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真空纯化过滤座WELVAC200

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真空纯化过滤座WELVAC200

产品型号： WELVAC200

简介：
WELVAC200真空过滤座是设计使用真空过滤的方式来取代传统离心法，可以简化质提/基因体DNA纯化、RNA纯化、PCR或其他孝素反应纯化的辅助实验设备，大幅度节省使用人员加样、等待离心、取出再加样的操作时间，将繁琐的操作变得简单易行。

产品特点：
1.搭配真空抽滤泵后，可以取代传统离心的方法，搭配微孔过滤板或者是离心过滤管使用，避免了离心法处理质体DNA、单股DNA、RNA、基因体DNA和*核酸，PCR或其他酵素反应时分注溶液、上机离心置换废液的繁琐流程，大幅度节省了操作时间。
2.可以搭配不同规格的多孔过滤板，包括96孔或384孔，也可以使用内置离心柱放置板来处理各种容量的离心过滤管，适用性强。
3.附属件中包含了过滤座所需要各种小工具，如离心柱放置板、通用型离心柱适配胶塞、密封圈替换组、滤液收集槽等。
4.创新设计微孔板放置垫片和离心管适配塞，确保该装置可以搭配任意品牌、规格的微孔过滤板和离心过滤柱，用户选购后不必担心适用性问题。如因过滤板或离心过滤柱和本产品不适配，可免费退货，详情可咨询销售商。
5.用户可直接购买带有R300无油抽滤泵的过滤套装——R3-W200，现在购买可直接获赠真空吸夜缓冲瓶1只。

用途：微粒去除、DNA浓缩、蛋白质浓缩、核酸点印迹、分子诊断学、基于细胞的免疫诊断学、核酸：蛋白交互作用研究、ELISA测定分析、ELISPOT测定分析、激酶测定分析、裂解物清除、基于滴定的分析测定、样本清洁整理、Oligo合成、SNP测定分析、总体分离、药物结合研究

推荐真空抽滤泵组合——R3-W200：客户可使用实验室自有的无油抽滤泵和过滤座进行搭配使用，但不建议使用油旋片式真空泵或循环水泵，可能会发生倒吸污染的问题。客户可以直接购买配有R300无油抽滤泵的组合产品R3-W200，一次购买直接使用，也不必担心抽滤泵的匹配问题。

产品技术参数：
品名：真空纯化过滤座
品牌：圣斯特Sciencetool
型号：WELVAC200
●配置：阳极铝过滤座1台、滤液收集盒1只、离心柱放置板1块、堵头24只、离心管适配塞24只、带阻水过滤器泵管1根。
原理：真空抽滤
泄压阀：标配有
灭菌方式：121℃高温高压
过滤座材质: 阳极工艺铝合金
支撑片和密封圈材质：橡胶
离心柱放置板材质: 聚碳酸酯
离心柱适配塞材质: 橡胶
过滤座外部尺寸: 232×124×102mm
重量：2.6kg
保修期：3年

R3-W200实验室真空纯化过滤座系统

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R3-W200实验室真空纯化过滤座系统

产品型号： R3-W200 品  牌： 圣斯特sciencetool
R3-W200实验室真空纯化过滤座系统是设计用来取代传统离心法，简化质提/基因体DNA纯化、RNA纯化、PCR或其他孝素反应纯化的辅助实验设备，大幅度节省使用人员的操作时间，提升实验室工作效率。

产品特点：
1.R3-W200实验室真空纯化过滤座系统是全新设计用于取代传统离心的方法，搭配微孔过滤板或者是离心过滤管使用，避免了离心法处理质体DNA、单股DNA、RNA、基因体DNA和*核酸，PCR或其他酵素反应时分注溶液、上机离心置换废液的繁琐流程，大幅度节省了操作时间。

2.既可以搭配96孔或384孔过滤板，也可以使用标配包含的离心柱放置板来处理各种容量的离心过滤管，适用性强。
3.配置齐全包含了过滤座、离心柱放置板、抽滤泵、滤液收集槽、泵管、抽滤泵阻水保护器等所需要各个主机或附属件，一次购买就可以安心使用。
4.特别设计微孔板放置垫片和离心管适配塞，确保该装置可以搭配任意品牌、规格的微孔过滤板和离心过滤柱，用户选购后不必担心适用性问题。如因过滤板或离心过滤柱和本产品不适配，可免费退货，详情可咨询销售商。
5.配置的无油真空抽滤泵，插电既能使用，不需要加入泵油或者是倒入水源来驱动抽滤泵，使用简便；噪音值小于48dB，安静振动小，为操作人员提供更舒适使用环境。

用途：微粒去除、DNA浓缩、蛋白质浓缩、核酸点印迹、分子诊断学、基于细胞的免疫诊断学、核酸：蛋白交互作用研究、ELISA测定分析、ELISPOT测定分析、激酶测定分析、裂解物清除、基于滴定的分析测定、样本清洁整理、Oligo合成、SNP测定分析、总体分离、药物结合研究


产品技术参数：
品名：真空纯化过滤系统
品牌：圣斯特Sciencetool
型号：R3-W200
●配置：无油真空抽滤泵1台（含调节阀和缓冲杯）、阳极铝过滤座1台、滤液收集盒1只、离心柱放置板1块、堵头24只、离心管适配塞24只、带阻水过滤器泵管1根。
真空度：670mmHg=90torr=120mbar
抽速：18L/min
灭菌方式：121度高温高压（除抽滤泵主机外均可灭菌）
过滤座材质: 阳极工艺铝合金
支撑片和密封圈材质：橡胶
离心柱放置板材质: 聚碳酸酯
离心柱适配塞材质: 橡胶
电压：220V/50Hz
过滤座内部尺寸: 128×86×73mm
过滤座外部尺寸: 232×124×102mm
抽滤泵外形尺寸：272×121×164mm
过滤座净重：2.6kg
真空泵净重：4.1kg
保修期：3年

更多选择：

真空吸液瓶：用于连接在抽滤泵和纯化过滤座的中间，可以拓展原有废液槽的储液量，包括SB-4520（2000ml，瓶身部分为实验室普通蓝盖玻璃试剂瓶）、SB-P12E（1200ml，聚醚砜抽滤瓶）、SB-PC30（3000ml，聚碳酸酯抽滤瓶）。

新型亲和性外泌体纯化法与外泌体高灵敏度检测应用

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新型亲和性外泌体纯化法与外泌体高灵敏度检测应用

新型亲和性外泌体纯化法与外泌体高灵敏度检测应用




◆前言


　　外泌体是各种细胞外泌的直径在30-100nm之间的膜囊泡。因外泌体内含mRNA、microRNA等核酸和蛋白质对相邻细胞具有交换信息的功能。作为细胞间信号传导的通讯工具和作为癌等各种疾病的生物标记话题比较热议[1][2]。因此，这几年各领域关于外泌体研究很广泛，但是在现实的外泌体实验技术的发展中，关于需要改进的课题存在很多。例如，在外泌体纯化方法中超离心分离法和多聚体沉淀法（市售试剂盒），容易混入多种杂质，在后续实验中增加了很多障碍。另一方面，抗体亲和性和密度梯度离心可获得高纯度外泌体，但是不能获得完整状态。因此存在着不能分析外泌体完整状态下的生理功能。作为外泌体进一步检测方法，免疫印迹和ELISA被广泛应用。但是存在着需要大量外泌体样本和标记蛋白量少导致检测较困难的问题。

　　因此本文为了解决外泌体实验技术中各种课题，我们关于开发的新型外泌体分析工具进行了说明。



◆磷脂酰丝氨酸亲和性新型外泌体纯化法


　　外泌体膜虽然含有分泌细胞源蛋白质和脂质，但众所周知磷脂酰丝氨酸（PS）在活细胞通过翻转酶作用导向细胞膜内侧，也会暴露在外泌体膜外侧[3]。另外，被作为通过巨噬细胞进行细胞凋亡的吞噬受体T-cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing protein 4(Tim4)蛋白质通过细胞外域IgV域与含有钙离子的PS结合[4]。以上述知识为参考，我们利用Tim4固化磁珠，在钙离子存在下捕捉培养上清和血清等样品中的外泌体，再添加螯合剂可纯化外泌体，这种划时代外泌体纯化方法是和金泽大学医学系免疫学华山教授共同开发，并取得了成功。[5]并且MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS实现了比以前的外泌体纯化法更加简捷地纯化高纯度完整状态的外泌体。这是迄今为止取代黄金标准超速离心法的新型外泌体纯化法。（图1）


