FAOBlue 可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化(FAO)活性的试剂

FAOBlue
可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化(FAO)活性的试剂

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可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化(FAO)活性的试剂FAOBlue                              可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化(FAO)活性的试剂

FAOBlue

FAOBlue是一款可以通过蓝色荧光可视化脂肪酸分解的共同途径——脂肪酸β-氧化(FAO)的活性的试剂。

通过荧光成像,可以简单地检测出过去难以检测的活细胞中的脂肪酸β-氧化活性。

该产品可广泛应用于对比评估不同细胞种类之间的β-氧化,探索促进或抑制β-氧化活性的化合物,β-氧化相关酶群的基础研究等领域。

 

※ 本产品基于九州大学研究生院药学研究院药物发现化学生物学领域 王子田彰夫教授的研究成果,

※ 由Funakoshi株式会社商品化并销售。

 本产品仅供研究使用。

FAOBlue                              可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化(FAO)活性的试剂

使用FAOBlue可视化HepG2细胞的FAO活性


添加FAOBlue到HepG2细胞中,观察活细胞成像,可从细胞中观察到蓝色荧光。另一方面,若使用FAO抑制剂进行前处理,则荧光强度明显减少,由此可知,蓝色荧光的强度取决于FAO的活性。

何为脂肪酸β-氧化(Fatty acid beta-oxidation; FAO)

脂肪酸是构成细胞的各种脂质的基本要素,与葡萄糖、氨基酸并称为能源。尤其是在葡萄糖不足而饥饿的时候,脂肪酸会分解活跃,产生大量的ATP。虽然脂肪酸根据碳链的长短以及不饱和度的差别而存在不同的种类,但是由于它的分解属于线粒体等细胞器的共同分解途径,因此这种途径被统称为脂肪酸β-氧化(Fatty acid beta-oxidation; FAO)。

脂肪酸β-氧化主要通过4步酶反应——1)脂肪酸β位的氧化,2)β位的水合,3)β位的氧化,4)裂解,被阶段性分解为2个碳原子的短链脂肪酸和作为ATP原料的乙酰CoA。其中生成的2个碳原子的短链脂肪酸再通过同一个循环,以2n个碳原子的短链脂肪酸重复分解。

研究提出,癌症以及非酒精性肝炎(NASH)等疾病中,脂肪酸β-氧化会出现很大的变动,因此开发检测脂肪酸β-氧化活性的方法备受期待。然而,在活细胞中检测多种酶参与的脂肪酸β-氧化一直以来都十分困难。

FAOBlue是一款新型脂肪酸β-氧化应答型荧光探针,由九州大学研究生院药学研究院、专攻药物发现化学生物学领域的王子田彰夫教授开发。只需将产品添加到培养基中的简单操作,便可以通过荧光观察定量脂肪酸β-氧化活性。

FAOBlue                              可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化(FAO)活性的试剂

◆原理


FAOBlue是一种在碳原子数为9的壬酸的碳链末端添加了蓝色荧光色素香豆素衍生物的化合物,此外,通过用乙酰氧基甲基酯保护末端脂肪酸来提高细胞膜透过性。虽然FAOBlue中含有香豆素衍生物,但是在该状态下,它不会在405 nm激发下发出荧光。

FAOBlue                              可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化(FAO)活性的试剂

1. 附着在羧基的乙酰氧甲基具有高疏水性,因此FAOBlue可以跨越细胞膜,有效地摄入到细胞中。

2. 通过细胞内的酯水解酶去除乙酰氧基甲酯,转换成游离脂肪酸的形态。

3. 通过脂酰CoA合成酶转换成脂酰CoA,摄入β-氧化途径。

4. 通过β-氧化循环壬酸(C9)按庚酸(C7)、戊酸(C5)、丙酸(C3)的顺序转换,在第四次β-氧化循环的丙酸

4. 被分解时,香豆素衍生物被释放出来。香豆素衍生物在405 nm激发下发出蓝色荧光。

5. 由于游离的香豆素衍生物扩散到整个细胞中,因此通过检测细胞内的蓝色荧光强度,可以实时且定量的评价β-氧

4. 化活性。

 

※ 通过添加肉碱穿梭抑制剂的Etomoxir,有效地抑制了细胞内的荧光上升。

※ 该结果证明FAOBlue主要检测线粒体的FAO活性。

特点

● FAOBlue处于消光状态,分解后的游离香豆素衍生物呈现出比分解前更高的荧光强度。

● 添加培养基后,30 min~120 min后便可观察。

● 无需特别操作即可检测β-氧化活性。

● 实例验证能观察多种细胞类型的β-氧化。

● 有抑制药物依赖性β-氧化和因促进而引起的活性变化的成功检测案例。

● 检测波长:激发405 nm/荧光460 nm。

※ 注意:

使用共聚焦激光显微镜时,推荐使用405 nm激光激发。如果本试剂在330~380 nm的范围内激发的话,会观察到无关FAO活性的370~450 nm(最大荧光波长410 nm)的荧光。使用荧光显微镜时,为了特异性观察FAO活性,推荐选择激发波长在390~430 nm范围内的激发光滤光片。详情请参考数据实例:FAO特异性吸收光谱、荧光光谱的变化。

原著论文


Uchinomiya et. al., Chem. Commun. 56, 3023~3026 (2020) .

