α-突触核蛋白聚集检测试剂盒
(ALPHA)-Synuclein Aggregation Assay Kit
α-突触核蛋白聚集检测试剂盒模拟在路易体痴呆、帕金森病、多系统萎缩中发现的细胞内α-突触核蛋白聚集。
本试剂盒可用于在细胞培养水平上,检测目标活性物质对细胞聚集的抑制和/或预防作用。
◆背景
痴呆症是导致记忆和辨别能力退化的疾病,还没有根治的方法。经过多年的科学研究证实,许多神经变性病(包括痴呆症)的大脑退化部位会发生蛋白凝聚,表明这种聚集的出现与这些疾病的发生和发展密切相关。
正常蛋白形式因特定原因形成异常结构并在细胞中积累时,会发生蛋白聚集,每种疾病有不同的聚集蛋白。目前已知在帕金森病、路易体痴呆、多系统萎缩病人脑内,α-突触核蛋白结构形成异常结构。
α-突触核蛋白聚集检测试剂盒模拟细胞内“α-突触核蛋白”的聚集情况,可用于在体外筛选活性成分。
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◆试剂盒组成
组成 |
容量 |
规格 |
保存 |
pCMV-SNCA(α – Synuclein 表达质粒,红盖) (浓度1.25 μg/μL) |
32 μL |
1 小瓶 |
4°C 不冻结 |
pCMV-NC(阴性对照,绿盖) (浓度1.25 μg/μL) |
5 μL |
1 小瓶 |
pCMV-dGFP(dGFP 表达质粒,蓝盖) (浓度1.25 μg/μL) |
5 μL |
1 小瓶 |
20 mM Tris-HCl Buffer(pH 7.4) |
10 mL |
1 瓶 |
F-αSyn(α – Synuclein 纤维,黄盖) (浓度1 μg/μL) |
32 μL |
1 小瓶 |
Multifectam(基因转染试剂) |
0.33 mg |
1 瓶 |
◆检测流程
◆实例
一 免疫印迹法 Western blotting(使用各种突触核蛋白抗体)
1、除去培养基。
2、每个孔添加 1 mL PBS,用移液器收集细胞。
3、离心(4,500 rpm [1,800 x g],5 分钟,室温),收集沉淀。
4、添加 0.1 mL 裂解缓冲液(10 mM Tris-HCl,pH 7.5 含 0.8 M NaCl,1 mM乙二醇双(2-胺基乙基醚)-N,N,N,N-四乙酸(EGTA),
1 mM DTT 和 1% N-月桂酰肌氨酸钠), 超声波混合。
5、离心(50,000 rpm [100,000 x g],20 分钟,室温)。
6、添加 40 µL 2 x SDS Buffer(0.125 M Tris-HCl pH6.8,200 mM 1,4二硫苏糖醇(DTT),4% 十二烷基硫酸钠(SDS),10%蔗糖,
0.01% BPB)至颗粒中,超声波混合,加热 (100 °C,5 分钟),进行 10 µL/well 的免疫印迹。
突触核蛋白抗体详情请点击此处。
二 淀粉样蛋白/物质荧光染色试剂盒
使用淀粉样蛋白/物质荧光染色试剂盒(Cosmo Bio,产品编号:CSR-SYN02-COS),可对已发生聚集的α-突触核蛋白和核仁进行双重染色。
阴性对照载体(pCMV-NC)
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相位图
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核染色
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突触核蛋白聚集
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使用α-突触核蛋白(pCMV-SNCA+F-α Syn)
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相位图
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核染色
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突触核蛋白聚集
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仅用于研究。不得用于人类基因治疗或临床诊断。