新型亲和性外泌体纯化法与外泌体高灵敏度检测应用

◆PS Capture™ Exosome ELISA Kit的特点和使用案例


　　PS Capture™ Exosome ELISA Kit是Tim4蛋白通过PS和外泌体亲和性结合的应用ELISA试剂盒。本试剂盒将外泌体表面标记蛋白的抗体固相化，相比以前的ELISA法，可高灵敏度检测外泌体。此方法是将培养上清和血清等含有外泌体的样本添加到Tim4蛋白包被的干板，在钙离子存在下捕获外泌体，通过对外泌体表面标记蛋白质进行一抗结合反应和二抗结合反应，从而完成对外泌体检测（图2）。此外，本试剂盒附加了可作为一抗的小鼠抗CD63单抗，但除此之外，如果测定外泌体表面标记的话，需提前准备小鼠源一抗方可检测外泌体。


新型亲和性外泌体纯化法与外泌体高灵敏度检测应用

　　本试剂盒的优点就是实现了比免疫印迹和已有的Exosome ELISA产品更高灵敏度检测外泌体。首先，为了用本试剂盒和免疫印迹法比较检测灵敏度，在免疫印迹实验中需要检查外泌体检测极限值（图3a）。结果显示，以人结肠癌细胞的COLO201细胞源纯化外泌体作为样本通过抗CD63单抗进行免疫印迹实验，检测出蛋白质含量75ng的外泌体。然后，用本试剂盒检测纯化的白血病源细胞株K562细胞以及COLO201细胞源外泌体的ELISA检测极限值，K562细胞源外泌体的检测极限值为49.9pg，COLO201细胞源外泌体检测极限值为10.9pg。免疫印迹实验实际具有1000倍以上的检测灵敏度（图3b）。另外，已有Exosome ELISA产品的灵敏度在数ng~µg之间（参考各产品手册），但是本试剂盒通过PS与Tim4蛋白亲和性结合比原来外泌体表面标记抗体包被ELISA法在灵敏度上高出100倍以上。

新型亲和性外泌体纯化法与外泌体高灵敏度检测应用

　　最后，本试剂盒的使用案例为各种细胞源外泌体表面标记蛋白的表达分析。用13种细胞培养上清纯化的外泌体各1ng，通过外泌体标记蛋白CD9/CD63/CD81的抗体进行ELISA检测（图4）。结果显示，在各外泌体中表面标记蛋白的存在比例因来源细胞不同而存在明显差异。有的细胞株分泌不具有特定标记蛋白的外泌体，外泌体异质性高且明显的数据说明本试剂盒的ELISA系统是十分优质的。


新型亲和性外泌体纯化法与外泌体高灵敏度检测应用

◆结论


　　综上所述，利用Tim4蛋白的PS亲和性原理的MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS实现了可简便高灵敏度纯化外泌体。PS Capture™ Exosome ELISA Kit是高灵敏度检测外泌体的划时代产品。为此，通过使用本试剂盒对原方法混入杂质后外泌体标记蛋白确认分类问题和至今为止免疫印迹实验以及已有Exosome ELISA产品微量表面标记蛋白检测困难等问题都可解决。今后本公司将会利用Tim4蛋白的PS亲和性能开发外泌体研究相关试剂。真诚希望这些产品为外泌体研究发展做出贡献。



参考文献


[1] Tkach, M. et al. : Cell, 164, 1226 （2016）.

[2] Raimondo, F. et al. : Proteomics,11, 709 （2011）.

[3] Trajkovic, K. et al. : Science,319 （5867）, 1244 （2008）.

[4] Miyanishi, M. et al. : Nature, 450, 435 （2007）.

[5] Nakai, W. et al. : Sci. Rep., 6, 33935 （2016）.

◆相关产品

1.　Exosome外泌体试剂盒

2.　PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒（抗小鼠IgG POD）

Thermo Scientific 纯化剂194318010 194318010

发表于由

Thermo Scientific 纯化剂194318010

Thermo Scientific 纯化剂194318010 10ml Thermo Scientific 纯化剂194318010 储存在2–8°C

Thermo Scientific 纯化剂194318010

这是为各种人血浆和血清蛋白的简单，一步纯化而开发的一组CaptureSelect™蛋白纯化亲和树脂之一。亲和纯化树脂的这种独特选择可以从重组或天然来源中以高度亲和性和特异性纯化蛋白质或其他非抗体生物分子，并固定在高容量琼脂糖支持物上。

规格

色谱柱类型： 散装树脂
形式： 大量媒体
生产线： CaptureSelect™
固定相： 抗卵泡激su

内容及储存

储存在2–8°C。

DNA提取和纯化试剂

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DNA提取和纯化试剂

DNA提取和纯化试剂

分子生物学在生命科学领域的发展中发挥着重要的作用，而DNA相关实验正是其核心。在DNA相关实验中，核酸的高效纯化是影响实验结果的重要因素之一。FUJIFILM Wako可提供动物、植物、微生物以及胶回收等的 DNA 提取和纯化试剂。

 

◆DNA提取和纯化的基本操作及原理


DNA的提取和纯化是基因工程和基因分析的第一步，获得尽可能高回收量和高纯度的DNA，关系到后续实验的成功。


DNA提取和纯化试剂


目前，针对各种生物和样品的DNA提取和纯化方法有很多，但基本上是通过以下三个阶段进行的：


●　细胞的裂解

DNA提取和纯化的第一步是细胞的裂解。用表面活性剂、变性剂、强碱等化学处理或热处理裂解细胞膜。对于具有细胞壁的植物和细菌等，需要用酶分解细胞壁或用玻璃磁珠物理破坏细胞壁。

 

●　去除杂质

除 DNA 外，细胞中还含有蛋白质、RNA等各种杂质。蛋白质用变性剂使其变性，或用蛋白酶进行分解。RNA用RNA酶进行分解。此外，通过苯酚提取或苯酚/氯仿提取，使DNA和杂质（蛋白质等）分离。在中性条件下，加入苯酚或苯酚/氯仿后，DNA会被转移至水相，因此只需分离水相即可实现DNA的分离。

除了经典方法之外，日本基因ISOSPIN系列DNA提取试剂盒，利用了DNA在离液离子（胍盐离子等）存在的条件下会吸附于硅胶膜的原理（Boom Technology）。将含有离液离子的结合缓冲液添加至细胞的裂解液，使其通过附在离心柱上的硅胶膜，DNA会吸附在硅胶膜上，而其他杂质直接通过，因此能够有效地去除杂质。

 

●　用乙醇清洗和溶解·洗脱

需要去除残留在DNA 溶液中的盐类和酚类。将乙醇和盐（如钠盐和铵盐等）添加至DNA 溶液并进行离心，可以使DNA沉淀。这是由于盐中和了 DNA 的负电荷，使亲水性高的 DNA 在乙醇下更容易聚集，并且通过离心更容易发生沉淀（乙醇沉淀）。之后，去除乙醇并将DNA沉淀溶解于水或TE缓冲液中，以获得高纯度的DNA。

使用硅胶膜的方法，也可以通过以乙醇为主要成分的洗涤缓冲液来去除盐等。最后，在硅胶膜上加入水或TE缓冲液后，DNA可以从硅胶膜上分离出来，从而洗脱出高纯度的DNA。

◆参考文献


1. 平尾一郎, 胡桃坂仁志 編：「目的別で選べる核酸実験の原理とプロトコール」 (羊土社) (2011).

2. Green, R. M. and Sambrook, J.：”Molecular Cloning A Laboratory Manual, 4th ed.”, Cold Spring Harbor Laboratory Press (2012).