”Fluorescence Detection of Metabolic Activity of Fatty Acid Beta Oxidation Pathway in Living Cells.”

应用


● 评价各种细胞的β-氧化活性

● β-氧化相关的基因基础研究

● 抑制或促进β-氧化的化合物的探索  等

操作方法概况


1. 在HBS中溶解FAOBlue至终浓度为5~20 μM*1

1. *1  针对不同的细胞类型,合适的浓度有所差异。建议根据具体实验进行探讨。

2. 去除培养基,用HBS清洗细胞2次。

3. 向细胞添加含有FAOBlue的HBS。

4. 在37°C下培养30 min以上*2

1. *2  针对不同的细胞类型,合适的培养时长有所差异。建议根据具体实验进行探讨。

5. 更换培养基后*3,通过成像观察蓝色荧光(Ex. 405 nm/Em. 430~480 nm)。

1. *3  染色后的培养基更换是非必须的。即使不清洗也可进行观察。

FAOBlue                              可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化(FAO)活性的试剂

实验注意点


由于本试剂使用405 nm的激发光,根据不同的观察对象,可能会观察到其自发的荧光。建议同时进行未添加本试剂的阴性对照实验。尤其是在显微镜下观察到点状荧光信号时,可能就是细胞的自发荧光。

 

◆应用实例


FAO特异性吸收光谱、荧光光谱的变化

FAOBlue以及香豆素衍生物的吸收光谱(左)和荧光光谱(右)。

FAOBlue在通过FAO转换成香豆素衍生物后,吸收最大值由350 nm变为405 nm的长波长。因此,在405 nm的激发条件下,FAOBlue不会发出荧光,只有在通过FAO释放香豆素衍生物时才会发出蓝色荧光。

 

※ 注意:

若使用处于FAOBlue的吸收最大值350 nm左右的光激发,FAOBlue也会发出蓝色荧光(380~450 nm;最大波长400 nm)。若在荧光显微镜中使用普通的DAPI滤光片,将会同时激发未反应的FAOBlue以及FAO反应后的香豆素衍生物。所以在选择滤光片时请格外注意。

FAOBlue                              可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化(FAO)活性的试剂

可视化各种细胞类型中的FAO活性


在4种癌细胞中加入FAOBlue,培养一定时间后进行荧光观察。所有细胞都观察到了蓝色荧光,而添加FAO抑制剂etomoxir后荧光显著衰减,由此可知,蓝色荧光是由FAO活性引起的。


FAOBlue                              可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化(FAO)活性的试剂


各种细胞的实验条件有所不同。

 HepG2 : 5 μM, 30 min

※ LNCaP: 20 μM, 120 min

※ HeLa : 20 μM, 120 min

※ A549 : 5 μM, 30 min


观察刺激依赖性β-氧化的变化


HepG2细胞添加脂质代谢促进剂AICAR*2(200 μM,3 h)或部分FAO抑制剂ranolazine(200 μM,12 h)进行前处理后,添加FAOBlue(5 μM)培养30 min。进行荧光观察时,可以看到对比对照实验(未处理),AICAR中荧光强度明显增强,ranolazine中荧光强度明显降低。

*2  AICAR : AMPK(AMP-activated protein kinase)活化剂具有活化脂质代谢的功能。

FAOBlue                              可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化(FAO)活性的试剂

药物作用的定量分析


使用FAOBlue可以定量分析药物对FAO的效果。用非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)的候选治疗药ND-630(acetyl-CoA carboxylase inhibitor)前处理HepG2细胞4 h后,添加FAOBlue(5 μM)培养30 min。使用共聚焦激光显微镜评价蓝色荧光强度时,可以观察到依赖于ND-630浓度的荧光强度增加。由此可知,ND-630增强了FAO的活性。

FAOBlue                              可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化(FAO)活性的试剂

