荧光染料DFHBI-2T

荧光染料Dye Reagents DFHBI-2T;

DFHBI-2T 是一种可透过膜的 RNA 适配体激活的荧光探针 (ex/em=500 nm/523 nm)。DFHBI-2T 可以用于活细胞中的 RNA 成像。

DFHBI-2T

DFHBI-2T Chemical Structure

CAS No. : 1539318-40-5

规格 价格 是否有货
5 mg ¥4800 询问价格 货期
10 mg ¥8000 询问价格 货期
25 mg ¥15500 询问价格 货期

* Please select Quantity before adding items.

生物活性

DFHBI-2T is a membrane-permeable RNA aptamers-activated fluorescence probe (ex/em=500 nm/523 nm). DFHBI-2T is used to image RNA in live cells[1][2].

体外研究
(In Vitro)

Spinach2 imaged DFHBI-2T results in fluorescence that is detectable using the yellow emission channel[2].

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

分子量

306.19

Formula

C12H7F5N2O2

CAS 号

1539318-40-5

运输条件

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

储存方式

Please store the product under the recommended conditions in the Certificate of Analysis.

参考文献
  • [1]. Wenjiao Song, et al. Plug-and-play fluorophores extend the spectral properties of Spinach. J Am Chem Soc. 2014 Jan 29;136(4):1198-201.

    [2]. Robert J Trachman 3rd, et al. Structural Principles of Fluorescent RNA Aptamers. Trends Pharmacol Sci. 2017 Oct;38(10):928-939.

荧光染料HBC525

荧光染料Dye Reagents HBC525;

HBC525 是一种类 HBC 荧光团和荧光 RNA 适体 (Kd=3.8 nM)。HBC525 可以直接作为融合标签用于感兴趣的细胞 RNA 的成像和跟踪。荧光 RNA 适体也被用于构建各种有趣的用于细胞靶点检测和成像的动态 RNA 纳米工具。

HBC525

HBC525 Chemical Structure

CAS No. : 2174014-64-1

规格 是否有货
100 mg ; 询价 ;
250 mg ; 询价 ;
500 mg ; 询价 ;

* Please select Quantity before adding items.

生物活性

HBC525 is a HBC-like fluorophore and a fluorogenic RNA aptamer (Kd=3.8 nM). HBC525 can be directly used as fusion tags for the imaging and tracking of cellular RNAs of interest. Fluorogenic RNA aptamers have also been used to construct various interesting dynamic RNA nanodevices for cellular target detection and imaging[1][2].

IC50 Target

HBC525: 491/525 nm (Ex/Em)[2]

体内研究
(In Vivo)

荧光RNA适体

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

分子量

319.36

Formula

C19H17N3O2

CAS 号

2174014-64-1

运输条件

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

储存方式

Please store the product under the recommended conditions in the Certificate of Analysis.

参考文献
  • [1]. Chen X, et al. Visualizing RNA dynamics in live cells with bright and stable fluorescent RNAs. Nat Biotechnol. 2019;37(11):1287-1293.

    [2]. Yu Q, et al. Genetically encoded RNA nanodevices for cellular imaging and regulation. Nanoscale. 2021;13(17):7988-8003.

DFHBI-1T

DFHBI-1T; 纯度: 98.82%

DFHBI-1T 是一种可透过膜的 RNA 适配体激活的荧光探针 (ex/em=472 nm/507 nm)。DFHBI-1T 与 RNA 适配体 (Spinach, Spinach2, iSpinach, Broccoli) 结合并产生特定的荧光和较低的背景荧光。DFHBI-1T 可以用于活细胞中的 RNA 成像。

DFHBI-1Tamp;;

DFHBI-1T Chemical Structure

CAS No. : 1539318-36-9

规格 价格 是否有货 数量
Free Sample (0.1-0.5 mg) ; Apply now ;
5 mg ¥1200 In-stock
10 mg ¥2000 In-stock
25 mg ¥4200 In-stock
50 mg ¥6500 In-stock
100 mg ¥9800 In-stock
200 mg ; 询价 ;
500 mg ; 询价 ;

* Please select Quantity before adding items.

DFHBI-1T 相关产品

bull;相关化合物库:

  • Bioactive Compound Library Plus

生物活性

DFHBI-1T is a membrane-permeable RNA aptamers-activated fluorescence probe (ex/em=472 nm/507 nm). DFHBI-1T binds to RNA aptamers (Spinach, Spinach2, iSpinach, and Broccoli) and causes specific fluorescence and lower background fluorescence. DFHBI-1T is used to image RNA in live cells[1][2].

