏血酸(维生素C)

    L(+)-Ascorbic Acid

    是一种高效抗氧化剂,用来减轻细胞的氧化应激反应;还参与细胞内重要的生物合成过程。

    141013

    1000g, 5kg

    50-81-7

    药典级

    氯化胆碱

    Choline Chloride

    是乙酰胆碱、卵磷酯和神经磷酯的组成部分,主要参与调节脂肪的代谢与转化,促进氨基酸的再形成,提高氨基酸的利用率。

    A0785

    1kg

    67-48-1

    生化级

    硫辛酸

    DL-α-Lipoic Acid

    是丙酮酸脱氢酶复合物、酮戊二酸和氨基酸氢化酶复合物的辅助因子,具有抑制脂质氧化,阻止蛋白质的糖基化,抑制醛糖还原酶,阻止葡萄糖或半乳糖转化成为山梨醇等作用。

    A4065

    5g

    1077-28-7

    生化级

    盐酸吡哆醛

    Pyridoxal Hydrochloride

    是氨基酸代谢中转氨酶及脱羧酶的辅酶,能促进谷氨酸脱羧,促进γ-氨基丁酸的生成;它还可以催化包括α-氨基酸与α-酮酸的转氨基和α-氨基酸的脱羧基等作用。

    A0960

    25g, 1kg

    65-22-5

    生化级

    细胞培养基重要的原料——维生素

    PanReac AppliChem是来自欧洲品质优良的生物化学试剂与制药原料生产商之一,已通过多项ISO 9001质量体系认证,是全球科研、知名CRO企业、大型制药、诊断、食品、化妆品等工业企业的重要供应商。作为全球多家知名培养基生产企业和制药企业长期固定供应商,Applichem全面提供细胞培养级、符合药典级、生化级、超纯级等培养基化学品组分,包括氨基酸、蛋白质、维生素、抗生素、脂类、无机盐、缓冲液、泡沫稳定剂、指示剂等和制药工艺中常用化学品如尿素、Tris、葡聚糖等。上海金畔生物科技有限公司是PanReac AppliChem的中国区一级代理商,为用户提供完善的技术支持与售后服务。如对以上产品感兴趣欢迎拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或登录网站www.jinpanbio.cn了解更多信息。

    热销爆款 | Applichem明星产品精选

    1、 二甲基亚砜DMSO(货号:A3672)

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    1. 二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)是一种含硫有机化合物,常温下为无色无臭的透明液体,被誉为“万能溶剂”。同时,DMSO能降低冰点,提高细胞膜的渗透性,在缓慢冷冻过程中使细胞内水分渗透到细胞外,减少冰晶形成造成的细胞损伤,是目前应用非常广泛的细胞冻存保护剂之一。
    2. 品牌:Applichem
    3. CAS-No:67-68-5
    4. 级别:细胞培养级别
    5. 纯度min.99.5%
    6. 金属离子: max.0.00002%
    7. 优势:质优价廉;原装进口;现货库存

    2、 青-链霉素双抗(货号:A8943)热销爆款 | Applichem明星产品精选

    Penicillin-Streptomycin(100X)forcellculture,俗称青链霉素双抗,常用于预防细胞培养的细菌污染,特别是革兰氏阳性和阴性菌的污染,可以直接添加到细胞培养液内。青霉素抑制肽聚糖合成,链霉素抑制蛋白质的合成,有效防止细菌细胞壁形成。

    品牌:Applichem

    成分: 青霉素含量为10000 U/mL;链霉素含量为 10 mg/mL

    使用说明:在细胞培养液中的工作浓度按照稀释100倍使用即可,尽量减少反复冻融。

    优势:批次稳定;经过无菌过滤;可以溶解于0.9%的NaCl溶液

    3、RNaseARNA酶A(货号:A2760)

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    RNA酶A是高度专一性内切核糖核酸酶,可特异性地攻击RNA上的嘧啶残基的3’端,切割与相邻核苷酸形成的磷酸二酯键。可除去DNA/RNA或RNA/RNA杂合体中未杂交的RNA区;还可用来确定DNA或RNA中单碱基突变的位置;也可切割RNA/RNA或RNA/DNA中的错配碱基。常用于纯化DNA,水解蛋白样品中的RNA。
    品牌:Applichem

    CAS-No:9001-99-4

    Assay:approx.70%

    Activity(Kunitz):min.70U/mg

    推荐使用浓度:10ug/ml(核酸去除);100ng/ml(制备双链cDNA的平末端)

    配置方法:将RNase A溶解在0.001mol/l醋酸钠(PH5.2)中,使终浓度为10mg/ml,加热到100°C,15min。室温下缓慢冷却,用0.1体积的1M的Tris-Cl调整pH至7.4后。

    4、去离子甲酰胺(货号:A2156)