◆产品列表

DNA Extractor® Kit系列（碘化钠法）


产品编号

产品名称

包装

样品

特点

291-50502

DNA Extractor® WB Kit

50 tests

全血（人、牛、马）、培养细胞、组织

可提取基因组DNA

296-60501

DNA Extractor® SP Kit

50 tests

血清/血浆中的基因组   DNA

可去除血源性脂质

296-67701

DNA Extractor® TIS Kit

50 tests

氧化应激标记物   8-OHdG DNA

抑制提取过程中DNA的氧化

295-58501

DNA Extractor® FM Kit

50 tests

头发、指甲、血迹、唾液斑（法医样本）

从痕量样品中提取DNA

mtDNA Extractor® CT Kit

产品编号

产品名称

包装

样品类型

特点

291-55301

mtDNA Extractor® CT Kit

25 tests

组织、细胞和复合饲料的线粒体DNA

 比哺乳动物组织和细胞更

 快更容易提取线粒体   DNA（mtDNA）。还可用

 于从复合饲料中提取线粒体

 DNA。

日本基因  DNA提取试剂（质粒DNA）

产品编号

产品名称

包装

样品类型

特点

318-07991

ISOSPIN Plasmid

100 tests

大肠杆菌

无需苯酚/氯仿

日本基因  DNA提取试剂（PCR产物）

产品编号

产品名称

包装

样品类型

特点

315-08001

ISOSPIN PCR Product

100 tests

PCR产物

 约20min即可纯化PCR产物

蛋白酶K

产品编号

产品名称

包装

样品类型

特点

161-28701

Proteinase K, recombinant, Solution

5 mL

——

——

169-28702

Proteinase K, recombinant, Solution

25 mL

共沉淀剂

产品编号

产品名称

包装

样品类型

特点

318-01793

Ethachinmate

0.02 mL

核酸

醇沉法用共沉淀剂

312-01791

Ethachinmate

0.2 mL

076-06621

20 mg/mL Glycogen Solution

1mL

——

碘化钠法用共沉淀剂

※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。

通过高等动物的双链RNA纯化技术实现对RNA病毒的高效综合检测

发表于由

通过高等动物的双链RNA纯化技术实现对RNA病毒的高效综合检测

通过高等动物的双链RNA纯化技术实现对RNA病毒的高效综合检测

筑波大学生 命环境系1）、北海道大学 医学研究院 微生物学免疫学领域2） 

浦山俊一1）、福原崇介2）

◆前言

人类发现病毒的存在大约是在1900年，其契机是动植物间出现的一种原因不明的传染病。在寻找致病病原体的过程中，由于它比当时已知的最小病原体（微生物）更小，且具有异质性，因此被命名为"病毒"。此后，研究人员在所有生物体内都发现了各种不同类型的病毒，现在病毒被认为是细胞生物体内普遍存在的绝对寄生因子。

RNA病毒是以RNA为基因组的病毒的总称，从狭义上讲，是指去除在其生命周期内同时利用DNA的逆转录病毒（例如HIV的基因组是RNA，但它能经过逆转录进入宿主的基因组DNA中）的病毒群。它包含多种对人类，家畜和植物等经济型生物有重大危害的病毒，例如典型的SARS-CoV-2、流感病毒、寨卡病毒和丙型肝炎病毒。

对于肉眼无法看见且难以培养的RNA病毒，”发现”其存在至关重要。不仅是医疗领域，还需要更进一步展开关于这些RNA病毒的起源和传播的全健康（one health）研究，并从包含RNA病毒的全球生态系统的角度对其进行认识。因此，基于各种目的的RNA病毒检测方法也应运而生，本文将基于"双链RNA"的方法介绍其应用于高等动物组织的案例。

 

◆利用双链RNA检测RNA病毒的原理

不携带RNA病毒的细胞几乎不存在长双链RNA。但是，存在RNA病毒时，RNA病毒基因组的复制过程中会产生双链RNA，因此，如果在生物样品中检测出双链RNA，则表明存在RNA病毒1），此处的关键在于双链RNA的纯化技术。纯化主要使用的是利用双链RNA结合于纤维素树脂的性质的柱色谱法1-3），和使用双链RNA结合蛋白和抗双链RNA抗体的方法，以及通过DNA和单链RNA的分解留下双链RNA的方法。通过解码得到的双链RNA，也可以选择性地确定RNA病毒基因组4-8）。

 

◆动物组织中的双链RNA的纯化和解码

由于几乎没有从高等动物样品纯化双链RNA的报告，因此我们首先使用被广泛使用的纤维素树脂进行纯化。使用市售肉糜的测试结果表明，rRNA的读数比例的约占90%，通过分子内互补结合，残留了大量具有部分双链RNA结构的rRNA（图1左）。相同的方法应用于真菌、植物、昆虫时，rRNA读数比例仅为百分之几，这表明这是高等动物样品特有的课题。因此，将使用相同方法纯化的双链RNA溶液进一步用市售的rRNA去除试剂盒进行处理，可将rRNA读数比例减少到20%左右（图1右）。

通过高等动物的双链RNA纯化技术实现对RNA病毒的高效综合检测

图1. 肉糜样品中，普通的双链RNA纯化会残留大量rRNA

使用自制核酸纯化柱通过纤维素树脂从肉糜样品中纯化双链RNA。为了阐明rRNA的去除效果，将获得的双链RNA组分进行分组，准备已去除rRNA的样品和未去除rRNA的样品，分别通过FLDS法9）进行测序。通过SortMeRNA软件计算rRNA在清理后的数据中所占的比例。

但是，使用rRNA去除试剂盒会使每个样品的成本增加1万日元左右，处理过程也会变得繁琐且耗时。因此，使用ISOVIRUS Ⅱ（使用纤维素树脂纯化双链RNA用试剂盒， ISOVIRUS的动物样品版）对人肝脏样品进行测试。结果表明，使用ISOVIRUS Ⅱ时，即使不经过rRNA去除工序，也可将rRNA读数比例抑制在20%左右（图2A左）。当ISOVIRUS Ⅱ与rRNA去除试剂盒配合使用时，可进一步降低rRNA读数比例至10%以下（图2A右）。并且，该样品来源为HCV阳性患者，因此也能检测出HCV读数（图2B）。

通过高等动物的双链RNA纯化技术实现对RNA病毒的高效综合检测

图2. ISOVIRUS Ⅱ的rRNA残留量少

使用ISOVIRUS Ⅱ通过纤维素树脂从人肝脏样品中纯化双链RNA。为了阐明rRNA的去除效果，将获得的双链RNA组分进行分组，准备已去除rRNA的样品和未去除rRNA的样品，分别通过Modified dsRNA-seq法4）进行测序。通过SortMeRNA软件计算rRNA在清理后的数据中所占的比例，并通过绘图计算HCV的比例。

◆结语

双链RNA作为RNA病毒感染的分子标志物，近50年来一直为提高RNA病毒的探索效率做出贡献。实际上，笔者以前报告的Modified dsRNA-seq方法已成功捕获以极低复制率潜藏在人体器官中的HCV。与采用一般的RNA病毒探索方法相比，检测灵敏度高数百倍，且无需花费巨额测序成本就能全面检测RNA病毒。

直到最近，双链RNA纯化还没有试剂盒化，而是作为每个研究室传承的特殊技术。但是，随着ISOVIRUS系列的推出，它成为了人人都能使用的技术。并且，ISOVIRUS Ⅱ还有望消除昂贵且繁琐的rRNA去除工序，大幅降低从高等动物样品中探索RNA病毒的成本。

在RNA疫苗的生产中，需要去除作为副产物产生的双链RNA，以避免不必要的自然免疫激活10）。ISOVIRUS系列能够稳定地回收可能仅微量存在的HCV来源双链RNA，并且具有数百ng量级的高结合容量，还有望用于上述RNA疫苗的生产。

◆参考文献

 1. Morris, T. J. and Dodds, J. A. : Phytopathology, 69, 854 （1979）.

 2. Marquez, L. M. et al. : Science, 315, 513 （2007）.

 3. Okada, R. et al. : J. Gen. Plant Pathol., 81, 103 （2015）.

 4. Izumi, T. et al. : Viruses, 13, 1310 （2021）.

 5. Hirai, M. et al. : Microbes Environ., 36, ME20152 （2021）.

 6. Roossinck, M. J. et al. : Mol. Ecol., 19 Suppl 1, 81 （2010）.

 7. Decker, C. J. et al. : Viruses, 11, 943 （2019）.

 8. Yanagisawa, H. et al. : Viruses, 8, 70 （2016）.

 9. Urayama, S. et al. : Mol. Ecol. Resour., 18, 1444 （2018）.

10. Rosa, S. S. et al. : Vaccine, 39, 2190 （2021）.

◆注释

双链RNA

两个具有互补序列的RNA分子形成碱基对，具有双螺旋结构的RNA分子。

读数（比例）

指通过新一代测序技术获得的庞大数量的碱基序列之一。在庞大的读数中，表示特定序列所占的百分比时，称为"读数比例"。

HCV

丙型肝炎病毒（HepatitisCvirus）的简称。多数的慢性感染患者被认为会发展成肝硬化或肝癌。

◆相关产品

双链RNA纯化试剂盒

产品编号

产品名称

产品规格

310-08811

ISOVIRUS

20次用

312-09091

ISOVIRUS II

20次用

对照融合蛋白系列 重组蛋白纯化/检测用

发表于由

对照融合蛋白系列
重组蛋白纯化/检测用

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对照融合蛋白系列 重组蛋白纯化/检测用

重组蛋白纯化/检测用

对照融合蛋白系列

对照融合蛋白系列 重组蛋白纯化/检测用

对照融合蛋白系列 重组蛋白纯化/检测用

◆Multitope蛋白


本品是由4种标签肽、3种标签蛋白连接成的重组蛋白。

因其为变性状态，可直接用于SDS-PAGE，在Western Blotting中可用作阳性对照。


对照融合蛋白系列 重组蛋白纯化/检测用



通过各种一抗检测Multitope（Western Blotting检测法）


对照融合蛋白系列 重组蛋白纯化/检测用

Lane 1: MultiTope, 变性20ng
Lane 2: MultiTope, 变性50ng
 
＜一抗＞
His：6×His MoAb Albumine free, 5000倍稀释
GFP：Anti GFP(Wako, 012-22541), 1000倍稀释
HA：Anti HA(Wako, 014-21881), 500倍稀释
DYK：Anti DYKDDDDK(Wako, 018-22381), 