体外研究
(In Vitro)

DFHBI-1T (20 μM; for 10 min) increases fluorescence in COS7 cells expressing (CGG)60-Spinach2 over DFHBI (20 μM)[1].
Broccoli-DFHBI-1T has ex/em=472 nm/507 nm and Spinach2-DFHBI-1T has ex/em=482 nm/505 nm[2].

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

分子量

320.21

Formula

C13H9F5N2O2

CAS 号

1539318-36-9

运输条件

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

储存方式

-20deg;C, protect from light

*In solvent : -80deg;C, 6 months; -20deg;C, 1 month (protect from light)

溶解性数据
In Vitro:;

DMSO : 50 mg/mL (156.15 mM; Need ultrasonic)

配制储备液
浓度 溶剂体积 质量 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.1230 mL 15.6148 mL 31.2295 mL
5 mM 0.6246 mL 3.1230 mL 6.2459 mL
10 mM 0.3123 mL 1.5615 mL 3.1230 mL

*

请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效
储备液的保存方式和期限:-80°C, 6 months; -20°C, 1 month (protect from light)。-80°C 储存时,请在 6 个月内使用,-20°C 储存时,请在 1 个月内使用。

In Vivo:

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。以下溶解方案都请先按照 In Vitro 方式配制澄清的储备液,再依次添加助溶剂:

——为保证实验结果的可靠性,澄清的储备液可以根据储存条件,适当保存;体内实验的工作液,建议您现用现配,当天使用; 以下溶剂前显示的百
分比是指该溶剂在您配制终溶液中的体积占比;如在配制过程中出现沉淀、析出现象,可以通过加热和/或超声的方式助溶

  • 1.

    请依序添加每种溶剂:;10% DMSO ;; 40% PEG300 ;; 5% Tween-80 ;; 45% saline

    Solubility: 5.5 mg/mL (17.18 mM); Suspended solution; Need ultrasonic

    此方案可获得 5.5 mg/mL (17.18 mM) 的均匀悬浊液,悬浊液可用于口服和腹腔注射。

    以 1 mL 工作液为例,取 100 μL 55.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀;然后继续加入 450 μL生理盐水定容至 1 mL。

    将 0.9 g 氯化钠,完全溶解于 100 mL ddH₂O 中,得到澄清透明的生理盐水溶液

*以上所有助溶剂都可在 MCE 网站选购。
参考文献
  • [1]. Wenjiao Song, et al. Plug-and-play fluorophores extend the spectral properties of Spinach. J Am Chem Soc. 2014 Jan 29;136(4):1198-201.

    [2]. Grigory S Filonov, et al. Broccoli: rapid selection of an RNA mimic of green fluorescent protein by fluorescence-based selection and directed evolution. J Am Chem Soc. 2014 Nov 19;136(46):16299-308.

Pyronin Y(Synonyms: 派洛宁Y Pyronine G C.I. 45005)

Pyronin Y;(Synonyms: 派洛宁Y; Pyronine G; C.I. 45005)

Pyronin Y (Pyronine G) 是一种可插入 RNA 的阳离子染料,可以靶向包括 RNA,DNA 和细胞器的细胞结构。Pyronin Y 与双链核酸(尤其是 RNA) 形成荧光复合物,可以对细胞 RNA 进行半定量分析。Pyronin Y 可用于鉴定活细胞中核糖核蛋白复合物的特定 RNA 亚种。

Pyronin Yamp;;(Synonyms: 派洛宁Y; Pyronine G;  C.I. 45005)

Pyronin Y Chemical Structure

CAS No. : 92-32-0

规格 价格 是否有货 数量
10;mM;*;1 mL in DMSO ¥660 In-stock
100 mg ¥500 In-stock
200 mg ; 询价 ;
500 mg ; 询价 ;

* Please select Quantity before adding items.

Pyronin Y 相关产品

bull;相关化合物库:

  • Bioactive Compound Library Plus

生物活性

Pyronin Y (Pyronine G) is a cationic dye that intercalates RNA and has been used to target cell structures including RNA, DNA and organelles. Pyronin Y forms fluorescent complexes with double-stranded nucleic acids (especially RNA) enabling semi-quantitative analysis of cellular RNA. Pyronin Y can be used to identify specific RNA subspecies of ribonuclear proteins complexes in live cells[1][2][5].