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    去离子甲酰胺(Formamide deionized)为无色澄明液体,无气味或略有氨臭,有吸湿性,在有潮气的情况下,能水解成氨和甲酸,能与水和乙醇混溶,微溶于苯、三氯甲烷和乙醚。RNA在甲酰胺中的稳定性比在DEPC水好很多,在-20°C的甲酰胺中RNA能够储存至少一年,可以取代在-70°C DEPC水中储存这种方式。去离子甲酰胺凝胶电泳除了可以应用在核酸杂交实验外,甲酰胺还可以降低DNA双链的解链温度,平均每1%的甲酰胺就可以降低0.6°C ,甲酰胺的较大浓度可以达到50%,随着甲酰胺的增加,杂交过程的温度也会随着降低,另外RNA探针的杂交背景也会减少。

    品牌:Applichem

    CAS-No:75-12-7

    Assay (from N): min. 99.5 %

    使用浓度:10-100mM

    应用:用于RNA样品处理和DNA多样性分析

    5、 DNaseI(货号:A3778)

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    DNase I(脱氧核糖核酸酶 I)是一种可以消化单链或双链DNA的核酸内切酶。DNase I 活性依赖于钙离子,并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下,DNase I 可随机剪切双链DNA的任意位点。二价锰离子存在条件下,DNase I 可在同一位点剪切DNA双链,形成平末端,或1-2个核苷酸突出的粘末端。

    品牌:Applichem

    CAS-No:9003-98-9

    活性:min. 3000 U/mg

    应用

    • 制备不含DNA的RNA样品;
    • RT-PCR反应前RNA样品中去除基因组DNA等可能的DNA污染;
    • DNase I 足迹分析实验;切口平移实验;
    • 细胞凋亡TUNEL检测中剪切基因组DNA作为阳性对照

    6、Incubator-CleanTM培养箱消毒剂(货号:A5230

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    Incubator-Clean的主要活性成分为四苯甲基化合物,用于正在进行细胞培养的CO2培养箱的消毒,可以有效预防真菌(及芽孢)、细菌、病毒(包括HIV、HBV)等污染。还能用于操作工作台的消毒。是一款非常高效的广谱消毒剂。

    优势:

    • 成分安全可降解,对人体无毒害;
    • 无腐蚀性,适用于各种仪器表面(如细胞培养箱、冰箱把手)、无菌操作台等台面消毒
    • 即用型,无需稀释,喷瓶包装使用更方便

    使用方法:

    喷头对准需要消毒的物体表面喷雾至完全湿润,即使对细胞培养箱内消毒也无须移出正在培养的细胞。

    小编推荐的以上星品正在进行“上海金畔生物科技有限公司实验室公用产品双重优惠好礼活动”,活动详情请点击链接获取http://www.jinpanbio.cn/article/282

    上海金畔生物科技有限公司作为全球知名品牌推荐代理商,经过十多年的发展,集结了全球多家科研试剂的生产商,包括Applichem、KPL、PhytoTech、Mirus、Cali-Bio、JenaBioscience、Agrisera等知名品牌,为广大客户提供专业高品质实验室公用产品。欢迎拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或登录网站www.jinpanbio.cn了解更多信息。

    六月新品上市,先睹为快

    Mirus新品电转仪及配套产品上市

    电转仪 Ingenio® EZporator® Electroporation System (货号MIR 51000)

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    一款操作简单,性价比高,可以高效转染哺乳动物细胞和昆虫细胞的开放型电转染平台。

    产品特点:

    • 适用于任意细胞系的转染,尤其是常规方法难以转染的细胞,如原代细胞、干细胞、神经细胞等;

    • 仅需一款电转液就可以用于各种细胞,方便高效且经济实惠;

    • 程序可灵活调节,便于针对不同细胞优化最佳电转条件;

    • 仪器附赠电转液和电转杯,可以做8次电转染实验。

    电转染试剂(盒)及耗材

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    适用仪器:Ingenio® EZporator®,Lonza Amaxa®,BioRad,Nucleofector® II/2b,Harvard-BTX® 等,基本覆盖常用电转仪品牌。

    产品特点:

    • 相比仪器原装配套试剂盒,价格便宜货期稳定;

    • 转染效率不错;

    • 对细胞有保护作用;

    • 适用范围:用常规方法难转染的细胞系,如神经细胞、原代细胞或干细胞等,转染效果显著。



    Phyrtotech新品培养基上市

    X6 Medium(货号:X8458)

    葡萄维持培养基,根据2001年V.vinifera L. cv.Thompson Seedless发表文章而制定。

    BDS Basal Medium(货号:B1459)

    B5改良培养基,包含Dustan和Short在1977年发表文章中提到的大量和微量元素,可用于洋葱组织培养。

    BABI Basal Medium(货号:B1471)

    B5改良培养基,包含Greenway在2012年发表文章中提到的大量元素、微量元素和维生素。可用于玉米、水稻、棉花、烟草、洋葱和覆盆子等多种植物组织培养。