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mtDNA Extractor® CT Kit 提取组织 · 细胞 · 复合饲料中的线粒体DNA

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mtDNA Extractor® CT Kit
提取组织 · 细胞 · 复合饲料中的线粒体DNA

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mtDNA Extractor® CT Kit 提取组织 · 细胞 · 复合饲料中的线粒体DNA

mtDNA Extractor® CT Kit

提取组织 · 细胞 · 复合饲料中的线粒体DNA



　　本产品是可在短时间内提取哺乳动物组织以及细胞内的线粒体DNA（mtDNA）的试剂盒。此外，还可用于从复合饲料中提取mtDNA。


◆特点


l　只需少量组织样品（5 mg），即可提取适用于 PCR 反应的 mtDNA。

l　从 50 mg组织（ 250 mg 骨骼肌） 中提取的mtDNA可通过琼脂糖凝胶电泳确认。

l　所提取的mtDNA纯度高，后续可用于PCR和限制性内切酶酶切分析。

l　可从冷冻组织中提取mtDNA。

l　无需添加如苯酚、氯仿等有机溶剂。


◆原理


1. 通过离心从细胞裂解液中获得线粒体断片。

2. 为除去线粒体断片中的基因组DNA，本试剂盒采用质粒DNA纯化中的碱-SDS方法，通过使基因组DNA碱发生变性并沉淀析出后，回收mtDNA（环状DNA）。

3. 使用碘化钠令混入的蛋白质等变为可溶性物质，再通过洗涤缓冲液纯化mtDNA。



◆试剂盒组成

1. Buffer for Homogenate（匀浆缓冲液）

2. DNA Extraction Solution 1

3. DNA Extraction Solution 2(A)

4. DNA Extraction Solution 2(B)

5. DNA Extraction Solution 3

6. 碘化钠溶液

7. 洗涤液



◆实验流程


mtDNA Extractor® CT Kit 提取组织 · 细胞 · 复合饲料中的线粒体DNA

◆实验示例

从小鼠的新鲜组织以及冷冻组织中提取mtDNA


mtDNA Extractor® CT Kit 提取组织 · 细胞 · 复合饲料中的线粒体DNA


从小鼠的新鲜组织中提取的mtDNA，取其中一半用Pst l处理，通过琼脂糖凝胶电泳进行确认。


mtDNA Extractor® CT Kit 提取组织 · 细胞 · 复合饲料中的线粒体DNA


从小鼠的冷冻组织中提取的mtDNA，取其中一半用Pst l处理，通过琼脂糖凝胶电泳进行确认。

◆使用过程中的注意事项


　　由于使用本试剂盒提取的mtDNA量较少，因此需要通过GelRed™染色才能在凝胶上被检测出来。本试剂盒无法用于溴化乙锭染色检测。

※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。


产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
291-55301 mtDNA Extractor CT Kit 
DNA提取试剂盒（从哺乳动物线粒体中提取）		 25 tests 组织型mtDNA提取用

DNA分离PS-快速试剂

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DNA分离PS-快速试剂

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DNA分离PS-快速试剂DNA分离PS-快速试剂

 


　　20分钟即可从石蜡包埋组织切片提取DNA的试剂。

 


◆特点

●　无需脱石蜡处理和蛋白质分解处理。

●　约20分钟即可短时间提取DNA。

●　适用于500 bp以下的DNA扩增。

●　混入极微量的PCR抑制剂。



◆组成

　　DNA Isolation Solution・・10 mL×5个（眼科滴瓶型管）  ※眼科滴瓶型管1滴约30 μL

 


◆数据

　　以各组织的石蜡包埋切片提取DNA为模板进行β-globin基因扩增。


DNA分离PS-快速试剂


产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
291-56401 石蜡组织切片DNA快速提取试剂
DNA Isolator PS-Rapid Reagent		 100次 基因研究用 –
166-21671 2-丙醇 2-Propanol 100 mL 分子生物学用 –
168-21675 2-丙醇 2-Propanol 500 mL 分子生物学用 –
052-07221 乙醇（99.5） Ethanol (99.5) 100 mL 分子生物学用 –
054-07225 乙醇（99.5） Ethanol (99.5) 500 mL 分子生物学用 –

ISOTISSUE 从动物组织提取DNA试剂盒

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ISOTISSUE
从动物组织提取DNA试剂盒

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ISOTISSUEISOTISSUE 从动物组织提取DNA试剂盒

从动物组织提取DNA试剂盒


　　ISOTISSUE 用于从动物组织提取基因组DNA。无需使用苯酚、氯仿等有害物质。使用微量离心管，操作简便。整个实验只需３小时即可完成。可提取数十～数百kbp的高纯度基因组DNA ，可用于限制性内切酶底物及PCR。



◆特点

　　•　提取数十～数百kbp的基因组DNA

　　•　无需苯酚、氯仿

　　•　使用微量离心管（1.5 mL微型管），操作简便


◆产品内容

ISOTISSUE （3次用量，30次用量）

产品

容量（3次用量）

容量（30次用量）

备注

Extraction   Buffer

1 mL × 2

20 mL × 1

若有SDS析出，请在37°C条件下进行孵化，待析出物溶解后即可使用。

20 mg/ml   Proteinase K

150 µL × 1

1.5 mL × 1

5M NaCl

0.7 mL × 1

7 mL × 1

TE (pH 8.0)

1 mL × 2

20 mL × 1

10 mg/ml 

　　RNase   A

20 µL × 1

0.2 mL × 1

可能会有白色沉淀析出，但不影响品质及性能。若有沉淀析出，请进行离心，取上清液使用。

3M Sodium   Acetate (pH 5.2)