　　　5000倍稀释
GST：Anti GST(Wako, 013-21851), 500倍稀释
c-Myc：Anti c-Myc(Wako, 017-21871), 

　　　　1000倍稀释
C端-His：Anti C-terminal 6×His

　　　　  (Wako, 010-21861), 400倍稀释

 


产品名称

备注

规格

产品编号

包装

Multitope蛋白

Multitope   (变性), 重组体, 溶液

Multitope, Denatured, recombinant, Solution

浓度：10 ng/μL

免疫化学用

139-16371

500 μL

133-16374

2.5 mL

  组成：50 mmol/L Tris-HCl, pH 6.8, 2 w/v% SDS, 10 v/v% glycerol, 0.1 w/v% bromophenol blue,

　　　  1.5 w/v% DTT.
  使用方法：Load 5-10 μL of Multitope onto SDS-PAGE
  使用注意：本品保存温度为-20℃。
  保存过程中，缓冲液成分可能会析出，所以使用前请在室温条件下充分混合溶液直至析出成分完全溶解，

  方可使用。

 


◆DYKDDDDK-BAP, 重组体, 溶液


　　本产品是可融合DYKDDDDK标签各个部位的Bacterial Alkaline Phosphatase(BAP)。


１．可用于识别抗DYKDDDDK标签抗体交叉性的

　　对照蛋白。

２．可用于Western Blotting和免疫沉淀实验。

对照融合蛋白系列 重组蛋白纯化/检测用

 


产品名称

备注

产品编号

包装

DYKDDDDK-BAP, 重组体, 溶液

N端 DYKDDDDK-BAP,重组体, 溶液

Amino-terminal DYKDDDDK-BAP, recombinant, Solution

基因研究用

016-24401

200 μg

N端 Met-DYKDDDDK-BAP, 重组体, 溶液

Amino-terminal Met-DYKDDDDK-BAP, recombinant, Solution

013-24411

200 μg

C端 DYKDDDDK-BAP, 重组体, 溶液

Carboxy-terminal DYKDDDDK-BAP, recombinant, Solution

036-22781

200 μg

 来源：大肠杆菌表达DYKDDDDK-BAP
 溶液组成： 10 mM Tris-HCl, pH8.0, 120 mM氯化钠, 0.05 mM氯化锌, 50 w/v %甘油
 蛋白浓度： 0.35 mg/mL
 含量： 90%以上(SDS-PAGE)
 分子量：

 约48.8 kDa (N端 DYKDDDDK-BAP)
 约49.0 kDa (N端 Met-DYKDDDDK-BAP)
 约48.8 kDa (C端 DYKDDDDK-BAP)



◆相关产品


内参照

下表为Western Blot实验中参照用单抗一览表。


产品名称

规格

产品编号

包装

抗β肌动蛋白单抗
  Anti β-Actin, Monoclonal Antibody

免疫化学用

013-24553

200 μg

011-24554

1 mg

017-24556

5 mg

抗β肌动蛋白单抗,过氧化物酶标记

Anti β-Actin, Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated

免疫化学用

017-24573

200 μL

抗α-微管蛋白, 单抗

Anti α-Tubulin, Monoclonal Antibody

免疫化学用

011-25034

10 μg

017-25031

200 μg

013-25033

1 mg

  抗β-微管蛋白, 单抗

Anti β-Tubulin, Monoclonal Antibody

免疫化学用

018-25044

10 μg

014-25041

200 μg

010-25043

1 mg

  抗GAPDH, 单抗

Anti GAPDH, Monoclonal Antibody

免疫化学用

016-25523

200 μg

014-25524

1 mg

010-25526

5 mg

  抗GAPDH, 单抗, 过氧化酶结合

Anti GAPDH, Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated

免疫化学用

015-25473

200 μL

 


蛋白酶抑制剂系列


产品名称

规格

产品编号

包装

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 I，无动物源成分（通用型）

Protease Inhibitor Cocktail Set I, Animal-derived-free (for general use) (×100), Lyophilized

通用型

165-26021

1 mL用

161-26023

1 mL用×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒III,   DMSO溶液（不含EDTA）（×100）
  Protease Inhibitor Cocktail Set III, DMSO Solution   (EDTA free) (×100)

动物细胞

163-26061

1 mL

169-26063

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒V（无EDTA）（×100）
  Protease Inhibitor Cocktail Set V (EDTA free) (×100), Lyophilized

2D电泳

162-26031

1 mL

168-26033

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 VI，DMSO溶液，用于植物（×100）
  Protease Inhibitor Cocktail Set VI, DMSO Solution (for Plant) (×100)

植物细胞

164-26091

1 mL

160-26093

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒VII，DMSO溶液，组氨酸标签蛋白（×100）
  Protease Inhibitor Cocktail Set VII, DMSO Solution (for Histidine-tagged Protein) (×100)

His Tag 纯化※

167-26101

1 mL

163-26103

1 mL×5

※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。

亲和标签比较表

亲和标签

TARGET

PA

6xHis

氨基酸序列

(YPGQ)5V

GVAMPGAEDDVV

HHHHHH

残基数

21

12

6

分子量 (kDa)

2.34

1.16

0.84

等电点（pI）

5.52

3.49

7.21

配体

TARGET tag

PA tag

Ni, Co, Zn, Cu

亲和珠回收

40% Propyleneglycol,
  1×TBS(pH7.5)

3M MgCl2, MES(pH6.0)

0.5M Imididazole(pH7.4)

单抗边界强度

（KD（M））

1.0×10-8

4.9×10-10

Ni-NTA:
  1.0×10-5～-6

单抗

Clone No.

P20.1(Mouse)

NZ-1(Rat)

Merck:HIS. H8(Mouse)

亲和力

++++

+++++

+++

提纯成本

+

+

+

多肽洗脱

+++

+++

Imidazole

背景

（培养上清）

+

+

+++++

背景

（细胞裂解物）

+

+

++++

亲和标签

DYKDDDDK

c-Myc

HA

GST

氨基酸序列

DYKDDDDK

EQKLISEEDL

YPYDVPDYA

–

残基数

8

10

9

218

分子量 (kDa)

1.01

1.20

1.10

26

等电点（pI）

3.97

4.00

3.56

–

配体

DYKDDDDK tag

c-Myc tag

HA tag

GST

亲和珠回收

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2～3.5)

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2～3.5)

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2～3.5)

Glutathione,
  Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2～3.5)

单抗边界强度

（KD（M））

2.8×10-8

2.2×10-9

2.8×10-9

Glutathione:
  1.0×10-5～-6

单抗

Clone No.