体外研究
(In Vitro)

Pyronin Y forms fluorescent complexes with double-stranded nucleic acids, especially RNA, enabling semi-quantitative analysis of cellular RNA in flow cytometry, to estimate the RNA content per cell in formalin fixed EL4 leukosis tumor cells, enzyme dispersed R3327-G rat prostatic adenocarcinoma cells, mouse spleen cells stimulated with concanavalin A, and human peripheral blood lymphocytes stimulated with phytohemagglutinin[1].
A fluorescent staining procedure based on pyronin Y is described. The technique has been used to stain RNA in human reticulocytes for subsequent flow analysis and sorting[2].
In viable cells this dye also accumulates in mitochondria. At a concentration of 1.7 to 3.3 μM, pyronin Y is localized almost exclusively in mitochondria of cultured cells, similar to another mitochondria! probe, rhodamine 123. At that concentration PY is not toxic but suppressed cell growth, arresting cells[3].
Pyronin Y has long been used, in combination with other dyes such as Methyl Green, as a differential stain for nucleic acids in paraffin tissue sections. In sections stained with Methyl Green-pyronin Y, red blood cells, elastic fibre of blood vessels, zymogen granules of pancreatic acinar cells, surface membrane of heptocytes and kidney tubular cells showed strikingly strong green and/or red fluorescence, while the nuclei of cells appeared non-fluorescent[4].
Pyronin Y binds to double stranded RNA (dsRNA) including messenger RNA (mRNA), transfer RNA (tRNA) and ribosomal RNA (rRNA)[5].

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

分子量

302.80

Formula

C17H19ClN2O

CAS 号

92-32-0

中文名称

派洛宁Y;吡罗红G

运输条件

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

储存方式

-20deg;C, sealed storage, away from moisture and light

*In solvent : -80deg;C, 6 months; -20deg;C, 1 month (sealed storage, away from moisture and light)

溶解性数据
In Vitro:;

DMSO : 25 mg/mL (82.56 mM; Need ultrasonic)

H2O : 4 mg/mL (13.21 mM; Need ultrasonic)

配制储备液
浓度 溶剂体积 质量 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.3025 mL 16.5126 mL 33.0251 mL
5 mM 0.6605 mL 3.3025 mL 6.6050 mL
10 mM 0.3303 mL 1.6513 mL 3.3025 mL

*

请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效
储备液的保存方式和期限:-80°C, 6 months; -20°C, 1 month (sealed storage, away from moisture and light)。-80°C 储存时,请在 6 个月内使用,-20°C 储存时,请在 1 个月内使用。

参考文献
  • [1]. Pollack A, et al. Flow cytometric analysis of RNA content in different cell populations using pyronin Yand methyl green. Cytometry. 1982 Jul;3(1):28-35.

    [2]. Tanke HJ, et al. Flow cytometry of human reticulocytes based on RNA fluorescence. Cytometry. 1981 Mar;1(5):313-20.

    [3]. Darzynkiewicz Z, et al. Cytostatic and cytotoxic properties of pyronin Y: relation to mitochondrial localization of the dye and its interaction with RNA. Cancer Res. 1986 Nov;46(11):5760-6.

    [4]. Li B, et al. Pyronin Y as a fluorescent stain for paraffin sections. Histochem J. 2002 Jun-Jul;34(6-7):299-303.

    [5]. Laura M Andrews, et al. Spectral phasor analysis of Pyronin Y labeled RNA microenvironments in living cells. Biomed Opt Express. 2013 Jan 1;4(1):171-7.

Cell Assay
[2]

The cells are resuspended and stained for 30 min in 1.0 mL of 0.01% pyronin Y in sodiumacetate buffer (1.0 M, pH 4.7). For this purpose 1.0 g of pyronin Y is dissolved in 100 mL distilled water and this solution is purified by chloroform extraction (three fractions of 100 mL). The purified pyronin Y solution is diluted with 1.0 M sodiumacetate buffer pH 4.7 to the appropriate concentration and filtered through paper filters before use. Stained cell samples are studied by fluorescence microscopy (excitation filters SP 560 and LP 515, chromatic beam splitter at 580 nm, barrier filter LP 580) or by flow cytometry[2].

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

参考文献
  • [1]. Pollack A, et al. Flow cytometric analysis of RNA content in different cell populations using pyronin Yand methyl green. Cytometry. 1982 Jul;3(1):28-35.