0.2 mL × 1

1 mL × 2

3M LiCl

0.7 mL × 1

7 mL × 1

使用前，请调制Wash Solution（0.3M LiCl、15mM Sodium Citrate、75% Ethanol）

150 mM Sodium   Citrate

0.7 mL × 1

7 mL × 1

使用前，请调制Wash Solution（0.3M LiCl、15mM Sodium Citrate、75% Ethanol）

备注：不含异丙醇、乙醇及灭菌水。

◆使用实例

操作流程

ISOTISSUE 从动物组织提取DNA试剂盒

　　*注释部分请参考产品手册。

Data 1：从小鼠各组织提取基因组DNA

　　对从小鼠各组织提取的基因组DNA进行脉冲场凝胶电泳，结果及回收量标准如下。

ISOTISSUE 从动物组织提取DNA试剂盒

小鼠组织

DNA（µg/mg tissue）

肝脏

0.5 ～ 1

肾脏

0.2 ～ 1

心脏

0.5 ～ 1.5

Data 2：对从小鼠各组织提取的基因组DNA进行限制性内切酶处理


　　使用 EcoRⅠ，对从小鼠各组织提取的基因组DNA进行限制性内切酶消化处理。


ISOTISSUE 从动物组织提取DNA试剂盒



Data 3：以从小鼠各组织提取的基因组DNA为模板进行PCR，扩增DNA


　　以小鼠各组织提取的基因组DNA为模板进行PCR，扩增含有 β-actin 基因的DNA 断片。

组织提取的基因组DNA为模板进行PCR，扩增DNA


ISOTISSUE 从动物组织提取DNA试剂盒


标记物4 （φ X174 DNA/ Hae Ⅲ）

心脏

胃

肾脏

                                     Agarose X 3%gel

                            TAE Buffer 50V 80min.
   使用Taq DNA Polymerase (Gene Taq )

备注：本产品为实验研究试剂。请勿用于医疗或其他用途。



◆资料 Data Sheet

 

产品手册

  • ISOTISSUE 第四版 (PDF 470KB)

SDS(Safety Data Sheet)

  • ISOTISSUE (PDF)

产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
317-03103 ISOTISSUE 3次用量 – –
311-03101 ISOTISSUE 30次用量 – –

ISOSPIN Blood & Plasma DNA 全血、血清、血浆提取DNA试剂盒

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ISOSPIN Blood & Plasma DNA
全血、血清、血浆提取DNA试剂盒

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ISOSPIN Blood & Plasma DNAISOSPIN Blood & Plasma DNA 全血、血清、血浆提取DNA试剂盒

全血、血清、血浆提取DNA试剂盒



ISOSPIN Blood & Plasma DNA 全血、血清、血浆提取DNA试剂盒


ISOSPIN Blood & Plasma DNA 50次用量


　　ISOSPIN Blood & Plasma DNA 是能够从全血、血清、血浆中提取DNA的试剂盒。

　　使用本产品能有效地在30分钟内提取出DNA。利用在高离序盐状态下DNA能吸附在二氧化硅的原理，无需苯酚和氯仿等有毒有机溶剂。通过离心柱提取DNA，简单的操作就能获得稳定产量的高品质DNA。

　　本产品不仅能从血液中提取染色体组DNA，也能提取循环DNA、及长期保存中出现断片化的DNA。



◆特点

　　

　　•　能从各种血液样本中提取DNA

　　•　有效回收断片化的DNA、循环DNA

　　•　使用离心柱仅需30分钟，操作简单

　　•　无需苯酚和氯仿等有毒有机溶剂

　　•　柱容量大（900 µL），便于提高容量



◆产品组成


ISOSPIN Blood & Plasma DNA （50次用量）


产品

包装

保存

备注

Proteinase K

1 mL × 1

-20°C

 –

BE Buffer

15 mL × 1

室温

 –

BW1 Buffer

48 mL × 1

室温

含乙醇

BW2 Buffer

35 mL × 1

室温

含乙醇

Elution Buffer

14 mL × 1

室温

洗脱液

离心柱

50支 × 1

冷藏

上部：吸附柱

下部：收集管

收集管

50支 × 2

室温

收集管可以单独销售


◆运送方法

　　从NIPPON GENE直接输送的情况下，放入室温品和冷藏品的试剂盒与放入－20°C干冰塑料盒装入纸箱中并在常温下进行输送。


◆使用实例

简易步骤

ISOSPIN Blood & Plasma DNA 全血、血清、血浆提取DNA试剂盒

Data 1: 从各种血液样本提取DNA

　　使用 ISOSPIN Blood & Plasma DNA 与其他公司产品从各种200 µL血液样品中提取DNA。实验按照各提取试剂盒指南进行，均取80 µL洗提液量，以进行回收量的比较。


ISOSPIN Blood & Plasma DNA 全血、血清、血浆提取DNA试剂盒

　

各种血液样本：

　　①　人 EDTA2Na 保存血液

　　②　人 EDTA2K 血液

　　③　人肝磷脂血液

　　④　人柠檬酸钠血液

　　⑤　马保存血液

　　⑥　绵羊保存血液

　　

①…使用冷冻保存血液

②③④…采血后，当天进行提取

⑤⑥…采血后与含有柠檬酸钠等物质的保存液以1：1的比例混合为保存血液使用


结果

　　ISOSPIN Blood & Plasma DNA 与其他公司产品相比在各种血液样本中回收DNA有相同或更高的回收量。

Data 2：血浆中提取循环DNA

　　使用 ISOSPIN Blood & Plasma DNA 与其他公司产品从 240 µL 母体血浆中提取循环DNA，用实时 PCR 定量于Y染色体上的胎儿遗传基因（DYS14及SRY）。实验按照各提取试剂盒指南进行，均取30 µL洗提液量，并进行比较。