NASH模型小鼠分析


非酒精性肝炎(NASH)是一种与脂质相关的疾病,已知会降低脂肪分解的速度。向正常小鼠和NASH模型小鼠以口服形式给药增强脂质代谢的bezafibrate后,回收其肝脏制备初代培养肝细胞。向各个细胞加入FAOBlue(5 μM)观察其FAO活性,结果显示,对比正常小鼠来源细胞,NASH模型小鼠来源细胞的FAO活性明显被抑制。另一方面,我们可以看到给药bezafibrate的NASH模型小鼠来源细胞中FAO恢复了活性。

本试剂可用于脂质相关疾病模型中的FAO定量分析。

FAOBlue                              可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化(FAO)活性的试剂

※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。


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FAOBlue

产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
FDV-0033 FAOBlue (Fatty Acid Oxidation Detection Reagent)
FAOBlue 脂肪酸氧化检测试剂
0.2 mg

3-MCPD及其脂肪酸酯标准品

3-MCPD及其脂肪酸酯标准品

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3-MCPD及其脂肪酸酯标准品3-MCPD及其脂肪酸酯标准品



  3-氯-1,2-丙醇(3-MCPD)是在食品的加工和储藏过程中所形成的一种氯丙醇化合物。3-MCPD 的其主要污染来源于酸水解植物蛋白(HVP)以及食用油的精制中的副产品,是公认的食品污染物,具有潜在致癌性。

  3-MCPD 可作为一个单独的化合物,也可与脂肪酸发生酯化反应。3-MCPD 酯是一种稳定的中间体,由脂肪(油)转换成3-MCPD 的一种副产物。研究表明3-MCPD 酯存在于很多加工和未加工的食品以及食品调料中。一般来说,任何食品和食品调料中单独的3-MCPD 的量都要远远小于由3-MCPD 酯水解出来的3-MCPD 量。

  


◆相关的国标

  GB/T 5009.191-2006 食品中氯丙醇含量的测定

  本标准第一法适用于水解植物蛋白液、调味品、香肠、奶酪、鱼、面粉、淀粉、谷物和面包中3-氯-1 2-丙二醇(3-MCPD)含量的测定。

  第二法适用于酱油、食醋、鸡精、蚝油等调味品、水解植物蛋白液、香肠、方便面调味包等食品中单氯取代的3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)和2-氯-1 3-丙二醇(2-MCPD)以及双氯取代的1 3-二氯-2-丙醇(1 3-DCP)和2 3-氯-1-丙二醇(2 3-DCP)含量的测定。

  第三法适用于酱油、食醋、鸡精、水解植物蛋白液等食品、调味品中3-MCPD、1 3-DCP和2 3-DCP 含量的测定。

  GB/T 18782-2002 调味品中3-氯-1,2-丙醇的测定

本标准适用于酱油、酱油粉、酸水解植物蛋白调味液(粉)和其他调味液(粉)中3-氯-1,2-二氯含量的测定。

  文献:油脂性食品中脂肪酸氯丙醇酯检测方法的研究进展

产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
031-21511 3-Chloro-1,2-propanediol Dioleate Standard 
 3 – 氯-1,2 – 丙二醇二油酸脂标准品
100 mg for Food Analysis
037-21471 3-Chloro-1,2-propanediol Dipalmitate Standard 
 3 – 氯-1,2 – 丙二醇双棕榈酸酯标准品
100 mg for Food Analysis
038-21881 3-Chloro-1,2-propanediol Distearate Standard 
 3 – 氯-1,2 – 丙二醇二硬脂酸酯标准品
100 mg for Food Analysis

缩水甘油脂肪酸酯标准品

缩水甘油脂肪酸酯标准品

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缩水甘油脂肪酸酯标准品缩水甘油脂肪酸酯标准品

 


甘油脂肪酸酯,食用油的生产过程中的一种副产物。当被人体吸收后会转换成一种致癌物质——缩水甘油。

目前,世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)已将缩水甘油归类为“有致癌危险”(第2A组),而缩水甘油脂肪酸酯存在在体量降解成缩水甘油的风险。因此近年来,各国均逐渐提倡减少食物中缩水甘油脂肪酸酯的使用。

FUJIFILM Wako可提供缩水甘油脂肪酸酯标准品。


主要包括以下几种:

   1.  油酸缩水甘油酯

   2.  亚油酸缩水甘油酯

   3.  亚麻酸缩水甘油酯

   4.  棕榈酸缩水甘油酯

   5.  硬脂酸缩水甘油酯

   6.  缩水甘油

缩水甘油脂肪酸酯标准品

 