    [2]. Tanke HJ, et al. Flow cytometry of human reticulocytes based on RNA fluorescence. Cytometry. 1981 Mar;1(5):313-20.

    [3]. Darzynkiewicz Z, et al. Cytostatic and cytotoxic properties of pyronin Y: relation to mitochondrial localization of the dye and its interaction with RNA. Cancer Res. 1986 Nov;46(11):5760-6.

    [4]. Li B, et al. Pyronin Y as a fluorescent stain for paraffin sections. Histochem J. 2002 Jun-Jul;34(6-7):299-303.

    [5]. Laura M Andrews, et al. Spectral phasor analysis of Pyronin Y labeled RNA microenvironments in living cells. Biomed Opt Express. 2013 Jan 1;4(1):171-7.

DFHO

DFHO;

DFHO 是 Corn 荧光适体的荧光配体。RNA 适体, Corn 结合 DFHO 的 Kd 值为 70 nM,并将其转化为荧光形式,从而使 RNA 在细胞中成像。

DFHOamp;;

DFHO Chemical Structure

CAS No. : 1420815-34-4

规格 是否有货
1 mg 询价

* Please select Quantity before adding items.

生物活性

DFHO is a fluorogenic ligand of Corn fluorogenic aptamer. The RNA aptamer, Corn binds DFHO with a Kd value of 70 nM and converts it to a fluorescent form, enabling RNA imaging in cells[1][2].

IC50 Target

Kd: 70 nM (Corn binds DFHO)[1]

体外研究
(In Vitro)

Corn is tested in E. coli. Minimal fluorescence that is seen in DFHO-treated cells (20 μM) transformed with the empty vector. However robust yellow fluorescence is seen in E. coli expressing Corn[1].
Corn-DFHO exhibits markedly enhanced photostability in vitro. The Corn-DFHO complexes are imaged in mammalian cells. Since the U6 promoter is one of the three major Pol III promoters, Corn from the U6 promoter is expressed and replaced the majority of the U6 sequence with Corn, leaving a minimal 5′ capping element leader sequence. The majority of the cells expressed diffuse yellow fluorescence, most prominently in the cytoplasm)[1].
DFHO exhibits low background fluorescence and cytotoxicity, making it a potentially suitable fluorophore for activation by RNA aptamers and for imaging experiments in living cells[2].

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

分子量

281.21

Formula

C12H9F2N3O3

CAS 号

1420815-34-4

运输条件

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

储存方式

Please store the product under the recommended conditions in the Certificate of Analysis.

参考文献
  • [1]. Wenjiao Song, et al. Imaging RNA polymerase III transcription using a photostable RNA-fluorophore complex. Nat Chem Biol. 2017 Nov;13(11):1187-1194.

    [2]. Hyaeyeong Kim, et al. A Fluorogenic RNA-Based Sensor Activated by Metabolite-Induced RNA Dimerization. Cell Chem Biol. 2019 Dec 19;26(12):1725-1731.e6.

SCICONS | mRNA疫苗生产中双链RNA (dsRNA)残留检测方案

随着mRNA疫苗在抗击COVID-19中的成功应用,针对双链RNA(dsRNA)抗体的需求持续增长。mRNA是DNA通过T7 RNA聚合酶转录生成,dsRNA杂质随之产生,为了监测dsRNA杂质的去除情况,双链RNA (dsRNA) ELISA试剂盒常被应用于mRNA产品的质控环节。

双链RNA (dsRNA) ELISA试剂盒 Double-stranded RNA (dsRNA) ELISA kit

Double-stranded RNA (dsRNA) ELISA kit利用双抗夹心ELISA原理,检测核酸提取物中的病毒dsRNA或非病毒来源的天然或合成dsRNA,以及检测人工合成(m)RNA制剂中的dsRNA杂质。基于使用两种双链RNA(dsRNA)特异性单克隆抗体,Double-stranded RNA (dsRNA) ELISA kit可以灵敏和选择性地检测dsRNA分子(大于40 bp),而不依赖于它们的核苷酸组成和序列,该检测具有高度的特异性。

产品优势:

  • mRNA疫苗中dsRNA杂质残留的监测
  • dsRNA杂质的检测灵敏度高、特异性强
  • 试剂盒适用于检测植物和动物病毒
  • 用于区分细菌病原体和病毒病原体