ISOSPIN Blood & Plasma DNA 全血、血清、血浆提取DNA试剂盒

结果

　　

ISOSPIN Blood & Plasma DNA 比其他公司产品在血浆样本中，循环DNA有更高的回收量。

◆使用注意

　　

　　•　本产品仅用于实验研究，不能作医药及其他目的使用。

　　•　不熟悉试剂相关基础知识的人士请勿操作。

　　•　请按照指南记载内容操作使用本产品。

　　•　因不按照指南操作而导致的问题，Nippon Gene 公司恕不负责任。


◆资料 Data Sheet

产品指南

　　•　ISOSPIN Blood & Plasma DNA (PDF 377 KB)


SDS(Safety Data Sheet)

　　•　ISOSPIN Blood & Plasma DNA (PDF)


宣传册子

　　•　ISOSPIN Blood & Plasma DNAパンフレット（PDF 1.1MB）

◆相关产品

  • ISOGEN-LS　液体样品提取RNA试剂

  • Collection      Tube　收集管单品套装

  • Ribonuclease（DNase free）Solution

  • Ribonuclease（DNase free）Glycerol Solution

  • GeneAce      SYBR qPCR Mix α　实时PCR用试剂（SYBR Green检验系列）

  • GeneAce      Probe qPCR Mix α　实时PCR用试剂（荧光标记探针检验系列）

产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
312-08131 ISOSPIN Blood & Plasma DNA 50次用量 – –

ISOPLANT II DNA快速提取试剂（植物/酵母/细菌）

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ISOPLANT II
DNA快速提取试剂（植物/酵母/细菌）

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ISOPLANT IIISOPLANT II DNA快速提取试剂（植物/酵母/细菌）

DNA 快速提取试剂（植物/酵母/细菌）

　　ISOPLANT II 是可以迅速地从植物・酵母・细菌提取 DNA 的试剂盒。与旧产品 ISOPLANT 一样，利用 Solution II 的主要成分氯化苄，对细胞壁进行破坏，在表面活性剂的作用下，使其溶解。植物组织的多糖及多酚比植物组织多，提取时常混入 DNA 中。这些物质抑制限制性内切酶反应及 PCR，难以对 DNA 进行定量测定。改良后的新产品 ISOPLANT II，可有效去除多糖及多酚等抑制物质。不仅可以从草本植物提取，还可以从难度较大的木本植物提取，提取到的 DNA 可用于 PCR 及限制性内切酶反应。

◆特点

　　•　迅速地从植物・酵母・细菌提取基因组 DNA

　　•　无需使用臼等工具捣碎材料，便于处理多个样品

　　•　经改良，可有效去除抑制物质（多糖及多酚）

◆产品列表


保存方法

　　

冷蔵保存（2～10°C）

　　若长时间不使用 RNase A ，请冷冻保存（-20°C）。除了 RNase A ，其他产品可以室温保存。

ISOPLANT II （20回分、100回分）

产品

容量（20次）

容量（100次）

备注

Wash Buffer

20 mL × 1

100 mL × 1

Solution I

6 mL × 1

30 mL × 1

可能析出白色沉淀，但不影响品质。请进行37°C左右的水浴，待结晶完全溶解后即可放心使用。

Solution II

3 mL × 1

15 mL × 1

主要成分是氯化苄。氯化苄为危险品，请小心使用。

Solution III-A

2 mL × 1

10 mL × 1

Solution III-A为白色悬浊液，蒸发后只剩下白色固相，请使用灭菌蒸馏水溶解。

Solution III-B

2.5 mL × 1

12 mL × 1

TE（pH8.0）

2 mL × 1

10 mL × 1

10 mM Tris-HCl（pH8.0）, 1 mM   EDTA

RNase A

（1 mg/mL）

20 µL × 1

100 µL × 1

若长时间不使用RNase A ，请冷冻保存（-20°C）。



◆使用实例


操作流程


植物

酵母、细菌

ISOPLANT II DNA快速提取试剂（植物/酵母/细菌）

ISOPLANT II DNA快速提取试剂（植物/酵母/细菌）


实验数据


1. 使用从植物叶子提取的DNA进行RAPD分析

2. 使用从植物叶子提取的DNA进行制限性内切酶反应

3. 从细菌、酶提取得DNA进行制限性内切酶反应

4. ISOPLANT II与旧产品（ISOPLANT）的纯度比较

Data 1：使用从植物叶子提取的 DNA 进行 RAPD 分析

　　分别使用各样品 0.1 g 冻结粉碎的叶子的1/100提取到的 DNA ，进行 RAPD 分析。


RAPD-PC

PCR Mixture

PCR条件

Template DNA

1 µL

95°C

3 min.

1 cycle

10×Gene Taq Universal Buffer

5 µL

40°C

5 min.

dNTP Mixture (2.5 mM each)

4 µL

72°C

1 min.

Arbitrary Primer(AP-A-2 primer) (10 µM)

1 µL

Gene Taq (5 units/µL)

0.25 µL

95°C

15 sec.

25 cycles

H2O

38.75 µL

40°C

2 min.

Total Volume

50 µL

72°C

1 min.

72°C

5 min.