从图谱中可看出用GC分析时,峰能完全分开且峰型很好。

产品编号

产品名称

中文名称

包装

CAS

实物图

071-05711

Glycidyl Oleate Standard

油酸缩水甘油酯标准品

100 mg

5431-33-4

缩水甘油脂肪酸酯标准品

078-05721

Glycidyl Linoleate Standard

亚油酸缩水甘油酯标准品

100 mg

24305-63-3

缩水甘油脂肪酸酯标准品

075-05731

Glycidyl Linolenate Standard

亚麻酸缩水甘油酯标准品

100 mg

51554-07-5

072-05741

Glycidyl Palmitate Standard

棕榈酸缩水甘油酯标准品

100 mg

7501-44-2

缩水甘油脂肪酸酯标准品

075-05851

Glycidyl Stearate Standard

硬脂酸缩水甘油酯标准品

100mg

7460-84-6

缩水甘油脂肪酸酯标准品

079-05751

Glycidol Standard

缩水甘油标准品

100 mg

556-52-5

缩水甘油脂肪酸酯标准品

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反式脂肪酸研究用试剂

反式脂肪酸研究用试剂

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反式脂肪酸研究用试剂反式脂肪酸研究用试剂

 


反式脂肪酸存在于人造黄油、起酥油等植氢化油中,以及天然食品中(例如肉类和奶制品)。 近年来,由于反式脂肪酸的摄入与心脏病风险之间存在一定关系,人们正在努力预防和改善由过多的脂质摄入引起的肥胖和与生活方式有关的疾病。

FUJIFILM Wako可提供反式脂肪酸分析用内标物及相关脂肪酸酯标准品。

反式脂肪酸分析用内标物

目前对于反式脂肪酸的分析有两种方法:分别为美国油脂化学协会AOCS Ce1h-05法和美国官方分析化学师协会AOAC的官方方法AOAC 996.06法。

 AOCS法将二十一烷酸甘油三酯(由具有21个碳原子的饱和脂肪酸组成的甘油三酯; C21:0)用作内标物质进行定量;而AOAC将十一碳酸三甘油酯(C11:0)作为内标来定量反式脂肪酸。另外,日本油学会的标准油脂分析方法使用十七烷酸标准品(C17)作为动植物油分析的内标物。

产品编号

产品名称

包装

脂肪酸碳数目

不饱和度

084-08661

Heptadecanoic Acid Standard
十七烷酸标准品

100 mg

17

0

203-18781

Triundecanoin Standard
十一烷酸甘油三酯标准品

100 mg

11

0

200-18791

Tritridecanoin Standard
十三烷酸甘油三酯标准品

100 mg

13

0

203-18801

Triheptadecanoin Standard
十七烷酸甘油三酯标准品

100 mg

17

0

205-18501

Triheneicosanoin Standard
二十一烷酸甘油三酯标准品

100 mg

21

0

◆分析实例


十一烷酸甘油三酯标准品

二十一烷酸甘油三酯标准品

反式脂肪酸研究用试剂

反式脂肪酸研究用试剂

【HPLC条件】                                      

色谱柱:Wakopak® Navi C18-5 4.6 mmφ x 25 cm

柱温:40℃

流动相:CH3CN/CHCl3=75/25

流速:1.0 mL/min

检测器:CoronaCAD

【HPLC条件】                                      

色谱柱:Wakopak® Navi C18-5 4.6 mmφ x 25 cm

柱温:40℃

流动相:CH3CN/CHCl3=55/45

流速:1.0 mL/min

检测器:CoronaCAD

◆脂肪酸酯研究用试剂

饱和脂肪酸甲酯标准品

产品编号

产品名称

包装

脂肪酸碳数目

不饱和度

135-07963

Methyl Palmitate Standard

棕榈酸甲酯标准品

1 g

16

0

139-07961

5 g

136-07971

Methyl Stearate Standard

硬脂酸甲酯标准品

5 g

18

0

130-17261

Methyl Arachidate Standard

二十烷酸甲酯标准品

100 mg

20

0

单不饱和脂肪酸甲酯标准品

产品编号

产品名称

包装

脂肪酸碳数目

不饱和度

139-08583

Methyl Oleate Standard(9-cis) (C18)

油酸甲酯标准品

1 g

18

1

133-17251

Methyl cis-11-Octadecenoate Standard

顺-11-十八碳烯酸甲酯标准品

100 mg

18

1

137-17271

Methyl cis-11-Eicosenoate Standard

顺-11-二十碳烯酸甲酯标准品

100 mg

20

1

136-17241

Methyl Elaidate Standard

反-9-十八碳烯酸甲酯标准品

100 mg

18

1

亚油酸、α-亚麻酸

产品编号

产品名称

包装

脂肪酸碳数目

不饱和度

125-05821

Linoleic Acid, from Plants

亚油酸

5 g

18

2

123-05822

25 g

122-05831

α-Linolenic   Acid, from Plants

α-亚麻酸

1 g

18

3

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