M2(Mouse)

9E10(Mouse)

3F10(Mouse)
  HA-7(Rat)

Wako:5A7(Mouse)

亲和力

++++

++++

++++

++++

提纯成本

++

++

++

+

多肽洗脱

+++

++

++

Glutathione

背景

（培养上清）

++++

+++

+++

++++

背景

（细胞裂解物）

++++

++++

+++

++++

　　本比较表为Wako独家调查的数据。样品、检测方法和手法的不同，特异性也会有所变化，因此无法保证各个亲和标签的功能。

 

亲和性标签抗体结合琼脂糖珠 重组蛋白纯化用

发表于由

亲和性标签抗体结合琼脂糖珠
重组蛋白纯化用

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

亲和性标签抗体结合琼脂糖珠 重组蛋白纯化用

重组蛋白纯化用

亲和性标签抗体结合琼脂糖珠

亲和性标签抗体结合琼脂糖珠 重组蛋白纯化用

亲和性标签抗体结合琼脂糖珠 重组蛋白纯化用

◆亲和性标签抗体结合琼脂糖珠


亲和性标签抗体结合琼脂糖珠 重组蛋白纯化用

可确认比A公司产品具有同等甚至以上的抗原回收性能！！

＜使用载体量＞
抗DYKDDDDK标签抗体琼脂糖珠(Wako): 20 μL / assay
A社 Affinity Beads: 20 μL /assay
＜抗原添加量＞
含DYKDDDDK标签融合蛋白的大肠杆菌细胞溶解液20 mg/assay
＜免疫沉淀条件＞
4℃、3 小时
＜洗脱方法＞
150 μg/mL DYKDDDDK肽 (产品编号：044-30951) 20 μL /assay
→ 4℃、孵化30 分钟
添加20 μL / assay 的2%SDS sample buffer → 煮沸5分钟。

＜SDS-PAGE＞
样品电泳量：10 μL
＜检测方法＞
银染法
配制可过量表达DYKDDDDK标签融合蛋白（约19 kDa）的大肠杆菌裂解液，分别用本产品和A公司产品免疫沉淀后，用DYKDDDDK肽进行抗原洗脱。将得到的抗原样品用SDS-PAGE分离、银染色后，比较抗原回收率。

产品名称

子类
  克隆号

规格

产品编号

包装

DYK标签：DYKDDDK

抗DYKDDDDK标签抗体琼脂糖珠

Anti DYKDDDDK tag 

Antibody Beads

小鼠IgG2b

1E6

免疫化学用

012-22781

2 mL(Net 1 mL)

018-22783

10 mL(Net 5 mL)

016-22784

50 mL(Net 25 mL)

 识别N端、C端、Internal的DYKDDDDK标签
 使用载体：4%琼脂糖
 溶液组成：1×PBS (pH 7.4), 50 w/v% glycerol, 0.02 w/v%   sodium azide
 抗体结合量：7.5 mg/mL
 结合容量：1mL本产品可结合约1.0 mg的DYKDDDDK标签融合蛋白。

His标签：HHHHHH（6×Histidine）

抗6×组氨酸抗体琼脂糖珠

Anti 6×Histidine Antibody Beads

小鼠IgG3・κ
  28-75

免疫化学用

019-23391

2 mL(Net 1 mL)

015-23393

10 mL(Net 5 mL)

 可识别N端、C端的6×His tag
 使用载体：4%琼脂糖
 溶液组成：1×TBS (pH 7.4), 0.05 w/v％ sodium azide
 抗体结合量：2.0 mg/mL
 结合容量：1 mL本产品可结合约1.0～2.0 mg的6×His标签融合蛋白

HA tag：YPYDVPDYA

抗HA抗体琼脂糖珠

Anti HA Antibody Beads

小鼠IgG1  

4B2

免疫化学用

014-23081

2 mL(Net 1 mL)

010-23083

10 mL(Net 5 mL)

 使用载体：4%　琼脂糖
 溶液组成：1×PBS (pH 7.4), 50％ glycerol, 0.02 w/v％ sodium azide
 抗体结合量：8.5 mg/mL
 结合容量：1 mL本品可结合约1.5 mg的HA标签融合蛋白

c-My标签：EQKLISEEDL

抗c-Myc抗体琼脂糖珠

Anti c-Myc Antibody Beads (10D11)

小鼠IgG1

10D11

免疫化学用

010-26501

200 μL

(Net 100 μL)

016-26503

2 mL(Net 1 mL)

014-26504

10 mL(Net 5 mL)

 使用担体：4%　琼脂糖
 溶液组成：1×PBS (pH 7.4), 50％ glycerol, 0.02w/v％ sodium azide
 抗体结合量：7.5mg/mL
 结合容量：1mL本产品可结合约0.9 mg的c-Myc tag融合蛋白

V5 tag：GKPIPNPLLGLDST

抗V5 tag抗体琼脂糖珠

Anti V5 tag Antibody Beads

小鼠IgG1
  10B5

免疫化学用

016-24381

2 mL(Net 1mL)

012-24383

10 mL(Net 5mL)

 使用载体：4%琼脂糖
 溶液组成：1×PBS (pH 7.4), 50％ glycerol, 0.02w/v％ sodium azide
 抗体结合量：7 mg/mL
 结合容量：1 mL本产品可结合约0.5 mg的V5标签融合蛋白

 

◆相关产品


内参照

下表为Western Blot实验中参照用单抗一览表。


产品名称

规格

产品编号

包装

抗β肌动蛋白单抗
  Anti β-Actin, Monoclonal Antibody

免疫化学用

013-24553

200 μg

011-24554

1 mg

017-24556

5 mg

抗β肌动蛋白单抗,过氧化物酶标记

Anti β-Actin, Monoclonal Antibody,   Peroxidase Conjugated

免疫化学用

017-24573

200 μL

抗α-微管蛋白, 单抗

Anti α-Tubulin, Monoclonal Antibody

免疫化学用

011-25034

10 μg

017-25031

200 μg

013-25033

1 mg

Anti β-Tubulin, Monoclonal Antibody
  抗β-微管蛋白, 单抗

免疫化学用

018-25044

10 μg

014-25041

200 μg

010-25043

1 mg

Anti GAPDH, Monoclonal Antibody
  抗GAPDH, 单抗

免疫化学用

016-25523

200 μg

014-25524

1 mg

010-25526

5 mg

Anti GAPDH, Monoclonal Antibody, Peroxidase   Conjugated
  抗GAPDH, 单抗, 过氧化酶结合

免疫化学用

015-25473

200 μL

 


蛋白酶抑制剂系列


产品名称

规格

产品编号

包装

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 I，无动物源成分（通用型）

Protease Inhibitor Cocktail Set I, Animal-derived-free (for general use) (×100), Lyophilized

通用型

165-26021

1 mL用

161-26023

1 mL用×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒III,   DMSO溶液（不含EDTA）（×100）
  Protease Inhibitor Cocktail Set III, DMSO Solution   (EDTA free) (×100)

动物细胞

163-26061

1 mL

169-26063

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒V （无EDTA）（×100）
  Protease Inhibitor Cocktail Set V (EDTA free) (×100), Lyophilized

2D电泳

162-26031

1 mL

168-26033

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 VI，DMSO溶液，用于植物（×100）
  Protease Inhibitor Cocktail Set VI, DMSO Solution (for Plant) (×100)

植物细胞

164-26091

1 mL

160-26093

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒VII，DMSO溶液，组氨酸标签蛋白（×100）
  Protease Inhibitor Cocktail Set VII, DMSO Solution   (for Histidine-tagged Protein) (×100)

His Tag 纯化※

167-26101

1 mL

163-26103

1 mL×5

亲和标签比较表

亲和标签

TARGET

PA

6xHis

氨基酸序列

(YPGQ)5V

GVAMPGAEDDVV

HHHHHH

残基数

21

12

6

分子量 (kDa)

2.34

1.16

0.84

等电点（pI）

5.52

3.49

7.21

配体

TARGET tag

PA tag

Ni, Co, Zn, Cu

亲和珠回收

40% Propyleneglycol,
  1×TBS(pH7.5)

3M MgCl2, MES(pH6.0)

0.5M Imididazole(pH7.4)

单抗边界强度

（KD（M））

1.0×10-8

4.9×10-10

Ni-NTA:
  1.0×10-5～-6

单抗

Clone No.

P20.1(Mouse)

NZ-1(Rat)

Merck:HIS. H8(Mouse)

亲和力

++++

+++++

+++

提纯成本

+

+

+

多肽洗脱

+++

+++

Imidazole

背景

（培养上清）

+

+

+++++

背景

（细胞裂解物）

+

+

++++

亲和标签

DYKDDDDK

c-Myc

HA

GST

氨基酸序列

DYKDDDDK

EQKLISEEDL

YPYDVPDYA

–

残基数

8

10

9

218

分子量 (kDa)

1.01

1.20

1.10

26

等电点（pI）

3.97

4.00

3.56

–

配体

DYKDDDDK tag

c-Myc tag

HA tag

GST

亲和珠回收

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2～3.5)

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2～3.5)

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2～3.5)

Glutathione,
  Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2～3.5)

单抗边界强度

（KD（M））

2.8×10-8

2.2×10-9

2.8×10-9

Glutathione:
  1.0×10-5～-6

单抗

Clone No.

