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ScreenFect™ 通信向HeLa细胞导入siRNA数据

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ScreenFect™ 通信向HeLa细胞导入siRNA数据

ScreenFect™ 通信向HeLa细胞导入siRNA数据

 高性能基因导入试剂



下面为大家介绍使用 ScreenFect ™ siRNA 向 HeLa 细胞导入 siRNA 数据的实验成果及逆转染（1-STEP）Protocol。

◆向 HeLa 细胞的逆转染例子（24孔培养板）

细胞的前期培养

1. 用适当的培养容器（T-75 烧瓶），将 HeLa 细胞培养至半融合状态。

配制转染试剂

1. 准备两支 1.5 mL 灭菌试管。

2. 在其中一支试管里加入 24.5 μL ScreenFect ™ Dilution buffer。

3. 再往步骤２的试管里加入 0.5 μL 的 ScreenFect ™ siRNA reagent，使全部容量达到 25 μL。…溶液（A）

  （ScreenFect ™ siRNA reagent在使用前进行涡旋处理。）

4. 在另一支试管里加入 24 μL ScreenFect ™ Dilution buffer。

5. 再向步骤４的试管里加入 1 μL 的 5 μmol/L PIK3CB siRNA 溶液（5 pmol）…溶液（B）

6. 将溶液（B）全部添加至溶液（A）的试管中。

7. 轻敲试管，使溶液混合均匀。再用台式离心机降速处理。

8. 在室温下孵浴 5~20 分钟。

配制配制细胞悬浮液

1. 从恒温箱里取出【细胞的前期培养】的烧瓶。

2. 去除培养基，用 PBS 清洗一次。

3. 向烧瓶里添加 2 mL 胰蛋白酶溶液后，放入室温、5% CO2 的恒温箱里培养，直到细胞从培养容器中脱落。

4. 加入约 5 mL FBS 添加培养基使反应停止。

5. 利用移液器使细胞分散，将全部培养液转移到离心管中。

6. 150×g 离心，5 分钟。

7. 去除上清时不要去掉颗粒物。

8. 添加 5~10 mL 新的培养基，利用移液器使细胞分散。

9. 用血细胞计数板等的细胞计算器检测细胞数。

10. 检测出细胞悬浮液的浓度后经过计算，以此配制 2.0×105 cells/mL 的细胞悬浮液（配制的细胞悬浮液量可根据实验规模进行适当地调节。）

转染

1. 将 500 μL 在【配制细胞悬浮液】时配制好的细胞悬浮液添加至细胞培养板里。

2. 将 50 μL 在【配制转染试剂】步骤８中孵浴的 DNA-lipid complex 添加至细胞培养板里，轻摇培养板使溶液混合（也可以先往细胞培养板里加

    入 50 μL DNA-lipid complex，再加入 500 μL 细胞悬浮液）。

3. 放入 CO2 的恒温箱里培养 24~48 小时后即可进行后续实验。

 

 

◆实验数据

　　用逆向转染法和正向转染法向 HeLa 细胞进行 PIK3CB siRNA 的导入实验，通过实时定量 PCR 检测出 PIK3CB mRNA 的表达量。将定量结果得出的敲减效率，与原来用其他公司的产品进行实验得出的敲减效率进行比较，结果显示，ScreenFect ™ siRNA 拥有高于其他公司产品抑制目的基因表达的效率。


【逆向转染（1-STEP）】

ScreenFect™ 通信向HeLa细胞导入siRNA数据



【正向转染（2-STEP）】

ScreenFect™ 通信向HeLa细胞导入siRNA数据


◆产品列表


产品编号

产品名称

规格

包装

299-75001

ScreenFect ™ siRNA转染试剂

ScreenFect ™ siRNA

 基因研究用

0.2 mL

295-75003

1 mL

293-75004

1 mL×5

 

Mirus MIR 2906 TransIT-HeLaMONSTER® Transfection Kit TransIT-HeLaMONSTER®转染试剂盒（包含Hela细胞转染试剂和转染增强辅助试剂，满足Hela细胞的高效DNA转染） （MIR2906 ） 10 x 1 ml