SCICONS品牌产品

SCICONS是一家向全球研究者提供检测双链RNA(dsRNA)小鼠单克隆抗体的公司,其在1990年就开始利用杂交瘤细胞系生产抗双链RNA(anti-dsRNA)的单克隆抗体,热销的单抗克隆包括J2、K1、K2和J5,这些抗体识别dsRNA的特异性非常强,与DNA或单链RNA ( ssRNA )没有交叉反应,抗体识别具有序列非依赖性,靶向天然存在的长度大于40个碱基对的双链RNA( dsRNA )以及合成的RNA poly ( I :C) 和poly ( A : U )。

SCICONS品牌J2抗体已成为双链RNA(dsRNA)识别的金标准,在国际知名期刊已发表超过200多篇高水平文章。SCICONS于2021年被Nordic-MUbio公司收购,现作为Nordic-MUbio品牌的一个产品线对外销售,产品包括抗体、对照和ELISA检测试剂盒等。

Scicons 双链RNA检测系列产品

货号

英文品名

规格

10010200

Mouse anti double-stranded RNA (J2)

200 µg

10010500

Mouse anti double-stranded RNA (J2)

500 µg

10040200

Mouse anti double-stranded RNA (J5)

200 µg

10040500

Mouse anti double-stranded RNA (J5)

500 µg

10020200

Mouse anti double-stranded RNA (K1)

200 µg

10020500

Mouse anti double-stranded RNA (K1)

500 µg

10050100

Mouse anti double-stranded RNA (J2, J5 and K1) Comparison Kit

3 x 100 µg

10613002

Double-stranded RNA (dsRNA) ELISA kit (J2 based)

Kit

10623002

Double-stranded RNA (dsRNA) ELISA kit (K1 based)

Kit

10623005

Double-stranded RNA (dsRNA) ELISA kit (K1 based)

Kit

10613005

Double-stranded RNA (dsRNA) ELISA kit (J2 based)

Kit

10030010

Mouse anti double-stranded RNA (K2)

10 ml

10030005

Mouse anti double-stranded RNA (K2)

5 ml

SCICONS | mRNA疫苗生产中双链RNA (dsRNA)残留检测方案

J2抗体应用

J2抗体最初用于植物病毒的研究,2006年J2被证明可用于检测所有被正链RNA病毒感染的细胞中产生的dsRNA以来,该抗体在更多领域得到了广泛应用。

  1. J2可用于检测丙型肝炎病毒、登革热病毒、鼻病毒、基孔肯雅病毒、狂犬病病毒、脊髓灰质炎病毒、猪瘟病毒、雀麦花叶病毒等多种病毒的dsRNA中间体。
  2. J2已被用于阐明抗病毒反应是如何启动的,并通过对病毒核酸复制位点进行超微结构定位研究,来探索病毒的生命周期。
  3. J2也被推荐为检测未知病原体是细菌还是病毒的工具。
  4. J2也被用于监测体外合成的m RNA制剂中ds RNA的去除情况。

References

• S. J. Richardson, A. Willcox, D. A. Hilton, S. Tauriain­en, H. Hyoty, A. J. Bone, A. K. Foulis, N. G. Morgan. Use of antisera directed against dsRNA to detect viral infections in formalin-fixed paraffin-embedded tissue. J Clin Virol. (2010) 49(3); 180-5. doi: 10.1016/j. jcv.2010.07.015.

• F. Weber, V. Wagner, S. B. Rasmussen, R. Hartmann, S. R. Paludan. Double-stranded RNA is produced by positive-strand RNA viruses and DNA viruses but not in detectable amounts by negative-strand RNA viruses. J Virol (2006), 80(10):5059-64. doi: 10.1128/ JVI.80.10.5059-5064.2006.

• S. Welsch, S. Miller, I. Romero-Brey, A. Merz, C. K. E. Bleck, P. Walther, S. D. Fuller, C. Antony, J. Kri­jnse-Locker, R. Bartenschlager. Composition and Three-Dimensional Architecture of the Dengue Virus Replication and Assembly Sites. Cell Host & Microbe (2009) 5(4); 365-375. doi.org/10.1016/j. chom.2009.03.007.

• K. Knoops, M. Bárcena, R. W. Limpens, A. J. Koster, A. M. Mommaas, E. J. Snijder. Ultrastructural charac­terization of arterivirus replication structures: re­shaping the endoplasmic reticulum to accommodate viral RNA synthesis. J Virol. (2012) 86(5); 2474-2487. doi:10.1128/JVI.06677-11.