M2(Mouse)

9E10(Mouse)

3F10(Mouse)
  HA-7(Rat)

Wako:5A7(Mouse)

亲和力

++++

++++

++++

++++

提纯成本

++

++

++

+

多肽洗脱

+++

++

++

Glutathione

背景

（培养上清）

++++

+++

+++

++++

背景

（细胞裂解物）

++++

++++

+++

++++

　　本比较表为Wako独家调查的数据。样品、检测方法和手法的不同，特异性也会有所变化，因此无法保证各个亲和标签的功能。

 

※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。


亲和标签抗体结合磁珠 重组蛋白纯化用

发表于由

亲和标签抗体结合磁珠
重组蛋白纯化用

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

亲和标签抗体结合磁珠 重组蛋白纯化用

重组蛋白纯化用

亲和标签抗体结合磁珠

亲和标签抗体结合磁珠 重组蛋白纯化用

亲和标签抗体结合磁珠 重组蛋白纯化用

◆抗DYKDDDDK tag抗体磁珠


　　已固定识别DYKDDDDK肽单抗的磁珠悬浮液。可用于检测大肠杆菌、酵母、哺乳动物表达的DYKDDDDK标签融合蛋白。

 


特点


●　非特异性结合少

●　可回收N端、C端、Internal全部蛋白

●　可用DYKDDDDK肽、SDS溶液洗脱

●　无需离心处理，可减少样品损耗，简单替换溶液



1. 抗DYKDDDDK标签抗体磁珠的性能

亲和标签抗体结合磁珠 重组蛋白纯化用
可在不依赖标签位置的情况下，回收重组蛋白。

把各DYKDDDDK tag融合蛋白分别加入细胞溶解液中进行免疫沉淀后，通过Western blotting比较抗原回收量。

经4%SDS样品缓冲液洗脱和SDS-PAGE后，用Western blotting法，加过氧化酶标签抗体（产品编号：015-22391）进行发光检测。
 
M : 标签蛋白
Met : N-terminal Met-DYKDDDDK-BAP
N : N-terminal DYKDDDDK-BAP
C : C-terminal DYKDDDDK-BAP

2. 洗脱法比较抗原回收性能

亲和标签抗体结合磁珠 重组蛋白纯化用
 SDS和DYKDDDDK肽均能洗脱抗原

将DYKDDDDK标签融合蛋白加入细胞溶解液中，分别加入磁珠吸附后，利用各种洗脱法回收抗原量并用Western Blotting法进行比较。

用过氧化酶标签抗体（产品编号：015-22391）进行发光检测。
 
M：Marker蛋白
Lane1：添加2×SDS sample buffer后，煮沸
Lane2：DYKDDDDK peptide(200 μg/mL)
Lane3：4% SDS solution

3. 非特异性吸附蛋白的比较


亲和标签抗体结合磁珠 重组蛋白纯化用

在不含DYKDDDDK tag的细胞溶解液中分别添加磁珠并进行免疫沉淀后，比较非特异性吸附蛋白。

用4%SDS样品缓冲液洗脱、电泳后，用银染色、抗小鼠IgG、过氧化酶标签抗体进行Western Blotting比较。

无法检测出非特异性吸附质。

 


产品名称

子类
  克隆号

规格

产品编号

包装

DYK标签：DYKDDDK

抗DYKDDDDKtag抗体磁珠

Anti DYKDDDDK tag Magnetic Beads

小鼠 IgG2b

1E6

免疫化学用

011-25154

200 μL

017-25151

2.5 mL

013-25153

2.5 mL×5

 溶液组成：10 mg/mL Anti-DYKDDDDK Magnetic Beads, 1×TBS(pH 7.4), 50 w/v % glycerol, 0.05 w/v % 　　　　　 sodium azide


◆相关产品


内参照

下表为Western Blot实验中参照用单抗一览表。


产品名称

规格

产品编号

包装

抗β肌动蛋白单抗
  Anti β-Actin, Monoclonal Antibody

免疫化学用

013-24553

200 μg

011-24554

1 mg

017-24556

5 mg

抗β肌动蛋白单抗,过氧化物酶标记

Anti β-Actin, Monoclonal Antibody,   Peroxidase Conjugated

免疫化学用

017-24573

200 μL

抗α-微管蛋白, 单抗

Anti α-Tubulin, Monoclonal Antibody

免疫化学用

011-25034

10 μg

017-25031

200 μg

013-25033

1 mg

Anti β-Tubulin, Monoclonal Antibody
  抗β-微管蛋白, 单抗

免疫化学用

018-25044

10 μg

014-25041

200 μg

010-25043

1 mg

Anti GAPDH, Monoclonal Antibody
  抗GAPDH, 单抗

免疫化学用

016-25523

200 μg

014-25524

1 mg

010-25526

5 mg

Anti GAPDH, Monoclonal Antibody, Peroxidase   Conjugated
  抗GAPDH, 单抗, 过氧化酶结合

免疫化学用

015-25473

200 μL

 


蛋白酶抑制剂系列


产品名称

规格

产品编号

包装

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 I，无动物源成分（通用型）

Protease Inhibitor Cocktail Set I, Animal-derived-free (for general use) (×100), Lyophilized

通用型

165-26021

1 mL用

161-26023

1 mL用×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒III,   DMSO溶液（不含EDTA）（×100）
  Protease Inhibitor Cocktail Set III, DMSO Solution   (EDTA free) (×100)

动物细胞

163-26061

1 mL

169-26063

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒V （无EDTA）（×100）
  Protease Inhibitor Cocktail Set V (EDTA free) (×100), Lyophilized

2D电泳

162-26031

1 mL

168-26033

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 VI，DMSO溶液，用于植物（×100）
  Protease Inhibitor Cocktail Set VI, DMSO Solution (for Plant) (×100)

植物细胞

164-26091

1 mL

160-26093

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒VII，DMSO溶液，组氨酸标签蛋白（×100）
  Protease Inhibitor Cocktail Set VII, DMSO Solution   (for Histidine-tagged Protein) (×100)

His Tag 纯化※

167-26101

1 mL

163-26103

1 mL×5

※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。


亲和标签比较表

亲和标签

TARGET

PA

6xHis

氨基酸序列

(YPGQ)5V

GVAMPGAEDDVV

HHHHHH

残基数

21

12

6

分子量 (kDa)

2.34

1.16

0.84

等电点（pI）

5.52

3.49

7.21

配体

TARGET tag

PA tag

Ni, Co, Zn, Cu

亲和珠回收

40% Propyleneglycol,
  1×TBS(pH7.5)

3M MgCl2, MES(pH6.0)

0.5M Imididazole(pH7.4)

单抗边界强度

（KD（M））

1.0×10-8

4.9×10-10

Ni-NTA:
  1.0×10-5～-6

单抗

Clone No.

P20.1(Mouse)

NZ-1(Rat)

Merck:HIS. H8(Mouse)

亲和力

++++

+++++

+++

提纯成本

+

+

+

多肽洗脱

+++

+++

Imidazole

背景

（培养上清）

+

+

+++++

背景

（细胞裂解物）

+

+

++++

亲和标签

DYKDDDDK

c-Myc

HA

GST

氨基酸序列

DYKDDDDK

EQKLISEEDL

YPYDVPDYA

–

残基数

8

10

9

218

分子量 (kDa)

1.01

1.20

1.10

26

等电点（pI）

3.97

4.00

3.56

–

配体

DYKDDDDK tag

c-Myc tag

HA tag

GST

亲和珠回收

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2～3.5)

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2～3.5)

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2～3.5)

Glutathione,
  Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2～3.5)

单抗边界强度

（KD（M））

2.8×10-8

2.2×10-9

2.8×10-9

Glutathione:
  1.0×10-5～-6

单抗

Clone No.