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上海金畔生物科技有限公司提供Mirus MIR 2906 TransIT-HeLaMONSTER® Transfection Kit TransIT-HeLaMONSTER®转染试剂盒（包含Hela细胞转染试剂和转染增强辅助试剂，满足Hela细胞的高效DNA转染） （MIR2906 ） 10 x 1 ml，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购

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Mirus MIR 2806 TransIT®-Keratinocyte Transfection Reagent TransIT®-Keratinocyte转染试剂（适用于角化细胞的DNA转染） （MIR2806 ） 10 x 1 ml 44966.00

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Mirus MIR 2800 TransIT®-Keratinocyte Transfection Reagent TransIT®-Keratinocyte转染试剂（适用于角化细胞的DNA转染） （MIR2800 ） 1 ml 5779.00

Mirus MIR 2706 TransIT®-293 Transfection Reagent TransIT®-293转染试剂（针对HEK293细胞系的最佳转染试剂，效率高达75%-85%，细胞毒性极低） （MIR2706 ） 10 x 1 ml 44980.00

Mirus MIR 2705 TransIT®-293 Transfection Reagent TransIT®-293转染试剂（针对HEK293细胞系的最佳转染试剂，效率高达75%-85%，细胞毒性极低） （MIR2705 ） 5 x 1 ml 24331.00

Mirus MIR 2704 TransIT®-293 Transfection Reagent TransIT®-293转染试剂（针对HEK293细胞系的最佳转染试剂，效率高达75%-85%，细胞毒性极低） （MIR2704 ） 0.4 ml 3655.00

Mirus MIR 2700 TransIT®-293 Transfection Reagent TransIT®-293转染试剂（针对HEK293细胞系的最佳转染试剂，效率高达75%-85%，细胞毒性极低） （MIR2700 ） 1 ml 5573.00

Mirus MIR 2306 TransIT®-LT1 Transfection Reagent TransIT®-LT1转染试剂（适用于多种细胞系的DNA转染试剂，低毒高效，满足单质粒转染或多质粒共转，性价比高） （MIR2306 ） 10 x 1 ml 39739.00

Mirus MIR 2305 TransIT®-LT1 Transfection Reagent TransIT®-LT1转染试剂（适用于多种细胞系的DNA转染试剂，低毒高效，满足单质粒转染或多质粒共转，性价比高） （MIR2305 ） 5 x 1 ml 21504.00

Mirus MIR 2304 TransIT®-LT1 Transfection Reagent TransIT®-LT1转染试剂（适用于多种细胞系的DNA转染试剂，低毒高效，满足单质粒转染或多质粒共转，性价比高） （MIR2304 ） 0.4 ml 3131.00

Mirus MIR 2300 TransIT®-LT1 Transfection Reagent TransIT®-LT1转染试剂（适用于多种细胞系的DNA转染试剂，低毒高效，满足单质粒转染或多质粒共转，性价比高） （MIR2300 ） 1 ml 4966.00

Mirus MIR 2256 TransIT®-mRNA Transfection Kit TransIT®-mRNA转染试剂盒（包含mRNA转染试剂和转染增强辅助试剂，可满足大分子量RNA的高效转染，适用于病毒包装、蛋白表达和CRISPR基因编辑等） （MIR2256 ） 10 x 1 ml 82195.00

Mirus MIR 2255 TransIT®-mRNA Transfection Kit TransIT®-mRNA转染试剂盒（包含mRNA转染试剂和转染增强辅助试剂，可满足大分子量RNA的高效转染，适用于病毒包装、蛋白表达和CRISPR基因编辑等） （MIR2255 ） 5 x 1 ml 44415.00

Mirus MIR 2250 TransIT®-mRNA Transfection Kit TransIT®-mRNA转染试剂盒（包含mRNA转染试剂和转染增强辅助试剂，可满足大分子量RNA的高效转染，适用于病毒包装、蛋白表达和CRISPR基因编辑等） （MIR2250 ） 1 ml 10138.00

Mirus MIR 2225 TransIT®-mRNA Transfection Kit TransIT®-mRNA转染试剂盒（包含mRNA转染试剂和转染增强辅助试剂，可满足大分子量RNA的高效转染，适用于病毒包装、蛋白表达和CRISPR基因编辑等） （MIR2225 ） 0.4 ml 5669.00