特点1:清晰地观察核仁
用4% PFA或MeOH固定HeLa细胞后,用PBS洗净后用1% Triton X-100进行破膜处理,加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色
试剂 (DAPI) 并培养,然后用共聚焦荧光显微镜观察。
结果证实DAPI染色的细胞核内 (蓝色)有数个核仁存在。
<染色条件>
・PFA 固定
细胞在4%PFA室温下浸泡5 min,再用Triton X-100在室温下浸泡20 min,加入各种荧光探针后培养5 min。
・MeOH 固定
细胞在冷的MeOH中浸泡1 min,再用Triton X-100在室温下浸泡20 min,加入各种荧光探针后培养5 min。
Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm
Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm
DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm
特点2:核仁定位
用4%PFA固定WI-38细胞后,用抗Fibrillarin一抗和荧光标记的二抗免疫染色,并加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色试剂
(DAPI) ,培养后,用落射式荧光显微镜 (Keyence,BZ-X710) 观察。
结果证实Nucleolus Bright Green和Nucleolus Bright Red与核仁标记物(Dense Fibrillar Component)的染色部位一致。
<检测条件>
Nucleolus Bright Green:Ex: 450-490 nm / Em: 500-550 nm
Nucleolus Bright Red:Ex: 533-548 nm / Em: 570-640 nm
DAPI:Ex: 340-380 nm / Em: 435-485 nm
Anti-Fibrillarin 抗体:Ex: 590-650 nm / Em: 668-733 nm
特点:3:与核仁相关的领域的报告示例
相关领域 |
概要 |
文献 |
评论(衰老) |
关于各种参与细胞功能的核仁, 包括与癌症和早老症的已知关系、 特别是关于衰老的核仁功能。 |
V. Tiku, A. Antebi, “Nucleolar Function in Lifespan Regulation.”, Trends Cell Biol., 2018, 28(8), 662. |
细胞衰老 |
由于与抑制衰老有关的蛋白质缺损、 核仁数量的减少和核仁总面积的加。 |
H. Tanaka, S. Takebayashi, A. Sakamoto, T. Igata, Y. Nakatsu, N. Saitoh, S. Hino, M. Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Rep.,2017, 18(9), 2148. |
细胞衰老 |
由于rRNA加工因子的枯竭导致 核仁肥大化, 同时SA-βGal和p16表达增加。 |
K. Nishimura, T. Kumazawa, T. Kuroda, N. Katagiri, M. Tsuchiya, N. Goto, R. Furumai, A. Murayama, J. Yanagisawa, K. Kimura, “Perturbation of ribosome biogenesis drives cells into senescence through 5S RNP-mediated p53 activation.”, Cell Rep., 2015, 10(8), 1310. |
自噬 |
通过抑制RNA聚合酶的转录, 确认自噬的诱导和核仁的形状变化。 |
N. Katagiri, T. Kuroda, H. Kishimoto, Y. Hayashi, T. Kumazawa and K. Kimura, “The nucleolar protein nucleophosmin is essential for autophagy induced by inhibiting Pol I transcription”, Scientific Reports, 2015, 8903, DOI: 10.1038/srep08903. |