结果

ISOPLANT II DNA快速提取试剂（植物/酵母/细菌）

lane 1. 西瓜

lane 2. 黄瓜

lane 3. 南瓜

lane 4. 玉米

lane 5. 水稻

lane 6. 葱

lane 7. 豆子

lane 8. 烟草

lane 9. 菠菜

lane 10. 银杏

lane 11. 苹果

lane 12. 牡蛎

lane 13. 桃

lane 14. 柚子

lane 15. 梅干

lane 16. 梨

M : Marker 4 (φX174/Hae III)

　

   Arbitrary Primer: AP-A-2(TGGATTGGTC)

　Taq DNA polymerase: Gene Taq

　3% Agarose 21


Data 2：使用从植物叶子提取的 DNA 进行制限性内切酶反应

　　分别使用各样品 0.1 g 冻结粉碎的叶子的1/20提取到的 DNA，进行制限性内切酶反应（5～20 units）。

ISOPLANT II DNA快速提取试剂（植物/酵母/细菌）

lane 1. 烟草

lane 2. 菠菜

lane 3. 胡萝卜

lane 4. 梨

lane 5. 水稻

lane 6. 茶

lane 7. 柚子

lane 8. 苹果

M : Marker 2 (λ/Hind III・EcoR I)

a : intact DNA

b : Hind III digest + RNase A

　　　　　　　0.8% Agarose S 

　　•注意事项　提取DNA时进行 NaBH4 处理，获得上述数据。

Data 3：从细菌、酵母提取的 DNA 进行制限性内切酶反应

　　分别取 1/20 从 1.5 mL 培养液体提取到的 DNA，进行制限性内切酶反应（5～20 units）。

ISOPLANT II DNA快速提取试剂（植物/酵母/细菌）

lane 1. 粘质沙雷氏菌　Serratia marcescens

lane 2. 牛莫拉氏杆菌　Moraxella bovis

lane 3. 流感嗜血杆菌C 　Haemophilus influenzae c

lane 4. 普通变形杆菌　Proteus vulgaris

lane 5. 裂殖酵母　Shizosaccharomyces pombe

lane 6. 毕赤酵母　Pichia pastoris

lane 7. 酿酒酵母　Sacaomyces cerevisiae

M : Marker 2 (λ/Hind III・EcoR I)
a : intact DNA
b : Hind III digest + RNase A 

　　　　　　　0.8% Agarose S 


Data 4：ISOPLANT II 与旧产品（ISOPLANT）的纯度比较


　　使用相同的样本量，分别用 ISOPLANT II 及旧产品（ISOPLANT）从菠菜及苹果叶子提取 DNA，检测吸光度（200～300 nm）

菠菜

苹果

ISOPLANT II DNA快速提取试剂（植物/酵母/细菌）

ISOPLANT II DNA快速提取试剂（植物/酵母/细菌）

　　

　　使用 ISOPLANT II 提取 DNA，在 260 nm 有峰值。表明 DNA 不含多糖及多酚等夹杂物，纯度较高。


◆备注


　　本产品为实验研究用试剂，不可用于医疗或其他用途。

　　不了解试剂基本知识的人士请不要使用。

◆相关产品

　

　　•　 从植物・酵母・细菌提取DNA试剂盒　ISOPLANT

参考文献


[ 1 ]　Xing S. and Aharon G.: Analytical Biochemistry, 174, 650-657 (1988)

[ 2 ]　C. S. Kim, C. H. Lee, J. S. Shin, Y. S. Chung and N. I. Hyung: Nucleic Acids Res., 25 (5) 1085-1086 (1997)

产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
316-04153 ISOPLANT II 20次 – –
310-04151 ISOPLANT II 100次 – –

ISOPLANT DNA快速提取试剂(植物/酶/细菌)

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ISOPLANT
DNA快速提取试剂(植物/酶/细菌)

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ISOPLANTISOPLANT DNA快速提取试剂(植物/酶/细菌)

DNA 快速提取试剂（植物/酶/细菌）

ISOPLANT DNA快速提取试剂(植物/酶/细菌)


　　ISOPLANT 是一种可以迅速地从植物・酶・细菌提取 DNA 的试剂盒。

　　利用其主要成分氯化苄，破坏细胞壁、细胞膜及核膜，在表面活性剂的作用下，使其溶解，尤其是植物样品，无需捣碎即可提取 DNA。此试剂盒便于处理多个样品。从双子叶植物及单子叶植物提取 DNA 时，无需进行预处理。提取到的 DNA 可用于 PCR 及限制性内切酶反应。

 


◆特点


•　迅速地从植物・酶・细菌提取基因组 DNA

•　无需使用臼等工具捣碎材料，便于处理多个样品

•　从双子叶植物及单子叶植物提取 DNA 时，无需进行预处理

 


◆产品列表


保存方法

　　

冷藏保存（2～10°C）

　　若长时间不使用 RNase A，请冷冻保存（-20°C）。除了 RNase A ，其他可以室温保存。

 

ISOPLANT （20次、100次）

组成

容量

（20次）

容量

（100次）

备注

Solution I

Extraction Buffer

6 mL × 1

30 mL × 1

可能析出白色沉淀，但不影响品质。请进行37°C左右的水浴，待结晶完全溶解后即可放心使用。

Solution II

Lysis Buffer

3 mL × 1

15 mL × 1

主要成分是氯化苄。氯化苄为危险品，请小心使用。

Solution III

Sodium Acetate

3 mL × 1

15 mL × 1

–

TE（pH8.0）

2 mL × 1

10 mL × 1

10 mMTris-HCl（pH8.0）, 1 mM EDTA

RNase A

（1 mg/mL）

20 µL × 1

100 µL × 1

若长时间不使用RNase A，请冷冻保存（-20°C）。

 

◆使用实例

 

操作步骤


ISOPLANT DNA快速提取试剂(植物/酶/细菌)

 