Nordic-MUbio是一家总部设在荷兰的生产和研发高质量免疫学试剂公司,能够为流式细胞术、细胞生物学、免疫学、癌症研究、干细胞等领域提供广泛的产品组合。 2021年4月13日Nordic-MUbio宣布收购Scicons,为世界范围内的研究者提供检测dsRNA的单克隆抗体及相关产品。除此之外,Nordic-MUbio公司供应2000多种用于生物医学和兽医研究的基础免疫学试剂,包括抗血清、抗体、免疫复合物、纯化蛋白、对照品、血清蛋白标准品和其他校准品,包括高度特异性的单克隆抗体,以及用于不同试验体系的标记二抗等。上海金畔是Nordic-MUbio品牌中国一级代理,为客户提供完善的技术支持与售后服务。如对上述产品感兴趣,欢迎随时拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或登录上海金畔生物科技有限公司官网www.jinpanbio.cn查询订购。

Self-replicative RNA Reprogramming kit


Self-replicative RNA Reprogramming kit


Stemgent,  ReproCELL集团成员,发布了卓越表现的自我复制RNA重编程试剂盒


YOKOHAMA, 日本–(BUSINESS WIRE)—我们非常高兴的宣布Stemgent Inc. (Cambridge, MA), ReproCELL 集团公司(Yokohama, Japan – JASDAQ: 4978) 发布了新 Stemgent StemRNA™-SR 重编程试剂盒。这是一款可用于血液细胞的重编程的商业化RNA 重编程试剂盒。非病毒,非DNA的重编程试剂盒和自我复制RNA(srRNA)和microRNA技术配套使用,使干细胞研究者更安全,更灵活,更经济,更高效的进行细胞重编程。也可用于人成纤维细胞和血液来源的内皮祖细胞(EPCs)重编程。EPCs基因稳定,可从新鲜和冷冻保存人外周血和脐带血有效建立。该项技术在瑞典斯德哥尔摩举办的的干细胞研究国际学会(ISSCR)第13届年会议时介绍。

“采用非整合RNA重编程技术的Stemgent StemRNA-SR处理病人血液样品,对血液细胞进行重编程是研发临床相关的iPS细胞系重要进步。Joseph Gentile (Chief Executive Officer, Stemgent).

 

关于 Stemgent ( ReproCELL 集团公司

Stemgent与世界上优秀的干细胞科学家一起研发干细胞研究领域的革新技术和运用。他的使命是简化和支持重编程 Stemgent干细胞试剂提供给全世界的客户。

◆相关阅读


细胞重编程——指南目录

 

1.    什么是细胞重编程

2.    细胞重编程概述

3.    mRNA重编程

4.    病毒重编程

5.    产品列表 



◆相关产品


货号

名称

规格

00-0073

microRNA Booster Kit

microRNA增强试剂盒

1kit

00-0071

 Stemgent®mRNA Reprogramming Kit

 mRNA 重编程试剂盒

1kit

00-0075

Stemgent® StemRN™ SR Reprogramming Kit

StemRNATM-SR重编程试剂盒

1kit


DNA和RNA探针的区别是什么?


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DNA和RNA探针的区别是什么?

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在过去的十年间,分子诊断领域取得了巨大的进步。开发出了许多以核苷酸为基础的诊断工具和实验方法,使得DNA和RNA的分子分析能运用到临床样本中。这些实验方法通常用于监测或检验,也可以用于帮助判断哪种治疗对病人效果好。基于这种目的,设计出了特定的探针和引物。基因探针被用于各种印迹和原位杂交(ISH)技术中,可以应用于食品工业、环境、医学和兽医行业来检测核酸序列,以提高分析的特异性。在医学上,它们可以帮助鉴定微生物和诊断传染病、遗传病和其他疾病。在实践中,体外合成的双链和单链DNA,mRNA和其他RNA均可用作探针。DNA-RNA探针的分析速度更快、更灵敏,因此许多需要培养微生物来诊断检测病毒和细菌的传统方法,被分子探针分析迅速取代。培养后再检测可能需要花费数天,而分子探针检测可在几小时或几分钟内完成。分子探针可大致分为DNA探针,RNA探针,cDNA探针以及可用于不同目的的合成的寡核苷酸探针。Enzo可以提供一整套核酸标记和检测工具。