M2(Mouse)

9E10(Mouse)

3F10(Mouse)
  HA-7(Rat)

Wako:5A7(Mouse)

亲和力

++++

++++

++++

++++

提纯成本

++

++

++

+

多肽洗脱

+++

++

++

Glutathione

背景

（培养上清）

++++

+++

+++

++++

背景

（细胞裂解物）

++++

++++

+++

++++

　　本比较表为Wako独家调查的数据。样品、检测方法和手法的不同，特异性也会有所变化，因此无法保证各个亲和标签的功能。

 

亲和标签抗体系列 重组蛋白纯化检测用

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亲和标签抗体系列
重组蛋白纯化检测用

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亲和标签抗体系列 重组蛋白纯化检测用

重组蛋白纯化检测用

亲和标签抗体系列

亲和标签抗体系列 重组蛋白纯化检测用

亲和标签抗体系列 重组蛋白纯化检测用

　　和光为您准备了DYKDDDDK, 6×His, GFP, HA, MBP, c-Myc, GST,V5融合蛋白提纯、检测用抗体及珠。
　　另外，和光还准备了上述各样品的试用装，您可向当地代理商索取。

　　

◆DYK标签：DYKDDDDK


　　DYK标签是识别DYKDDDDK肽的单抗。可用于检测大肠杆菌、酵母、哺乳动物中的DYKDDDDK标签融合蛋白。

　　

亲和标签抗体系列 重组蛋白纯化检测用


数据提供：　
鹿儿岛大学研究生院医疗牙科综合研究科 附属顽固病毒病理控制研究中心 分子病毒感染研究领域 草野秀一老师

将表达3×DYKDDDDK标签融合蛋白A的质粒转染至HEK293细胞株中，经过24小时培养后，随机选取其中的克隆细胞。将选取的克隆细胞用RIPA缓冲液进行溶解，对所得的细胞溶解液用Western Blot法检测，可检测出3×FLAG标签融合蛋白。

分别用Wako（克隆号 1E6）（产品编号：018-22381）抗体和A公司抗体进行Western Blot检测。

与A公司抗体相比，Wako（克隆号 1E6）抗体识别DYKDDDDK的特异性更高。

 


A公司产品和Wako产品在Western Blot检测中的灵敏度比较


亲和标签抗体系列 重组蛋白纯化检测用

Lane 1: 293T细胞溶解液
Lane 2: 瞬时表达蛋白A-DYKDDDDK的293T细胞溶解液
Lane 3: 瞬时表达蛋白B-DYKDDDDK的293T細胞溶解液
封闭：含5%脱脂奶的TBS-T、4℃，一晚

抗体反应：2小时、室温
发光剂：ImmunoStar® LD
检测：LAS-3000、曝光时间15分

Wako 1E6-HRP比A公司产品有更高的灵敏度!!

 


产品名称

子类克隆号

适用实验

规格

产品编号

包装

单抗

抗DYKDDDDK标签，单抗

Anti DYKDDDDK tag, Monoclonal Antibody

小鼠IgG2b   1E6

WB,IP,FCM,ChIP

免疫化学用

018-22381

200 μg

014-22383

1 mg

012-22384

5 mg

抗DYKDDDDK标签，单抗

Anti DYKDDDDK tag,Monoclonal Antibody,Rat

大鼠IgG1   6F7

WB,IP,ELISA,IHC,FCM

免疫化学用

018-23621

200 μg

012-23624

1 mg

HRP标签单抗

抗DYKDDDDK标签，单抗，过氧化酶结合

Anti DYKDDDDK tag, Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated

小鼠IgG2b   1E6

WB

免疫化学用

015-22391

200 μL

019-22394

1 mL

◆6×His标签：HHHHHH (6×组氨酸)


　　可用于检测His(6×组氨酸)标签融合蛋白。克隆不同，识别端的特异性、应用也有所不同。


亲和标签抗体系列 重组蛋白纯化检测用

克隆号

识别端

Western blot

Immunoprecipitation

ELISA

产品编号

N端

C端

N端

C端

9F2

C端

ND

+++++

ND

++

–

010-21861

9C11

N・C端

+++++

++++

+++++

++

○

011-23091

21-48

N・C端

+++

++++

+++

+++

○

017-23211

28-75

N・C端

++

++

+++++

+++++

○

014-23221

9F2

C端

ND

+++++

–

–

–

013-23171

9C11

N・C端

+++++

++++

–

–

◎

010-23181

B公司产品和Wako产品各克隆号的Western blot检测功能比较


亲和标签抗体系列 重组蛋白纯化检测用

N端His：HEK293T表达的6×His-

ProteinZ, 1×105 cells
C端His：Protein P-6×His＋CHO细胞溶解液, 1×105 cells

一抗：1 μg/mL
二抗：抗小鼠IgG抗体, 5000倍稀释液
可确认其具有比B公司产品同等甚至更高的灵敏度。

 


6×His tag抗体　选购指南


  • N端的检测中，最强的克隆号是什么？
    WB：9C11　IP： 9C11, 28-75

  • C端的检测中，最强的克隆号是什么
    WB：9F2　IP：28-75

  • 适用于WB检测中，识别N/C端的克隆号是什么？
    9C11

  • 适用于IP检测中，识别N/C端的克隆号是什么？
    28-75

  • 可灵活应用于WB/IP的万能型克隆号是哪个？
    21-48

  • 适用于WB检测的克隆号是哪个？
    9C11

  • 适用于IP检测的克隆号是哪个？
    28-75

  • 只识别C端的性价比较高的克隆号是哪个？
    9F2

 


产品名称

子类

克隆号

适用实验

规格

产品编号

包装

单抗

抗6×组氨酸，单抗

Anti 6×His,Monoclonal Antibody(9F2)

小鼠IgG1
  9F2

WB,IP

免疫化学用

010-21861

200 μg

014-21864

1 mg

010-21866

5 mg

抗6×组氨酸，单抗

Anti 6×His,Monoclonal Antibody(9C11)

小鼠IgG1   9C11

WB,IP,ELISA

免疫化学用

011-23091

200 μg

015-23094

1 mg

011-23096

5 mg

抗6×组氨酸，单抗

Anti 6×His,Monoclonal Antibody(21-28)

小鼠IgG1・κ
  21-48

WB,IP,ELISA

免疫化学用

017-23211

200 μg

011-23214

1 mg

抗6×组氨酸，单抗

Anti 6×His,Monoclonal Antibody(28-75)

小鼠IgG3・κ
  28-75

WB,IP,ELISA

免疫化学用

014-23221

200 μg

018-23224

1 mg

HRP标签单抗

抗6×组氨酸，单抗，过氧化酶结合

Anti 6×Histidine, Monoclonal Antibody(9F2), Peroxidase Conjugated

小鼠IgG1   9F2

WB

免疫化学用

013-23171

100 μL

017-23174

500 μL

抗6×组氨酸，单抗，过氧化酶结合

Anti 6×Histidine, Monoclonal Antibody(9C11), Peroxidase   Conjugated

小鼠IgG1   9C11

WB

免疫化学用

010-23181

100 μL

014-23184

500 μL

◆GFP tag： Green Fluorescent Protein (GFP)


　　可识别Green Fluorescent Protein (GFP)抗体。GFP是可实时检测目标蛋白局部或细胞、细胞器中的标签蛋白，可应用于各个领域。


产品名称

子类
  克隆号

适用实验

规格

产品编号

包装

单抗及多抗

抗绿色荧光蛋白，单抗

Anti Green Fluorescent Protein, Monoclonal Antibody (Anti GFP, MoAb)

小鼠IgG2a・κ
  mFX73

IP, IHC

免疫化学用

012-20461

100 μL

018-20463

100 μL×5

抗绿色荧光蛋白，单抗

Anti GFP,MoAb(mF×75)

小鼠IgG2a・κ
  mFX75

WB

免疫化学用

012-22541

100 μL

抗绿色荧光蛋白，多抗 IS，兔

Anti Green Fluorescent Protein,Rabbit Polyclonal IS

–

WB, IHC

免疫化学用

013-23811

20 μg

◆HA tag：YPYDVPDYA


　　血凝素（HA）来源(98-106 aa)的多肽：抗YPYDVPDYA单抗。

 

产品名称

子类
  克隆号

适用

实验

规格

产品编号

容量

单抗

抗血凝素, 单抗

Anti HA,MoAb

小鼠IgG2b   4B2

WB, IP

免疫化学用

014-21881

200 μg

018-21884

1 mg

014-21886

5 mg

HRP标签单抗

抗血凝素, 单抗，过氧化酶结合

Anti Hemagglutinin,Monoclonal Antibody, Peroxidase   Conjugated

小鼠IgG2b   4B2

WB

免疫化学用

011-21911

100 μL

015-21914

500 μL

 


参考数据


 抗绿色荧光蛋白, 单抗（012-22541）
 抗体浓度：1 μg/mL
 抗原量：将100 μL表达GFP重组蛋白的大肠杆菌溶解液进行10倍稀释，并取

　　　　10 μL进行电泳操作
 用10000倍稀释的抗小鼠IgG-HRP抗体进行检测。
 
 抗血凝素，单抗（014-21881）

 抗体浓度：0.5 μg/mL
 抗原量：对5 ng HA标签重组蛋白进行电泳操作
 用10000倍稀释的抗小鼠IgG-HRP抗体进行检测。  

亲和标签抗体系列 重组蛋白纯化检测用

◆MBP tag：Maltose Binding Protein


　　可识别Maltose-binding Protein (MBP)单抗。MBP是对麦芽糖、麦芽糊精具有结合性的蛋白，具有通过与目的蛋白融合，提高表达蛋白可溶性的特点，可简便纯化、检测重组蛋白。