* 若材料为植物，0.01 ～ 0.1 g 材料用剪刀剪取得到3-5 mm小块。根据植物种类，体积有所不同。添加 Solution II 时，使材料完全浸泡于下层溶液（Solution II）。此外，尽量使用新鲜材料。冻结保存试剂过长会导致回收率下降。若材料为酶、细菌，使用 1.5 mL culture 离心后得到的沉淀（～ 0.03 g）。

实验数据

 

ISOPLANT DNA快速提取试剂(植物/酶/细菌)从植物提取DNA.pdf

ISOPLANT DNA快速提取试剂(植物/酶/细菌)从细菌提取DNA.pdf

ISOPLANT DNA快速提取试剂(植物/酶/细菌)从酶提取DNA.pdf

ISOPLANT DNA快速提取试剂(植物/酶/细菌)从放线菌、霉提取DNA.pdf


◆备注


•　本产品为实验研究用试剂。请勿用于医疗或其他用途。

•　不了解试剂基本知识的人士请不要使用。



◆相关产品

　　•　从植物・酶・细菌提取DNA试剂盒　ISOPLANT II


Q：若使用 ISOPLANT 提取 DNA 効率较低，该如何改善？

A：请尝试如下方法。　　

     ISOPLANT DNA快速提取试剂(植物/酶/细菌)使用ISOPLANT提高回收量的方法.pdf

Q：使用植物材料时，即使添加了 Solution II，材料的形态还是没有发生改变。为什么会出现这种情况？

A：按照一般步骤进行处理时，肉眼无法观察期形态变化。浸泡在 Solution II，长时间放置后，形态发生变化。但是最终提取到的 DNA 溶液中

      杂质会增多。

 

Q：使用果树等较硬的叶子时，按照一般的步骤进行操作后，DNA 的回收量较少。该怎样解决？

A：可事前使用液态氮冻结材料，然后将其粉碎。

 

Q：可以从动物组织、细胞分离 DNA 吗？

A：该产品不适用。但是实验证明，可以从虾提取 DNA。目前，，已经过实验证明，使用本试剂盒可以提取出 DNA 的材料有植物、细菌、酵

       母菌、霉等。

　 （请参考上述实验数据）

参考文献


[ 1 ]  Anil K. Jhingan, Methods in Molecular and Cellular Biology, 3, 15（1992）

[ 2 ]  HengZho, Nucleic Acids Research, 21（22）,　5279（1993）

产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
310-02733 ISOPLANT 20次 – –
314-02731 ISOPLANT 100次 – –

ISOHAIR EASY 从发根提取DNA试剂盒

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ISOHAIR EASY
从发根提取DNA试剂盒

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从发根提取 DNA 试剂盒ISOHAIR EASY 从发根提取DNA试剂盒

ISOHAIR EASY


　　本试剂可简便地从发根提取 DNA。提取到的 DNA 溶液无需纯化，可直接用作核酸扩增法的模板。



◆特点


　　从人的发根提取 DNA，操作简便，仅需30分钟左右。

◆使用实例


　　准备实验材料（使用乙醇清洗毛发）

 ISOHAIR EASY 从发根提取DNA试剂盒



以 ISOHAIR EASY 为例


　　1. 取３根毛发（带发根），使用剪刀剪断发根约 1.5 cm 处。

　　　 ※确认取得的毛发带有发根（右图）。*1

　　2. 往 1.5 mL 离心管注入 300 μL乙醇，再用镊子*2放入３条发根。

　　3. 倒转混合几次后，简单清洗一下。取出发根，置于滤纸或无尘纸上，挥发乙醇。



提取核酸


　　1. 将 ISOHAIR EASY 置于室温，使其溶解，倒转混合均匀后，降速，并静置于冰块上。

　　2. 往 0.2 mL 离心管注入 50 μL ISOHAIR EASY，再放入３条发根。

　　3. 孵化

　　　55°C、孵化 20 分钟*3

　　　94°C、孵化 10 分钟

　　　置于冰块上迅速冷却至４°C

　　4. 使用移液管混合后，将上清液移至 1.5 mL 离心管（尽量不取出不溶物），用作 DNA 提取液。*4

　　　 ※使用本产品可从3根毛发提取 1～6.5 ng/μL 的 DNA 。*5

　　*1　无法肉眼观察到发根的材料或自然脱落的毛发可能无法提取到足够的核酸。

　　*2　为防止污染，每次使用镊子前请使用乙醇清洗。

　　*3　使用 ISOHAIR EASY 孵化毛发时，无法用肉眼观察到变化，实际上，已有 DNA 析出。

　　*4　若不溶物浮于上方，难以取出上清液，请将全部溶液移至 1.5 mL 离心管，进行离心（12,000 rpm× 2 min）后，取出上清液。

              0.2 mL 离心管的耐离心力较低，不建议使用。

　　*5　根据个人发质，毛发提取 DNA 量有所不同。即使是同一个人的毛发，每根毛发的提取 DNA 量也不同。

 


◆Data 1：实时 PCR 法的利用


　　使用 ISOHAIR EASY 从 A、B、C ３人的各３根毛发配制成２μLDNA提取液，将其作为模板，使用GeneAce SYBR® qPCR Mix α No ROX，进行实时PCR，检测出Gap基因(GAPDH)。（装置：LightCyclerR 96）

 

反应液组成：


2×GeneAce SYBR® qPCR Mix α No   ROX

12.5 µL

Primers（5 µM each）

2.0 µL

DNA提取液（发根基因组DNA）

2.0 µL

d.d.H2O

up to 25.0 µL

 


反应条件：


95°C

10 min.

酶活性化处理

95°C

30 sec.

45次循环

60°C

1 min.