核酸探针是单链DNA或是与特定DNA或RNA靶序列间有亲和力的RNA。这段亲和力强且互补的序列可以结合到核苷酸的靶序列中的特定区域。靶序列与探针之间的同源性可以使它们稳定杂交。在开发探针时,必须鉴定、分离、复制出足够数量的核苷酸序列,并用可检测的标记进行标记。理论上,任何核酸都可以用作探针,只要它能被标记,从而能鉴定和定量探针和待测序列间形成的杂交分子。

 


◆标记的选择


探针可以通过放射性同位素,也可以用如生物素,地高辛等非放射性分子进行标记。然而,由于同位素的半衰期短以及放射性废物处理的经济和环境问题,放射性同位素标记的探针的使用会受到限制。

随着核酸技术的进步,出现了放射性标记探针的替代品。使用非放射性标记物具有几个优点,如标记反应更安全以及效率更高。以核酸的生物素标记为例,该系统利用了链霉亲和素对生物素的亲和力。这些探针可以提前大量制备,并储存在-20℃重复使用。地高辛是另一种由植物提取出的化学物质,用作探针的非放射性标记物。与酶结合的抗体(抗地高辛-碱性磷酸酶偶联)可用于检测地高辛。

荧光原位杂交(FISH)方法推动了用荧光显微镜对特定的DNA序列成像的进步。这种类型的标记特别适用于在显微镜下直接检查微生物或细胞学标本。

DNA和RNA探针的区别是什么?

图1. 可用于荧光标记的dUTP的荧光发射谱。在如原位杂交和微阵列分析中,荧光染料-dUTP特别是在多色应用中的

图1. 表现突出。



◆什么是DNA探针?


DNA探针是有目的基因或染色体区域上特异核苷酸序列的DNA片段。DNA探针能与有特异性标记的核酸序列杂交,从而快速检测出待测样品中的互补序列。目前多种DNA标记的方法已广见报道。总而言之,这些方法可用于制作含末端标记或连续标记的探针。大多数由酶介导的标记技术非常依赖于聚合酶的活性,因为酶活性会影响标记核苷酸的掺入。此外,使用Taq酶或其他热稳定性DNA聚合酶,可以通过PCR在更高的温度下进行标记反应,从而降低探针合成期间由酶介导的点突变的发生率。PCR是一种优秀的合成探针方法,它需要的模板材料非常少。由于存在着适量的被标记核苷酸引物,PCR产物能在合成的过程中进行标记。另外,引物本身可在自身合成期间被非同位素标记,并不需要用标记过的核苷酸前体作为反应混合物的一部分。随机引物是一种能在寡核苷酸序列的混合物中延伸的引物,引物能随着热变性的双链模板一起退火。退火的引物最终会成为探针本身的一部分,因为DNA聚合酶I的Klenow片段将从3'方向延伸引物,并且在此过程中掺入标记。切口平移法是早期的标记探针技术之一。它涉及到了用低浓度的DNase I随机切割双链DNA的骨架。在极低浓度下,这种酶会在四个或五个位点上切割模板,产生游离的3'-OH基团,可充当在每个切口位置的引物。接下来,DNA聚合酶I 能从5'→3'方向切除探针分子中天然核苷酸(核酸外切酶活性),同时靠5'→3'的聚合酶活性用标记的dNTP前体进行替换。切口平移法对于线性和共价闭合的DNA分子都是有效的,且标记反应可在一小时内完成。

Enzo的缺口平移法DNA标记系统2.0可以为生成标记DNA提供简单有效的方法。这种试剂盒可以兼容各种用荧光、生物素和地高辛标记的核苷酸。除了选择标记物,试剂盒有能允许用户通过调整标记的dUTP与dTTP的比例来优化标记物的掺入和产物的长度的设计。即用型NT Enzyme Mix易于使用,可大限度地减少移液时的误差。通过切口平移标记的探针可用于多种不同的杂交技术,包括:原位杂交(ISH),荧光原位杂交(FISH),由菌落或噬斑杂交筛选的基因文库,DNA或RNA的分子转移和杂交,以及再缔结的动力学的研究。



什么是RNA探针?