产品名称

子类
  克隆号

适用实验

规格

产品编号

包装

单抗

抗麦芽糖结合蛋白，单抗

Anti MBP, Monoclonal Antibody,   Rat

大鼠IgG2b

TMab-2

ELISA, WB

免疫化学用

016-24141

200 μg

◆c-Myc标签：EQKLISEEDL


　　可识别人c-Myc 来源(410-419aa)多肽EQKLISEEDL单抗。

 

产品名称

子类
  克隆号

适用实验

规格

产品编号

包装

单抗

抗c-Myc，单抗

ANTI c-Myc, Monoclonal Antibody

小鼠IgG1

9E10

WB, IP

免疫化学用

017-21871

200 μg

011-21874

1 mg

017-21876

5 mg

抗c-Myc，单抗

Anti c-Myc, Monoclonal Antibody (10D11)

小鼠IgG1

10D11

WB, IP

免疫化学用

017-26511

20 μg

013-26513

200 μg

011-26514

1 mg

HRP标签单抗

抗c-Myc, 单抗，过氧化酶结合

Anti c-Myc,MoAb, Peroxidase Conjugated

小鼠IgG1

9E10

WB

免疫化学用

014-21901

100 μL

018-21904

500 μL

抗c-Myc, 单抗，过氧化酶结合

Anti c-Myc, Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated (10D11)

小鼠IgG1

10D11

WB

免疫化学用

014-26521

10 μL

010-26523

100μL

018-26524

500 μL



◆GST标签：Glutathione-S-transferase


　　可识别Glutathione S-transferase（GST）单抗。

 

产品名称

子类
  克隆号

适用实验

规格

产品编号

包装

单抗

抗谷胱甘肽 S-转移酶，单抗

Anti Glutathione S-transferase, Monoclonal Antibody

小鼠IgG2b
  5A7

WB, IP

免疫化学用

013-21851

200 μg

017-21854

1 mg

013-21856

5 mg

HRP标签单抗

抗谷胱甘肽 S-转移酶，单抗，过氧化酶结合

Anti Glutathione S-transferse,Monoclonal Antibody, HRP Conjugated

小鼠IgG2b   5A7

WB

免疫化学用

011-21891

100 μL

015-21894

500 μL

 


参考数据


抗c-Myc, 单抗（017-21871）
抗体浓度：0.25 μg/mL
抗原量：对10 ng c-Myc标签重组蛋白进行电泳操作。
用10000倍稀释的抗小鼠IgG-HRP抗体进行检测。
 
 抗谷胱甘肽 S-转移酶, 单抗（013-21851）
 抗体浓度：1.0 μg/mL
 抗原量：将100 μL表达GTS标签重组蛋白的大肠杆菌溶解液进行10倍稀释，

　　　　 并取10 μL进行电泳操作。
  用10000倍稀释的抗小鼠IgG-HRP抗体进行检测。

亲和标签抗体系列 重组蛋白纯化检测用

◆V5 tag：GKPIPNPLLGLDST


　　可识别多肽GKPIPNPLLGLDST单抗｡

 

产品名称

子类
  克隆号

适用实验

规格

产品编号

包装

单抗

抗V5 tag, 单抗

Anti V5 tag, Monoclonal Antibody(6F5)

小鼠IgG2a
  6F5

WB, IP

免疫化学用

011-23591

200 μg

015-23594

1 mg

011-23596

5 mg

HRP标签单抗

抗V5tag，单抗，过氧化酶结合

Anti V5 tag, Monoclonal Antibody(6F5), Peroxidase Conjugated

小鼠IgG2a

6F5

WB

免疫化学用

019-24371

100 μL

 

◆相关产品


内参照

下表为Western Blot实验中参照用单抗一览表。


产品名称

规格

产品编号

包装

抗β肌动蛋白单抗
  Anti β-Actin, Monoclonal Antibody

免疫化学用

013-24553

200 μg

011-24554

1 mg

017-24556

5 mg

抗β肌动蛋白单抗,过氧化物酶标记

Anti β-Actin, Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated

免疫化学用

017-24573

200 μL

抗α-微管蛋白，单抗

Anti α-Tubulin, Monoclonal Antibody

免疫化学用

011-25034

10 μg

017-25031

200 μg

013-25033

1 mg

抗β-微管蛋白，单抗

Anti β-Tubulin, Monoclonal Antibody

免疫化学用

018-25044

10 μg

014-25041

200 μg

010-25043

1 mg

抗GAPDH，单抗

Anti GAPDH, Monoclonal Antibody

免疫化学用

016-25523

200 μg

014-25524

1 mg

010-25526

5 mg

  抗GAPDH，单抗，过氧化酶结合

Anti GAPDH, Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated

免疫化学用

015-25473

200 μL

 


蛋白酶抑制剂系列


产品名称

规格

产品编号

包装

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 I，无动物源成分（通用型）

Protease Inhibitor Cocktail Set I, Animal-derived-free (for general use) (×100), Lyophilized

通用型

165-26021

1 mL用

161-26023

1 mL用×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒III，DMSO溶液（不含EDTA）（×100）
  Protease Inhibitor Cocktail Set III, DMSO Solution (EDTA free) (×100)

动物细胞

163-26061

1 mL

169-26063

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒V（无EDTA）（×100）
  Protease Inhibitor Cocktail Set V (EDTA free) (×100), Lyophilized

2D电泳

162-26031

1 mL

168-26033

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 VI，DMSO溶液，用于植物（×100）
  Protease Inhibitor Cocktail Set VI, DMSO Solution (for Plant) (×100)

植物细胞

164-26091

1 mL

160-26093

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒VII，DMSO溶液，组氨酸标签蛋白（×100）
  Protease Inhibitor Cocktail Set VII, DMSO Solution (for Histidine-tagged Protein) (×100)

His Tag 纯化※

167-26101

1 mL

163-26103

1 mL×5

※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。


亲和标签比较表

亲和标签

TARGET

PA

6xHis

氨基酸序列

(YPGQ)5V

GVAMPGAEDDVV

HHHHHH

残基数

21

12

6

分子量 (kDa)

2.34

1.16

0.84

等电点（pI）

5.52

3.49

7.21

配体

TARGET tag

PA tag

Ni, Co, Zn, Cu

亲和珠回收

40% Propyleneglycol,
  1×TBS(pH7.5)

3M MgCl2, MES(pH6.0)

0.5M Imididazole(pH7.4)

单抗边界强度

（KD（M））

1.0×10-8

4.9×10-10

Ni-NTA:
  1.0×10-5～-6

单抗

Clone No.

P20.1(Mouse)

NZ-1(Rat)

Merck:HIS. H8(Mouse)

亲和力

++++

+++++

+++

提纯成本

+

+

+

多肽洗脱

+++

+++

Imidazole

背景

（培养上清）

+

+

+++++

背景

（细胞裂解物）

+

+

++++

亲和标签

DYKDDDDK

c-Myc

HA

GST

氨基酸序列

DYKDDDDK

EQKLISEEDL

YPYDVPDYA

–

残基数

8

10

9

218

分子量 (kDa)

1.01

1.20

1.10

26

等电点（pI）

3.97

4.00

3.56

–

配体

DYKDDDDK tag

c-Myc tag

HA tag

GST

亲和珠回收

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2～3.5)

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2～3.5)

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2～3.5)

Glutathione,
  Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2～3.5)

单抗边界强度

（KD（M））

2.8×10-8

2.2×10-9

2.8×10-9

Glutathione:
  1.0×10-5～-6

单抗

Clone No.

M2(Mouse)

9E10(Mouse)

3F10(Mouse)
  HA-7(Rat)

Wako:5A7(Mouse)

亲和力

++++

++++

++++

++++

提纯成本

++

++

++

+

多肽洗脱

+++

++

++

Glutathione

背景

（培养上清）

++++

+++

+++

++++

背景

（细胞裂解物）

++++

++++

+++

++++

　　本比较表为Wako独家调查的数据。样品、检测方法和手法的不同，特异性也会有所变化，因此无法保证各个亲和标签的功能。