–

 

•溶解曲线分析

　　＜结果＞

溶解曲线

ISOHAIR EASY 从发根提取DNA试剂盒

标准曲线

ISOHAIR EASY 从发根提取DNA试剂盒

使用Human genomic DNA（Clontech公司），以控制标准曲线。



◆Data 2：LAMP 法的利用


　　使用 ISOHAIR EASY 及 A、B ２人的各３根毛发配制成４μlDNA提取液，将其作为模板，使用 Isothermal Master Mix，利用 LAMP 引物扩增目标域（IL28B基因），并对其扩增产物进行会合曲线分析。（装置：Genie® II）


Isothermal Master Mix

15.0 µL

LAMP Primers

2.5 µL

DNA提取液(发根基因组DNA)

4.0 µL

d.d.H2O

up to 25.0 µL

扩增

63°C、60分钟

会合曲线分析

98°C-75°C、0.05°C/秒



　　＜结果＞

溶解曲线

ISOHAIR EASY 从发根提取DNA试剂盒


Annealing Derivative

ISOHAIR EASY 从发根提取DNA试剂盒

（注）LAMP法的原理是使用4种引物及链置换DNA 合成酶，在一定温度下(65°C左右)，使其发生反应，从而扩增基因。



◆备注

  • 本产品为实验研究用试剂。请勿用于医疗或其他用途。

◆产品列表


ISOHAIR  EASY (100次用量)

产品

包装

保存

备注

ISOHAIR EASY

1,000 μL × 5 瓶

-20°C



◆相关产品

  • 毛发・爪提取人DNA试剂盒　ISOHAIR

  • 教育用生物实验　ISOHAIR Jr.

    Q：　　ISOHAIR（Code No. 315-03403）及 ISOHAIR EASY（Code No. 319-07781）的区别是什么？

    A：　　「ISOHAIR」与「ISOHAIR EASY」的区别如下表所示。ISOHAIR EASY 可从发根简单地提取 DNA，必须使用有发根的样品。

    ISOHAIR

    ISOHAIR EASY

    样品

    ・人毛发： 
       发根样本取毛发的发根处１cm左右、毛干样本取发根样本的

       前２～６cm。（亦可使用自然脱落的毛发）
    ・人指甲： 

       使用指甲钳剪取指甲，再使用剪刀剪取边约１mm的缘部分，

       剪取２个（0.5mg）左右。
    ・小鼠体毛：

       使用剪刀剪取一撮（约５mg）体毛。

    ・小鼠指甲：

       剪取１～２mm长度的指甲。
       ＊使用新鲜的样品回收量更高。

    ・人的发根：
       取发根处 1.5 cm。（肉眼无法确认是否为发根的材料

       或自然脱落的毛发可能无法提取足够的核酸。）
        ISOHAIR EASY 从发根提取DNA试剂盒

    操作用时

    ・约１小时

    ・约30分钟

    提取结果

    ・溶解毛发
       左：第一次孵化后（55℃，20 分）
       右：第二次孵化后（ 55℃，5～10 分）　

    　＜完全溶解＞
       

    ISOHAIR EASY 从发根提取DNA试剂盒

    ・使用 ISOHAIR EASY 进行孵化时，肉眼看不出变化。

      （肉眼看上去还没有溶解，实际上已有 DNA 析出）

    产品列表
    产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
    319-07781 ISOHAIR EASY 100次 – –

    ISOHAIR 从毛发・指甲提取DNA试剂盒

    发表于由

    ISOHAIR
    从毛发・指甲提取DNA试剂盒

    • 产品特性
    • 相关资料
    • Q&A
    • 参考文献

    ISOHAIRISOHAIR 从毛发・指甲提取DNA试剂盒



    ISOHAIR 从毛发・指甲提取DNA试剂盒


    ISOHAIR 100次用量


    　　从人的毛发及指甲提取DNA 是法医领域一项非常重要的技术。该技术可以简单迅速地提取DNA，从分子生物学领域来说，与至今一直使用的血液及组织等主要实验材料相比，受病毒感染的可能性较低，获得实验材料途径简单。

    　　ISOHAIR是从人毛发、指甲提取DNA的试剂盒。毛发及指甲的主要成分角蛋白，难以分解，完全溶解毛发必须使用含有一般蛋白质分解酶缓冲剂，进行长时间的孵化。本产品只需30分钟左右，即可完全溶解毛发。操作简单，而且总时间仅需1小时左右即可提取DNA。提取人基因组DNA也非常方便。此外，本产品亦可用于提取小鼠体毛及指甲DNA。

    ◆特点

    　

    •　可从人的毛发及指甲提取 DNA

    •　操作简单，提取 DNA 仅需１小时左右

    •　亦可提取小鼠体毛及指甲DNA



    ◆产品列表

    保存方法

    冷冻保存（-20°C）

    ISOHAIR （10回用、100回用）

    产品

    容量

    （10次用量）

    容量

    （100次用量）

    备注

    Extraction Buffer

    1 mL x 2

    20 mL x 1

    可能会有白色结晶析出，但是不影响品质。若有此情况出现，请进行50℃的热水浴，待结晶完全溶解后即可使用。

    Enzyme Solution

    100 µL x 1

    1 mL x 1

    Lysis Solution

    80 µL x 1

    0.8 mL x 1

    Ethachinmate

    20 µL x 1

    0.2 mL x 1

    3M Sodium Acetate (pH5.2)

    200 µL x 1

    2 mL x 1

    TE (pH8.0)

    200 µL x 1

    1 mL x 2

    ◆使用实例

    操作流程

    ISOHAIR 从毛发・指甲提取DNA试剂盒

    ◆实验数据

    下表实例的详细情况请参考　ISOHAIR实验数据汇总（PDF 744 KB）。

    [人 毛发]