RNA探针是单链RNA片段,可通过杂交来检测互补核酸序列(靶序列)是否存在。RNA探针通常需要被标记,例如用放射性同位素、表位、生物素或荧光团标记,使其能够被检测。RNA探针作为杂交工具仍然很受欢迎,因为使用RNA探针会有几个关键优势。这些探针通过体外转录合成,并且几乎在所有应用中都可以取代DNA探针。高比活性RNA探针或核糖核酸探针也可以从如SP6和T7启动子系统的DNA模板的克隆表达载体中合成。RNA探针是单链的,与DNA探针相比具有几个优点,包括能改良信号或杂交印迹。与DNA探针有多种合成方法不同,RNA探针仅有一种可靠的标记方法——体外转录。由于RNA固有的不稳定性和容易被RNase降解,RNA探针必须和任何其他RNA制剂一样,需要小心处理。

制作RNA探针可靠且经济的方法是体外转录。通过转录出与RNA启动子连接的邻近DNA序列,可以获得大量含有效标记的均一长度探针。克隆两个相反方向的启动子间转录出的DNA是一种优良的方法。这能让克隆出的DNA序列中的任一链都可被转录,从而获得用于杂交研究的有义RNA和反义RNA。一种可以替代体外转录来获得连续标记的RNA探针的方法是标记分子的5'末端。这种5'末端标记方法一般被用于激酶反应;它具体是指将ATP的γ磷酸转移到RNA或DNA的5'-OH底物上(正向反应)。正向激酶反应比用5'磷酸取代的交换反应更有效。

合成3'末端标记的探针会涉及到向任一DNA的3'末端添加核苷酸。DNA 3'末端标记通常由末端转移酶催化。通过向3'-OH末端添加dNTP来标记单链和双链DNA分子。RNA也可以用poly(A)聚合酶来进行3'末端标记。这种酶原本就可以让异核RNA聚腺苷酸化,催化AMP的掺入。同位素标记需要用到α标记的ATP前体。除了适用于RNA探针合成外,poly(A)聚合酶还可将天然的poly(A)-mRNA和其他RNA聚腺苷酸化,使得oligo(dT)引物介导的cDNA合成可以进行。



◆探针在科研中的应用


在Northern印迹中,通过凝胶电泳将待测的RNA分离。然后将分子转移到膜上和标记探针一起温育。互补序列的杂交使得RNA的靶序列变得直观。Southern印迹涉及到将DNA分离和转移到膜上。然后将膜与标记好的DNA探针一起温育。互补序列的杂交使得DNA靶序列变得直观。涉及到ISH和FISH实验的其他应用,可以在细胞和组织中定位RNA或DNA靶序列。这种技术是用培养后的细胞或组织切片样品来进行杂交,从而检测出目的基因或靶序列。处理后的细胞或组织会把内源核酸固定在适当位置,但可用作与标记探针杂交和检测。

 

DNA和RNA探针的区别是什么?


图2. Enzo Life Sciences可以提供一整套的原位杂交解决方案,能够满足标记,杂交和检测的一切需要。

 

单细胞分析技术的进步为看似相同的细胞群的表型和功能异质性提供了新的见解。近年来,关于分析和理解RNA在单细胞水平表达的技术发展迅速。
Enzo Life Sciences在提供DNA和RNA标记技术方面是全球公认的领导者,在开发用于基因表达研究的生物素和荧光标记核苷酸探针方面拥有多项关键专利。我们可以提供一系列产品来满足基因组学研究的需求。有关合成标记DNA的简单有效方法,请查看我们关于缺口平移DNA标记试剂盒以及
SEEBRIGHT® 荧光染料-dUTP和烯丙胺-dUTP的清单。对于Enzo的任何产品有任何问题和疑虑,Enzo的技术支持团队将随时为您提供帮助。

◆产品列表

产品编号

产品名称

规格

ENZ-GEN111-0050

Nick   translation DNA labeling system 2.0
缺口平移法DNA标记系统2.0

50 tests

ENZ-42861

Allylamine dUTP
烯丙胺-dUTP

2.5 μmol

Dynamarker, Prestain Marker for RNA High 品牌:BioDynamics Laboratory


Dynamarker, Prestain Marker for RNA High

品牌:BioDynamics Laboratory
CAS No.:
储存条件:-80℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

DM260S

90 ul 咨询


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DynaMarker, Prestain Marker for Small RNA Plus 品牌:BioDynamics Laboratory


DynaMarker, Prestain Marker for Small RNA Plus

品牌:BioDynamics Laboratory
CAS No.:
储存条件:-20℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

DM253S

75 ul 咨询


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