    1.    检测出线粒体 DNA

    2.    检测出 p53 基因

    3.    检测 MCT118

    4.    使用 T4 gene 32 protein，缓和 PCR 阻碍

    5.    从毛发提取到的 DNA 量

    6.    毛发的部位及 DNA 量

    7.    脱毛后经过时间及 DNA 量

    8.    PCR 条件

    [人 指甲]

    1.    检测出线粒体 DNA

    2.    检测出 p53 基因

    3.    检测 MCT118

    [小鼠 体毛]

    1.    检测出线粒体 DNA

    2.    检测出 p53 基因

    [小鼠 指甲]

          1. 　检测出线粒体 DNA 及 p53 基因

    [人的毛发、指甲、口腔粘膜]

          1. 　使用人的毛发、指甲、口腔粘膜进行实验的实例

    ◆备注

    　　

    •　本产品为实验研究用试剂。请勿用于医疗或其他用途。

    •　感谢独立行政法人水产综合研究中心中央水产研究所　小林敬典老师的指导。



    ◆相关产品

    　　•　发根提取DNA试剂盒　ISOHAIR EASY

    　　•　教育用生物实验　ISOHAIR Jr.（ISOHAIR、PCR 试剂、琼脂糖电泳试剂套装）

    　　•　酒精沉淀用共沉淀剂　Ethachinmate

    　　•　缓冲剂　ddWater, TE(pH 8.0)



    Q：　　DNA 提取试剂盒「ISOHAIR」与「ISOHAIR EASY」的区别是什么？

    A：　　「ISOHAIR」与「ISOHAIR EASY」的区别如下表所示。ISOHAIR EASY 可从发根简单地提取 DNA，必须使用有发根的样品。

    ISOHAIR

    ISOHAIR EASY

    样品

    ・人毛发： 
        发根样本取毛发的发根处1 cm左右、毛干样本取发根样本的

        前2～6 cm。（亦可使用自然脱落的毛发）
    ・人指甲： 

        使用指甲钳剪取指甲，再使用剪刀剪取边约1 mm的缘部分，

        剪取2个（0.5 mg）左右。
    ・小鼠体毛：

        使用剪刀剪取一撮(约5 mg)体毛。
    ・小鼠指甲：

        剪取1～2 mm长度的指甲。
       ＊使用新鲜的样品回收量更高。

    ・人的发根：
        取发根处1.5 cm。（肉眼无法确认是否为发根的材料或自然

        脱落的毛发可能无法提取足够的核酸。）


        ISOHAIR 从毛发・指甲提取DNA试剂盒

    操作用时

    ・约１小时

    ・约 30 分钟

    提取结果

    ・溶解毛发
       左：第一次孵化后（55℃, 20 分）
       右：第二次孵化后（ 55℃, 5～10 分）　＜完全溶解＞


    ISOHAIR 从毛发・指甲提取DNA试剂盒

    ・使用 ISOHAIR EASY 进行孵化时，肉眼看不出变化。

      （肉眼看上去还没有溶解，实际上已有 DNA 析出）


    Q：　　可以从牛毛提取 DNA 吗？

    A：　　使用「ISOHAIR」提取牛（荷斯坦牛、黑毛和牛）的头顶部分的毛发根部１cm处的DNA，取提取到的DNA的1/2进行了琼脂糖凝胶电泳。

                 成功提取了可用于 PCR 的 DNA。

    　　　  ISOHAIR提取牛毛DNA（PDF 600KB）



    参考文献

    　　[ 1 ] Wilson, M. R. Polanskey, D. Butler, J., Dizinno, J. A. Replogle, J. and Budowle, B. BioTechniques, 18 (4), 662-669(1995)

    　　[ 2 ] 笠井賢太郎,「蛋白质 核酸 酶」, 41 (5), 738-743(1996)

    　　[ 3 ] 吉井富夫, 田村一雄, 石山いく夫,「日法医志」, 46 (5), 313-316(1992)

    　　[ 4 ] Higuchi, R. von Beroldingen, C. H. Sensabaugh, G. F. and Erlish, H. A. NATURE, 332 (7), 543-546(1988)

    　　[ 5 ] 吉井富夫, 田村一雄, 谷口高広, 秋山勝則, 石山いく夫,「日法医志」, 47 (4), 323-329(1993)

    　　[ 6 ] Gill, P. Jeffreys, A. J. and Werrett, D. J. NATURE, 318 (12), 577-579(1985)

    　　[ 7 ] 安積順一, 森田匡彦, 美作宗太郎, DNA多态性, 7, 26-28 (1999)

    　　[ 8 ] 辻洋子, 西尾元, 松井清司, 鈴木広一, DNA多态性, 7, 29-33 (1999)

    产品列表
    产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
    315-03403 ISOHAIR 10次
    319-03401 ISOHAIR 100次

    ISOGENOME DNA提取试剂

    发表于由

    ISOGENOME
    DNA提取试剂

    • 产品特性
    • 相关资料
    • Q&A
    • 参考文献

    ISOGENOMEISOGENOME DNA提取试剂

    　　ISOGENOME 用于从组织及细胞提取基因组 DNA。

    　　本产品为含有胍及表面活性剂的溶液。加水分解 RNA 即可选择性回收 DNA。操作简单，便于大量提取及进行多个样品的处理。此外，配合RNA提取用试剂 ISOGEN II 使用，可从同一样本提取 RNA 和 DNA。

    　　往样品添加 ISOGENOME，进行溶解或均匀化，再进行乙醇沉淀、乙醇清洗、溶解，可快速提取 DNA。

    ◆特点

    ●　提取基因组 DNA 仅需 30 分钟左右

    ●　新鲜组织的基因组回收率达 70% 以上

    ●　配合 ISOGEN II 使用可提取 RNA 及 DNA

    ●　产品不含苯酚，操作中亦无须使用

    ●　提取到的 DNA 可直接应用于各种实验　Southernblotting、斑点杂交 dot-blot hybridization、克隆、PCR 等

    ◆使用实例

    操作前的注意事项

    ● 除了本产品，需准备乙醇（99.5%）、75%乙醇、8 mM NaOH、1M HEPES（用于调整pH）。
    ● 如需使用 1.5 mL 容量的离心管，步骤所用溶液请按比例缩小到 0.8 倍。
    ● 可在室温进行全程操作，但建议于 4～28°C环境下进行离心操作。
    ● 高分子的基因组 DNA 容易被切断，混合时应避免过于激烈的震荡或漩涡混合，应尽量平稳地进行充分的混    合。

    操作流程A：分离基因组 DNA

    ISOGENOME DNA提取试剂

    操作流程B：配合使用 ISOGEN II 分离 RNA、DNA（简易操作流程）


    ISOGENOME DNA提取试剂

    Data 1　DNA 回收量标准

     样品

    µg DNA／mg   tissue

    肝脏

    4.3 ± 0.7

    肾脏

    3.6 ± 0.2

    脾脏

    22.8 ± 4.1

    心脏

    2.0 ± 0.4

    肺

    2.5 ± 0.4

    骨骼肌

    0.8

    　　一般情况下，分离后的基因组 DNA 纯度（A260／A280）为 1.6～1.9，大小为 20～100 kbp。

     ◆产品内容

    ISOGENOME （10 mL、100 mL）

    产品

    包装

    保存

    备注

    ISOGENOME

    1瓶

    室温

    外观：绿色溶液
    容器：塑料瓶

     备注　本产品若长时间的低温保存，可能会析出少量的盐，但是不影响品质及性能。若出现该情况，请对各容器进行 55～65°C、30～60 分钟左右的孵化，并适当混合，待析出物完全溶解后即可使用。

     

    ◆备注

    ●　本产品仅适用于实验研究。请勿用于医疗用途。

    ◆相关产品

    ·　ISOGEN II RNA 提取试剂

    ·　Ethachinmate 酒精沉淀共沉淀剂

    ·　TE (pH8.0)

    ·　Distilled Water, Deionized, Sterile 去离子蒸馏水

    产品列表
    产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
    318-08111 ISOGENOME 10 mL – –
    314-08113 ISOGENOME 100 mL – –

    土壤DNA提取试剂盒 ISOIL for Beads Beating

    发表于由

    土壤DNA提取试剂盒
    ISOIL for Beads Beating

    • 产品特性
    • 相关资料
    • Q&A
    • 参考文献

    土壤DNA提取试剂盒土壤DNA提取试剂盒 ISOIL for Beads Beating

    ISOIL for Beads Beating

     


    ◆原理

    　　本品为土壤 DNA 提取试剂盒。利用珠状物的强物理性粉碎及试剂的溶菌作用，从具有坚固细胞壁的微生物中提取DNA。因此，可用于 PCR-DGGE 等分析上土壤微生物的群集构造，利用定量土壤 DNA 推算土壤生物量。

    　　土壤等环境中存在各种各样的微生物。但其中 99% 以上为不能培养，或极难培养的微生物。依赖培养法分析土壤微生物具有一定的局限性。因此，像这类坏境样品一般采用不经培养，直接提取 DNA 进行分析的手法。近几年普遍盛行：利用土壤和污泥等环境样品直接提取出的 DNA，进行基因复制及 PCR-DGGE 等分析微生物群集构造。

    　　海外制造商正在销售的集中土壤 DNA 提取试剂盒，都较难从黑土（占日本的国土的20%，耕地的50%）等火山灰土壤中提取 DNA，无法与日本的土壤相融合。本试剂盒适用于提取日本土壤 DNA，可短时间、高产率提取出高纯度 DNA。

     

           本品采用在界面活性剂存在下加热提取的方法作为 DNA 提取法。利用 Beads Beating（珠状粉碎），采用物理性菌体粉碎重组法。利用 Beads Beating 物理性截断，可从具有坚固细胞壁的微生物中，提取出反映实际土壤微生群集构造的土壤 DNA。因此，本品提取出的土壤 DNA，可用于 PCR-DGGE 等分析土壤微生物的群集构造和进行土壤诊断，利用定量土壤 DNA 推算土壤生物量等。DNA 提取时间大约需要60分钟。

           另外，使用本品时，请不要使用其他用途的 Beads Beating（珠状粉碎机）。

     

     

    ◆特征

    　● 可从火山灰土壤中提取 DNA

    　● 可有效提取高纯度 DNA

    　● 最短40分钟，即可提取出 DNA

    　● 容易按比例增加

    　● 可高效提取 DNA

    　● 适用于 PCR-DGGE 法及土壤 DNA 定量

     

     

    ◆内容

    ● ISOL

     

    Lysis Solution HE

    50 mL×1

    Lysis Solution   20S

    1.25 mL×2

    Purification Solution

    20 mL×1

    Precipitation Solution

    40 mL×1

    Wash Solution

    50 mL×1

    Ethachinmate

    100 µL×1

    TE(pH8.0)

    5 mL×1

    poly-roto

    1个

    手册

    1本

    保存条件

    室温

    产品列表
    产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
    319-06201 ISOIL for Beads Beating
    土壤DNA提取试剂盒    		 50次 – –